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冷藏
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长期
- 英文名:
Southern DNA Marker Oligo(Labeled by DIG)
- 库存:
814
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产销*(代"售")Southern DNA Marker Oligo(DIG标记)折扣价,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:Southern DNA Marker Oligo(DIG标记)折扣价
英文名:Southern DNA Marker Oligo(Labeled by DIG)
规格:20次
产地:国产|进口
编号:BTN120654F
Southern DNA Marker Oligo(DIG标记)折扣价极具性价比,此外,我公司正火爆促销以下产品:
·鲁米诺
编号:BTN131142
英文名称:Luminol
规格:1g
本产品又叫发光*。化学式C8H7N3O2。鲁米诺反应又叫*基*二酰一胼反应,生物系统中的一些酶如辣根过氧化物酶HRP,以及一些金属化合物如血液中的铁,可以催化经过过氧化*的分解,使过氧化*变成水和单氧,其中单氧可氧化鲁米诺,鲁米诺经氧化后可发出蓝光。这种蓝光可经X光胶片曝光显影、荧光CCD扫描成像,或直接在弱光下肉眼观察。

储存条件:低温运输,4℃保存,有效期一年。避免长时间暴露于光线下,请勿冷冻。
·卵白蛋白标准品(2mg/mL)
编号:BTN90610
英文名称:Ovalbumin Standard
规格:1mL
本产品是浓度为2mg/mL的卵白蛋白,用做蛋白测定的标准品。
储存条件:低温运输和-20℃保存,有效期一年。
·Oligo dT12-18引物(0.5μg/μL)
编号:BTN100814
英文名称:Oligo dT12-18 Primer
规格:5μg
Oligo(dT)12-18为长度在12到18之间的Oligo(dT)混合物,可以用于以带polyA尾巴的RNA为模板的第一链cDNA合成。建议每20μL反应体系使用0.5μg oligo(dT)。
储存条件:低温运输和-20℃保存,有效期一年。
·多粘菌素B硫*(代"酸")盐
编号:BTN120699
英文名称:Polymyxin B Sulfate Solution
规格:5mL
本产品为浓度100mg/mL的多粘菌素B硫*(代"酸")盐溶液。多粘菌素B硫*(代"酸")盐(硫*(代"酸")多粘菌素B ;Aerosporin;Mastimyxin),分子式:C55H96N16O13·2H2SO4,分子量:1385.63,CAS号:1405-20-5。多粘菌素B为多肽类抗生素,可以改变膜结构使小分子物质泄漏而抑制革兰氏阴性菌的生长。
储存条件:低温运输,4℃避光保存,有效期6个月。
Southern DNA Marker Oligo(DIG标记)折扣价关键词:Southern DNA Marker Oligo,Southern DNA Marker Oligo(Labeled by DIG),DIG标记,BTN120654F,Southern DNA Marker Oligo(DIG标记)
·Oligo(dT)再生溶液
编号:BTN130976
英文名称:Oligo(dT) Recharger
规格:250mL
本产品是针对Oligo(dT)纤维素再生的溶液,可有效去除亲和基质中的残留RNA和其他杂质,恢复Oligo(dT)纤维素基质的结合能力。
储存条件:常温运输和保存、避光。有效期一年。
·DNA探针变性液
编号:BTN131208
英文名称:DNA Probe Denaturation Solution
规格:10mL
杂交反应进行时,探针和靶核酸都必须是单链的。如果用双链DNA探针进行杂交(包括检测RNA时),双链DNA探针在杂交前必须进行变性。本产品就是即用型的DNA探针变性液,专门针对DNA探针在杂交前进行变性处理。
产品特点:
1. 即开即用。
2. 使用方便快捷,可用于核酸杂交。
储存条件:低温运输、-20℃保存、有效期一年。
使用方法:
一、根据探针和靶分子的不同,分别按下面不同情况计算杂交分子的Tm 值
1. 对 DNA-DNA杂交,其Tm = 81.5 + 16.6×log10[Na+] + 0.41×GC%–500/L
说明:L是探针或靶分子的长度(用两者中最短的一个)
GC%是探针或靶分子中的GC 百分比(用两者中最短的一个)
Na+浓度是超级杂交液中Na+的浓度,为0.75 M,16.6×log10[Na+]=(-2.07)
2. 对 DNA-RNA杂交,其Tm 值比DNA-DNA的Tm 值要高10-15℃。
3. 对 RNA-RNA杂交,其Tm 值比DNA-DNA的Tm 值要高20-25℃。
4. 对 Oligo探针杂交,Tm=GC 数量×4℃+AT 数量×2℃。
二、确定最佳杂交温度(预杂交温度跟杂交温度应该一样)
1. 对于大于200bp的DNA-DNA杂交,最佳杂交温度一般比Tm低15-25℃,一般选择68℃。
2. 对 RNA-RNA或DNA-RNA杂交,最佳杂交温度一般比Tm低15-25℃。
如果这样计算出的杂交温度很高(如高于70℃),则RNA 容易降解,所以最好选用含甲酰胺的超级杂交液(超级杂交液B型),以便能在42℃完成杂交。
3. 对 Oligo探针的杂交,最佳杂交温度一般比Tm低5℃。由于Oligo 较短,更容易受各种因素影响(如错配率、修饰碱基比例等),所以最佳温度需要适度摸索和优化。
三、确定洗膜温度
一般使用0.1×SSC做洗膜液,在此条件下的最佳洗膜温度比Tm低5-12℃,一般情况下可以在55℃进行洗膜。Oligo探针可以室温洗膜。
四、预杂交步骤
预杂交就是用不含探针的超级杂交液跟印迹膜进行孵育,其目的是用所含的非特异性DNA分子(鲑精DNA或小牛胸腺DNA)及其它高分子化合物将印迹膜上会非特异地吸附探针分子的位点封闭,否则这些位点会吸附标记的探针,造成高背景。
1. 将结合了靶分子的硝酸纤维素印迹膜或尼龙印迹膜浸泡于自备的6×SSC溶液中,使其充分湿润。
2. 将湿润的印迹膜置于一塑料杂交袋中(塑料袋最好预先封口,再剪掉一角,留一个小口),按每平方厘米印迹膜加0.2mL超级杂交液的比例沿小口加入超级杂交液,然后用塑料封口机将口封牢。
3. 将此塑料袋浸没入温度设定在最佳杂交温度的恒温水浴中或杂交炉中,保温1-2小时,延长到12-16小时亦可。注意保温过程中塑料袋应在不停的摇动状态中,使超级杂交液与印迹膜充分接触。
五、杂交步骤
1. 如果标记的探针是双链核酸,则需经变性处理。具体操作是:根据探针浓度和杂交所需探针的量计算出所需的探针体积,取出所需体积的探针到一干净的硅化的塑料离心管中,加入等体积的本产品,吹打混匀后室温放置5分钟变性后,将探针样品放入冰浴中冷却,加入0.05倍体积的自备的1 M的Tris-Cl溶液(pH7.2)以及等体积的自备的0.4 M的HCl溶液。
将探针样品保存在冰浴中直至需要。如果是单链DNA或RNA探针,则不需变性,直接使用。
2. 将单链探针或变性后的双链探针加入到完成了预杂交的杂交袋中(先用剪刀剪一小口,加入探针后用热封机封口)。探针的加入量视探针标记效率而定,一般要求终浓度不能低于1-2 ng/mL。如果检测基因组中的单拷贝基因,探针的加入量应加大,而对于检测克隆的基因片段,则探针的量可减少。如果是放射性探针,应将此塑料袋套在另一塑料袋之中,以避免杂交袋发生遗漏、污染工作环境。
3.在选定的杂交温度下继续保温,时间一般为6-12小时。
六、洗膜步骤。
注意在下面的所有操作过程中,一定不要使印迹膜干燥。此步是将与印迹膜非特异结合的探针分子洗去而只留下特异结合的探针分子。由于非特异性杂交的杂交分子解链温度较低,热稳定性较差,在一定的温度和较低的离子强度下,即可洗掉。
1.杂交完毕,取出塑料袋,剪去一角,倒出所有的含探针的杂交液。此含探针的杂交液可以多次使用再倒弃。
2. 剪开杂交袋,用镊子取出印迹膜,浸没于大量的2×SSC(含0.5 % SDS)溶液中,室温下振荡漂洗15分钟。
3. 重复上步操作一次。
4. 将印迹膜转移至0.1×SSC(含0.1% SDS)溶液中,在计算好的洗膜温度下振荡漂洗30分钟至1小时。
5. 重复上步操作一次。如果是同位素标记探针,则需要重复至用盖革计数器在无核酸区域检测不出放射信号为止。
6. 将印迹膜转移到滤纸上,吸去表面液体后印迹膜即可用于后续检测。
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文献和实验【交流】DIG/Biotin标记的Southern/Northern杂交专题讨论
并在原位将单链DNA片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上,经干烤或者紫外线照射固定,再与相对应结构的标记探针进行杂交,用放射自显影或酶反应显色,从而检测特定DNA分子的含量。 地高辛southern印迹杂交显色图片
Smith and Summers, 1980. Anal. Biochem . 109: 123-129. Digest 10-15 µg genomic DNA with desired restriction enzyme overnight at 37o C. Run digest on a 1% TBE agarose gel at 100V until 1st blue dye reaches the bottom of gel
Southern 杂交是分子生物学的经典实验方法。其基本原理是将待检测的 DNA 样品固定在固相载体上,与标记的核酸探针进行杂交,在与探针有同源序列的固相 DNA 的位置上显示出杂交信号。通过 Southern 杂交可以判断被检测的 DNA 样品中是否有与探针同源的片段以及该片段的长度。该项技术广泛被应用在遗传病检测、DNA 指纹分析和 PCR 产物判断等研究中。但由于该技术的操作比较烦琐、费时,所以现在有一些其他的方法可以代替 Southern 杂交。但该技术也有它的独特之处,是目前其他方法
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