大肠杆菌TKB1化学感受态细胞 克隆与表达

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名称：大肠杆菌TKB1化学感受态细胞 克隆与表达
编号：BTN160688
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
 大肠杆菌TKB1感受态细胞是由BL21(DE3)衍生而来，含有酪*酸激酶(TyrosineKinase)。BL21(DE3)TK感受态细胞，简写为TKB1，带有T7 RNA聚合酶的染色体拷贝，该基因的启动子是LacUV5。本产品作为E.coli B 宿主菌，主要用来进行蛋白表达，细胞内缺少lon蛋白酶和ompT外膜蛋白酶，能够有效避免目的蛋白的降解。
 本产品通过IPTG 诱导表达的T7 RNA聚合酶，允许其下游目的蛋白表达，从而实现对下游目的蛋白的可控诱导型基因表达。TKB1感受态细胞内含有一个能有诱导表达酪*酸激酶基因的质粒(pTK)。TKB1感受态细胞能够转化进去ColE1 Origin 为复制起点的，包含有编码磷酸化目的基团或者蛋白的质粒。如果目的蛋白是构建在一个含有亲和标签的融合表达载体上面，那么对于磷酸化蛋白的纯化就会相对比较容易。从TKB1感受态细胞中纯化得到的目的蛋白，能够用来筛选表达库，或者亲和纯化和蛋白印记酪*酸磷酸化蛋白。

菌种的基因型为：F-dcm ompT hsdS(rB-mB-)gal λ(DE3)[pTK Tetr]。

储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

自备试剂：目的DNA、SOC或LB培养基等。

使用方法：
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl，可以根据实际情况分装使用。
以下实验以50μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞处于冰水混合状态时，向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA，通常100μl感受态细胞能够被10-100 ng超螺旋质粒DNA 所饱和)，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴25分钟。
3. 42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟，晃动会降低转化效率。
4. 每个离心管中加入450μl 无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床，200rpm 振荡培养60分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含有相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃倒置培养12-16小时。

注意事项：
1. 混入质粒或连接产物时应轻柔操作。
2. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA 总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA 总量较少，可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心(5000rpm，1分钟)收菌后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
3. 新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
4. 涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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