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- 百奥莱博
- BTN160688-RGB
- 北京
- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
465
- 英文名：
E.coli TKB1 Chemical Competent Cell
- 保质期：
半年
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
-80℃
- 规格：
0.1mL*10
特别提示：包括大肠杆菌TKB1化学感受态细胞在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称：大肠杆菌TKB1化学感受态细胞
英文名称：E.coli TKB1 Chemical Competent Cell
产品货号：BTN160688
产品规格：0.1mL*10
大肠杆菌TKB1感受态细胞是由BL21(DE3)衍生而来，含有酪氨酸激酶(TyrosineKinase)。BL21(DE3)TK感受态细胞，简写为TKB1，带有T7 RNA聚合酶的染色体拷贝，该基因的启动子是LacUV5。本产品作为E.coli B 宿主菌，主要用来进行蛋白表达，细胞内缺少lon蛋白酶和ompT外膜蛋白酶，能够有效避免目的蛋白的降解。
本产品通过IPTG 诱导表达的T7 RNA聚合酶，允许其下游目的蛋白表达，从而实现对下游目的蛋白的可控诱导型基因表达。TKB1感受态细胞内含有一个能有诱导表达酪氨酸激酶基因的质粒(pTK)。TKB1感受态细胞能够转化进去ColE1 Origin 为复制起点的，包含有编码磷酸化目的基团或者蛋白的质粒。如果目的蛋白是构建在一个含有亲和标签的融合表达载体上面，那么对于磷酸化蛋白的纯化就会相对比较容易。从TKB1感受态细胞中纯化得到的目的蛋白，能够用来筛选表达库，或者亲和纯化和蛋白印记酪氨酸磷酸化蛋白。
菌种的基因型为：F-dcm ompT hsdS(rB-mB-)gal λ(DE3)[pTK Tetr]。
储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期半年。
自备试剂：目的DNA、SOC或LB培养基等。
使用方法：
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl，可以根据实际情况分装使用。
以下实验以50μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞处于冰水混合状态时，向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA，通常100μl感受态细胞能够被10-100 ng超螺旋质粒DNA 所饱和)，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴25分钟。
3. 42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟，晃动会降低转化效率。
4. 每个离心管中加入450μl 无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床，200rpm 振荡培养60分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含有相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃倒置培养12-16小时。
注意事项：
1. 混入质粒或连接产物时应轻柔操作。
2. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA 总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA 总量较少，可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心(5000rpm，1分钟)收菌后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
3. 新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
4. 涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。
除了大肠杆菌TKB1化学感受态细胞,，我公司还供应以下相关产品：
| 货号 | 名称 | 规格 |
| BTN60107 | DNA粘转平试剂盒 | 20次 |
| BTN60106 | 平末端DNA加T试剂盒 | 50次 |
| BTN70602 | DNA快速连接试剂盒 | 100次 |
| BTN120682 | 杆菌肽溶液 | 1mL |
| YT002 | 质粒中量抽提试剂盒 | 50次 |
| YT456 | AAT启动子荧光素酶报告基因质粒 | 1μg |
| YT457 | IL-6启动子荧光素酶报告基因质粒(白介素6启动子质粒) | 1μg |
| YT470 | C端HA标签融合蛋白质粒 | 1μg |
| YT471 | C端His标签融合蛋白质粒 | 1μg |
| YT478 | N端YFP标签融合蛋白质粒(黄色荧光蛋白) | 1μg |
| YT480 | N端HA标签融合蛋白质粒 | 1μg |
| WE0248 | DNA快速连接试剂盒 | 20次|100次 |
| ALH338 | 无缝连接克隆试剂盒 | 10次 |
| QN1059 | pET-30a(+)载体 | 20ug |
| QN1061 | pEGFP-N2 荧光表达载体 | 20μl |
| QN1062 | pEGFP-N1 哺乳动物表达载体 | 20μl |
| MQ0022 | Turbo化学感受态细胞 | 10×100μl/50×100μl |
| MQ0031 | XL1-Blue电击感受态细胞 | 5×50μl/20×50μl |
| MQ0040 | BL21 Star(DE3)化学感受态细胞 | 10×100μl/50×100μl |
| MQ0045 | Rosetta-gami B(DE3)化学感受态细胞 | 10×100μl/50×100μl |
| MQ0064 | Y2HGold酵母感受态细胞 | 10×100μl/50×100μl |
| MQ0067 | EGY48酵母感受态细胞 | 10×100μl/50×100μl |
| MT0079 | 常温稳定BL21(DE3)感受态细胞 | 100μl×10支 |
| GL1190 | 植物电穿孔缓冲液 | 100ml |
| QN2142 | BL21(DE3)感受态细胞 | 10×100μl|20×100μl |
| WH0190 | DH5a感受态细胞 | 100 μl×5|100 μl×10|100μl×20 |
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文献和实验实验目的1.了解转化的概念及其在分子生物学研究中的意义。2.学习氯化钙法制备大肠杆菌感受态细胞的方法。3.学习将外源质粒 DNA 转入受体菌细胞并筛选转化体的方法。实验原理转化( Transformation )是将异源 DNA 分子引入另一细胞品系，使受体细胞获得新的遗传性状的一种手段，它是微生物遗传、分子遗传、基因工程等研究的基本实验技术。转化中的受体细胞： 转化过程所用的受体细胞一般是限制性修饰系统缺陷的变异株，即不含限制性内切酶和甲基化酶的突变株，常用 RM 符号表示。转化方法：电击
4．操作步骤 1）大肠杆菌感受态细胞的制备(CaCl2法) (1) 从新活化的E.coli DH5α菌平板上挑取一单菌落，接种于3～5ml LB液体培养中，37℃振荡培养12h左右，直至对数生长期。将该菌悬液以1:100～1:50转接于100ml LB液体培养基中，37℃振荡扩大培养，当培养液开始出现混浊后，每隔20～30min测一次OD600nm，至OD600nm≤0.5时停止培养；(2) 每组取培养液3个2ml转入2ml离心管中，在冰上冷却20-30min，于4℃，4000r／
酶和甲基化酶的突变体（Rˉ，Mˉ），它可以容忍外源DNA分子进入体内并稳定地遗传给后代。受体细胞经过一些特殊方法（如电击法，CaCl2，RbCl（KCl）等化学试剂法）的处理后，细胞膜的通透性发生了暂时性的改变，成为能允许外源DNA分子进入的感受态细胞（Compenent cells）。进入受体细胞的DNA分子通过复制，表达实现遗传信息的转移，使受体细胞出现新的遗传性状。将经过转化后的细胞在筛选培养基中培养，即可筛选出转化子（Transformant，即带有异源DNA分子的受体细胞）。目前常用的感受态细胞
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