Turbo 大肠杆菌克隆感受态细胞

Turbo 大肠杆菌克隆感受态细胞
产品信息：
组成                BC117-01             BC117-02
  Turbo Competent cells         10×100µl                                          20×100l
pUC19（0.1ng/µl）          5l                                                5l
储存条件：-70℃保存，避免反复冻融；不适合在液氮中保存。
产品介绍：
本公司生产的Turbo感受态细胞是采用大肠杆菌Turbo菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞。Turbo菌株
是生长最快的大肠杆菌菌株，菌株平板上6.5小时可见克隆，摇菌4-6小时可提取质粒。核酸内切酶 (endA1)基
因的缺失有利于提高质粒DNA的产量和质量。菌株的LacIq基因的表达受到严格控制，可克隆毒性基因。
ΔlacZM15基因的存在可用于蓝白斑筛选。菌株还具有抗T1噬菌体感染的特点。Turbo感受态细胞经特殊工艺制
作，pUC19质粒检测转化效率大于109 cfu/μg DNA。
基因型:
F'proA+B + lacIqΔlacZM15/fhuA2Δ(lac-proAB)glnVgalK16galE15R(zgb-210::Tn10)TetSendA1thi-1Δ(hsdS-mcrB)5
菌株抗性：对氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素、壮观霉素、链霉素、四环素敏感
质粒转化步骤：
1.将感受态细胞置于冰水浴中化冻。待细胞刚化冻后，加入质粒 DNA 或 5-10μl 连接产物到细胞中，用手
指拨打管底，轻轻混匀。
2.冰水浴中放置 30 分钟，不要晃动。
3.42℃热击 60 秒钟，不要晃动。
4.冰水浴中放置 2 分钟，不要晃动。
5.加入 500μl 的室温的 SOC 或 LB 培养基。
6.置于 37℃摇床中，150-200rpm 震荡复苏培养 60 分钟。
7.取 50-100μl 菌液涂布在含有抗性的 LB 平板上。待液体吸干后，倒置平板，37℃过夜培养。
（平板划线分离法：复苏培养结束后，12000rpm 离心 30 秒钟，弃掉上清，留 100μl 左右的液体，用 200μl 吸
头轻轻吹打散菌块，取 10μl 重悬的菌液分多点滴在平板上，倾斜吸头，用吸头头部的侧面将滴在平板上的
液体来回划线。这个方法可以获得更大的单克隆菌落。此方法主要适用于质粒转化，连接产物转化最好用涂
布法。）
（质粒快速转化步骤：对于氨苄青霉素抗性的质粒，将步骤 2 的时间缩短到 5 分钟，完成步骤 4 后，可直接涂
布或划线于含氨苄青霉素抗性的 LB 平板上。其它抗性的质粒仍需 60 分钟的复苏培养。）