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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
冷藏
- 保质期:
长期
- 英文名:
Southern DNA Marker Oligo(Labeled by DIG)
- 库存:
785
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产销*(代"售")Southern DNA Marker Oligo(DIG标记)怎么卖,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:Southern DNA Marker Oligo(DIG标记)怎么卖
产地:国产|进口
品牌:百奥莱博
英文名:Southern DNA Marker Oligo(Labeled by DIG)
Southern DNA Marker Oligo(DIG标记)怎么卖极具性价比,此外,我公司正火爆促销以下产品:
·细胞核微量制备试剂盒
编号:BTN100601
英文名称:Nuclei Miniprep Kit
规格:50次
用高密度介质来分离动物软体组织(如肝脏、脾脏等)细胞核是目前主流的方法,它是由Chauveau于1956年发明,其原理是细胞核的密度较大,在高速离心条件下(40000g 1小时)可在高密度介质(2.2mol/l 蔗糖溶液)中沉降下来,从而达到与细胞质其它成分分开的目的。该方法能通过一步离心得到较高纯度的细胞核,得到广泛应用。本产品就是在Chauveau方法的基础上优化改进而来。
产品特点:
1.基于密度梯度分离,可有效去除细胞质及其他细胞器,得到的细胞核纯净。
2.加进*化*、*化*、*化*(代"*")等改变分离介质渗透压的物质,减少了细胞核的脆性,增加了细胞核的完整性。
3.精心调节了介质的pH,防止细胞核在分离过程中的聚集,还能保持细胞核的精细结构。
4.快速,整个操作过程仅需1小时即可完成(对一个样品而言)。
5.提供染色试剂,可以在普通光学显微镜下检测纯化的细胞核的纯度。
6.处理温和,得到的细胞核中的大部分蛋白质都具有活性,可以用于胶迟阻实验、酶活性分析细胞凋亡、信号传递、代谢和蛋白组学等的研究;也可用于超大片段DNA的纯化。
7.不但适用于动物和植物培养细胞,还能用于实体组织(能用Dounce或Potter 匀浆器匀浆的组织均可)。
8.一次微量提取足够处理0.1 克组织或10E7个培养细胞,本产品足够50次微量提取。
试剂盒组成:
| 成分 | 规格 |
| 溶液A成分一 | 100ml |
| 溶液A成分二(干粉) | 约20g |
| 溶液B成分一 | 50ml |
| 溶液B成分二(干粉) | 约100g |
| 细胞核染色液 | 1套 |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输和保存,有效期一年。
使用方法:
一、准备工作:先将溶液A的成分二(干粉)全部加入到溶液A成分一(溶液)中,摇晃溶解后得到100mL溶液A。将溶液B的成分二(干粉)全部加入到溶液B成分一(溶液)中,摇晃溶解后得到50mL溶液B。4℃放置不能超过2 天,长期放置需要放-20℃。
二、微量细胞核分离(放量提取各试剂的用量可以按比例放大):
1.对组织细胞:称取100~200mg 新鲜组织(如动物肝脏、脑、心肌和植物叶片等),用自备的PBS或生理盐水洗净血水,滤纸吸干,用剪刀或刀片将其剪为碎块(最好大小为1cm3,过小反而不利于匀浆)放入小容量Dounce或Potter 玻璃匀浆器内。
2.对培养细胞:用自备胰酶按标准方法消化培养细胞,PBS 洗涤,800×g 5~10分钟离心收集细胞,计数。每次微量提取需要5×10E7个细胞,加入1.0mL预冷的溶液A重悬细胞,然后转移到小容量Dounce或Potter 玻璃匀浆器内
3.用Dounce或Potter 组织匀浆器在冰上破碎组织或细胞。如果用手动匀浆器,一般需要20~30次。如果用电动匀浆器,一般需要处理3-5次,每次5~10秒钟(转速为500r/min)。
4.将匀浆液转移到离心管中。如果匀浆液有可见的结缔组织和未破碎的组织块,可以用三层自备的纱布放在1.5mL离心管管口,将匀浆液过滤进入离心管。可取少量滤液涂在载玻片上制得涂片A,自然干燥涂片以便染色做显微镜观察。
5.4℃,700-800×g 水平离心5-10分钟。细胞核沉淀在收集管底部,弃上清。可取少量上清液涂在载玻片上制得涂片B,自然干燥涂片以便染色做显微镜观察。
6.加入0.5mL预冷溶液A重悬沉淀。用预冷的匀浆器(用前需要将表面的组织洗去)重悬沉淀。可取少量上清液涂在载玻片上制得涂片C,自然干燥涂片以便染色做显微镜观察。
7.在水平型离心管中加入0.5mL预冷的溶液B,然后靠管壁慢慢加入上步得到的重悬液。
8.在4℃ 23000g离心30分钟,管底的沉淀即为细胞核。
9.小心吸弃上清液。注意:上清一般比较粘稠,最好倒立一段时间。
10.用0.5mL溶液A重悬沉淀。
11.在4℃ 1500g离心5分钟,吸弃上清,沉淀即为纯净的细胞核。可以直接使用,也可以加等体积的自备甘油,混匀后放液氮或-70℃保存。可取少量上悬浮液涂在载玻片上制得涂片D,自然干燥涂片以便染色做显微镜观察。
12.用本方法一般可以从0.1g 肝脏组织中纯化到1-2×107个细胞核。如果后续试验是Western Blot和2D-胶电泳,可直接加入上样缓冲液裂解细胞核后上样。
三、显微镜检测涂片,计算效率
1.将干燥后的A-D 四张涂片加入固定液固定15分钟,晾干。
2.Giemsa 染液染10分钟。
3.自备蒸馏水漂洗数秒,用滤纸吸干水。
4.用显微镜(40×)检查涂片,细胞核将呈紫红色,混杂的细胞质为浅蓝色碎片。根据每步细胞核的数量可以粗略估计回收效率。
疑难解答:
本说明书强烈建议用离心力g 而不是转速计算所需的离心速度,因为不同的离心机转子直径不同,即使是同一转速,其离心力也不同。如果只知道转速,可用下式计算离心力。
G=1.11×(10-5)×R×[rpm]2
G为离心力,一般以g(重力加速度)的倍数来表示;[rpm]2即转速的平方;
R为离心机转子的半径(单位为厘米)。
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·病毒沉淀剂
编号:BTN110810
英文名称:Virus Precipitation Reagent
规格:100mL
生物医学实验中,常常需要从液体样品(如血浆,培养基)中纯化病毒,但由于病毒颗粒十分细小,传统的分离方法是使用长时间超速离心才能将其从液体样品中分离出来,此操作非常繁琐,并且病毒在此过程中容易变性。为了克服传统方法的缺点,本公司开发了本产品。
产品特点:
1. 能浓缩病毒100倍以上,适合各种病毒。
2. 比超速离心法、密度梯度离心分离法和过滤法更温和,回收率更高,并且大部分病毒能保持活性,适合各种后续实验,包括转染实验和核酸纯化。
3. 比超速离心法和密度梯度离心分离法简单,不需要大型离心机等设备。
4.适合水样、细胞培养基上清和其他不含细胞的样品。本产品100mL可以处理400mL含病毒的溶液,可以将病毒浓缩100倍以上。
5. 已经成功用于coronaviruses 、rhabdoviruses 、parainfluenzaviruses 、respiratory syncytial virus、rubella virus、picornaviruses等病毒。
6. 对环境水样,请不要使用本产品,而是使用水体病毒沉淀剂。
储存条件:常温运输和保存,有效期一年。
自备试剂:PBS缓冲液或TES缓冲液(用于重悬病毒)
使用方法:
注意:需要尽量减少含病毒溶液中蛋白的浓度。收集培养细胞分泌的病毒前,最好换上不含血清蛋白和其他蛋白成分的培养基。
1. 将培养细胞刮下,和培养基一起全部转移到干净的离心管中,10000rpm 4℃离心20分钟。转移上清(含病毒)到新离心管中。如果培养细胞内还有病毒颗粒,并且病毒颗粒可以抵抗冻融,则可以把细胞冻融数次,释放出包浆的病毒,然后再转移到干净的离心管中,10000rpm 4℃离心20分钟。转移上清(含病毒)到新离心管中。如果病毒溶液不含细胞成分,则直接进入下一步。
2.在含病毒的上清中加入1/4 总体积的本产品(4mL 病毒溶液则加1mL 本产品),4℃冰箱中放置过夜或12小时以上。病毒在此期间将形成沉淀。
3. 10000rpm 4℃离心20分钟收集病毒沉淀,尽可能弃掉所有上清(可以暂时保留上清,等确认病毒浓缩成功后再丢弃)。
4. 将离心管放回离心机短暂离心数秒,再次小心去除残留上清。
5. 将沉淀(病毒颗粒)溶于适量预冷的自备的缓冲液(如PBS缓冲液、TES缓冲液和培养基中,取决于后续实验),立即使用或者-20℃长期保存。
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BL1193 姬姆萨染色液(10*原液)
ARB11173 人单核细胞趋化蛋白4(MCP-4/CCL13)Elisa分析 Human monocyte chemotactic protein 4,mcp-4 ELISA KIT
ARB12372 大鼠肾上腺髓质素(ADM)酶标法分析 Rat adrenomedullin,adm ELISA KIT
124-20-9 Spermidie 亚精胺
青霉素链霉素两性霉素B溶液 Zinc Glycinate
DL-异柠檬酸三*盐 Bromophenol blue 1637-73-6
BTN131190 分子生物学级糖原溶液 Glycogen Solution
1-(3-二甲基胺丙基)-3-乙基碳二亚胺 CDI 1892-57-5
维生素K3 K-Lyte 58-27-5
ARB13835 猪α干扰素(IFN-α)代做ELISA实验 Porcine interferon α,ifn-α ELISA KIT
PY02-212 亚硫*(代"酸")盐-多粘菌素-磺胺嘧啶琼脂基础 250克
ARB13632 兔子胰岛素(INS)Elisa方法检测 Rabbit insulin,ins ELISA KIT
BTN130696 G(5′)ppp(5′)A帽结构类似物 RNA Cap Structure Analogs
ARB13436 鸡戊型肝炎(HEV)ELISA代测服务
F020114 兔抗人丙型肝炎病毒抗体 Polyclonal Rabbit Anti-HCV
硫*(代"酸")葡聚糖 Sodium iodide 9011-18-1
BL0811 HRP标记羊抗人C3抗体
SJ0670 红细胞裂解液B NH4CL法
BTN100885 X-Gal干粉 X -Gal Powder
PY01-130 6-糠*基嘌呤 1克
ARB12665 大鼠碱性成纤维细胞生长因子6(bFGF-6)检测服务 Rat basic fibroblast growth factor 6,bfgf-6 ELISA KIT
ARB13869 猪白介素13(IL-13)elisa检测 Porcine interleukin 13,IL-13 ELISA KIT
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文献和实验【交流】DIG/Biotin标记的Southern/Northern杂交专题讨论
并在原位将单链DNA片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上,经干烤或者紫外线照射固定,再与相对应结构的标记探针进行杂交,用放射自显影或酶反应显色,从而检测特定DNA分子的含量。 地高辛southern印迹杂交显色图片
Smith and Summers, 1980. Anal. Biochem . 109: 123-129. Digest 10-15 µg genomic DNA with desired restriction enzyme overnight at 37o C. Run digest on a 1% TBE agarose gel at 100V until 1st blue dye reaches the bottom of gel
Southern 杂交是分子生物学的经典实验方法。其基本原理是将待检测的 DNA 样品固定在固相载体上,与标记的核酸探针进行杂交,在与探针有同源序列的固相 DNA 的位置上显示出杂交信号。通过 Southern 杂交可以判断被检测的 DNA 样品中是否有与探针同源的片段以及该片段的长度。该项技术广泛被应用在遗传病检测、DNA 指纹分析和 PCR 产物判断等研究中。但由于该技术的操作比较烦琐、费时,所以现在有一些其他的方法可以代替 Southern 杂交。但该技术也有它的独特之处,是目前其他方法
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