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- 详细信息
- 技术资料
- 保存条件:
常温运输
- 保质期:
一年
- 英文名:
One-tube virus RNA extraction kit
- 库存:
574
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京现货一管式病毒RNA提取试剂盒优惠价的品牌:百奥莱博,是优质的RNA纯化产品,用于生化研究,本产品质量好,且极具价格优势,深为用户称道,了解更多一管式病毒RNA提取试剂盒等RNA纯化产品请联系我司咨询订购。
名称:北京现货一管式病毒RNA提取试剂盒优惠价
品牌:百奥莱博
英文名:One-tube virus RNA extraction kit
规格:100次
本试剂盒是专用于血清(血浆)等液体样品中提取病毒RNA的纯化试剂。本产品回收率极高,尤其适合于整合到临床RT-PCR检测试剂盒中。且能用于提取其他液体样品和微量样品。
产品特点:
1. 回收率达到90%以上,高于绝大部分基于离心柱的提取方法。
2. 灵敏度高,RT-PCR检测到的最终灵敏度可以达到50-100拷贝/mL(对HIV和HCV)。
3.一管式操作,不使用离心柱,整个操作过程均在室温下完成。
4. 无毒环保,不需要使用*酚和*仿等有毒的有机溶液。
5.可放量,如果加上病毒离心富集步骤,每管最多可以处理样品1.5mL。
试剂盒组成:
| 成分 | 规格 |
| 溶液A | 30ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输,4℃保存,有效期一年。
使用方法:
一:准备工作
1. 血浆的抗凝剂必须是EDTA或ACD,不能是肝素。使用ACD时由于所加入ACD会增加体积,样品会被稀释,得到的病毒滴度会比使用EDTA低15%左右。
2. 用于制备血浆的全血在2-25℃放置的时间不能超过6小时,在此时间内,可以室温800-1600g离心20分钟,上清即为血浆。
3. 血浆可以在2-8℃或更低温度下运输,可以在室温放置一天,2-8℃放置5天,-20℃以下长期保存。
4. 血浆最好按0.6mL/管的量分装保存,以避免反复冻融。
5. 实验前所有试都必须放置在室温。
6. 实验当天新鲜配制70%的乙醇。
二:病毒提取操作
1. 标记1.5-2mL螺旋盖塑料离心管(如Sarstedt CAT#:782.694.006),为避免污染,建议不要使用压盖式塑料离心管。注意设置阳性和阴性对照。
2. 每管(包括正负对照管)中加入0.6mL病毒RNA提取试剂盒溶液(需提前融化)。
3.快速震荡样品几秒,再短暂离心,取0.2mL液体样品加入到已经装有0.6mL病毒RNA提取试剂盒溶液的管中。如果病毒需要富集,可以将1.5mL液体样品在4℃ 24,000 g冷冻离心60分钟,移弃1.3mL上清后在取用样品。
4.在正负对照样品管中分别加正负对照样品。
5.室温放置10分钟。此间可以在每个管上做个标记,以在下步区别向心面和离心面。
6. 振荡数秒后加入0.7mL室温异丙醇,旋紧盖后振荡30秒混匀,把离心管的向心面对向转头的中央,13,000-15000g室温离心至少15分钟。
7.小心移弃上清,注意不要触及管底和管壁离心面的RNA沉淀(此时可能看不见)。
8. 加入1.0mL室温70%乙醇,振荡数秒后 15000g室温离心5分钟。注意:在离心机中放置离心管时将其向心面对向转头的中央。
9.小心移弃上清,注意不要触及管底和管壁离心面的RNA沉淀(此时呈膜状沉淀)。
10. 再短暂离心数秒,用移液器移弃残留液体(70%乙醇),否则它会影响后续反应。
11. 加入200μl RNase-free水或百奥莱博的1×液相RNase Scavenger(能灭活残留的RNase,而RNase-free水无此功能),用移液枪仔细吹打离心管管底和管壁离心面的膜状RNA沉淀,溶液将呈混浊状,含少量不溶物。由于不溶沉淀物中含有RNA,所以不要离心后取上清使用,必须取混合液使用,哪怕很浑浊。
12. 直接取适量用于RT-PCR,如果溶于200μl水,同时样品使用量不超过RT-PCR体系的1/2,不溶物一般不会影响RT-PCR。剩余样品可以室温放置2小时,也可保存于-80℃保存一个月。
疑难解答:
Q:提取液体样品/病毒核酸(RNA或DNA)为何很难?
A:原因一是量少。病毒颗粒中的RNA或DNA是作为遗传物质保存,每个病毒最多只携带几个拷贝(而一个细胞中有上万个RNA分子),同时其长度也十分有限(是细胞基因组的万分之一以下),样品中病毒数往往也不是很多,使得样品中核酸的绝对量几乎是微乎其微,十分容易丢失。另外,由于得到的核酸量少,不能使用电泳和测OD检测,只能通过PCR或RT-PCR检测,而病毒RNA往往具有稳定的二级结构,进一步增加了鉴定的难度(即不知道是RNA提取的问题还是RT-PCR的问题)。
Q:如何判断是病毒RNA没提取出来还是提取出来了但没有RT-PCR成功?
A:在RT-PCR反应中加阳性和阴性对照。
关于北京现货一管式病毒RNA提取试剂盒优惠价的更详细说明,请致电我公司咨询,我们将以最饱满的热情为您提供解答,此外,我公司专业供应下列产品:
·菌体内毒素清除剂
编号:BTN90901
英文名称:Bacterial Endotoxin Scavenger
规格:200mL
内毒素是E.coli细胞壁的主要成分,传统的去除内毒素的方法是将内毒素和DNA一起纯化出来,然后再用各种方法去除其中的内毒素,操作繁琐,DNA 回收率低。本产品可以直接把E.coli 表面的内毒素去除,从根本上避免了内毒素对后续操作(如质粒DNA提取,重组蛋白质提取)的污染。
产品特点:
1. 首个在菌体收集阶段去除内毒素的产品,从源头上避免了内毒素跟DNA和胞浆蛋白的接触,从根本上防止了可能产生的污染。
2. 操作简单快速,用酶溶液温和清洗菌体3-4次即可去掉细菌表面的内毒素,只需要10分钟左右时间,不需要复杂仪器设备。
3.高效,能去除99%以上的内毒素。
4.跟各种质粒DNA提取、基因组DNA提取和蛋白质提取等操作兼容,DNA丢失率只有10%左右(其他方法DNA 丢失率可以高达50%)。
5. 不影响DNA和绝大部分蛋白质的活性,处理过的质粒DNA可用于转染实验。
6. 既可小规模使用(在1.5mL离心管内),也可放量用于大规模无内毒素质粒DNA提取和无内毒素蛋白质纯化。
储存条件:常温运输和保存,有效期一年。
使用方法:
一:用于菌液小于3mL的样品
1. 收集1.5-3mL E.coli 饱和菌液,12000rpm离心1分钟,弃上清,得到细菌沉淀。
2. 加入1mL 本产品温和混匀后10,000-12000rpm离心1分钟,弃上清(含内毒素)。
3. 再重复上述操作3-4次,得到的菌体可以直接进入后续的无内毒素质粒DNA提取或无内毒素蛋白质提取程序。
二:用于菌液多于3mL的样品
整个操作同上,只是在15或50mL塑料离心管中进行,离心速度不能超过离心管的承受力,本产品的用量按比例增加。
疑难解答:
Q:为何用常规的方法很难去除生物样品中的内毒素?
A:因为内毒素带电性跟DNA和部分蛋白质相同,所以基于带电性的分离方法(如硅胶膜吸附,离子交换吸附)不能将它们分开;同时内毒素又是双性分子(类似于细胞膜的磷脂分子),能够形成大小不等的聚合物,跟质粒DNA和蛋白质大小接近,所以基于分子量大小的分离方法(如凝胶排阻过滤和*化铯超速离心)也不能将其有效分离。
北京现货一管式病毒RNA提取试剂盒优惠价关键词:BTN3073,One-tube virus RNA extraction kit,一管式病毒RNA提取试剂盒
·酸酚-*仿-异戊醇混合液(RNA提取用)
编号:BTN100805C
规格:250mL
·长效期SDS-PAGE配胶液
编号:BTN100909
英文名称:Stable SDS-PAGE Gel Buffer
规格:200mL
本产品专门用于配制长效SDS-PAGE胶,本配胶液pH值偏酸性,使PAGE胶比常规SDS-PAGE更加稳定,便于配预制胶,增加实验的可重复性。
储存条件:常温运输、4℃保存,有效期一年。
·大肠杆菌XL1-Blue化学感受态细胞
编号:BTN90504
英文名称:E.coli XL1-Blue Chemical Competent Cell
规格:0.1mL*10
本产品是采用大肠杆菌XL1-Blue菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞,可用于DNA的化学转化。该菌株适用于高效的DNA 克隆和质粒扩增,能保证高拷贝质粒的稳定复制;适合非甲基化DNA的转化。使用pUC19质粒检测,转化效率可达107。本感受态细胞具有四环素抗性。
菌株的基因型:recA1 endA1 gyrA96 thi-1 hsdR17 supE44 relA1 lac[F- proAB laclqZΔ M15 Tn10(Tetr)]。
储存条件:干冰运输、-80℃保存,有效期半年。
自备试剂:目的DNA、SOC或LB培养基等。
使用方法:
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl,可以根据实际情况分装使用。
以下实验以50μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后,向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA,通常100μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和),用移液器轻轻吹打混匀,冰浴30分钟。
3. 42℃热击45秒,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2-3分钟。
4. 每个离心管中加入450μl 无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃摇床,150rpm 振荡培养45分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求,取适量已转化的感受态细胞,加到含相应抗生素的SOC或LB 固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于37℃直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养12-16小时。
注意事项:
1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA 总量较多,可取少量转化产物涂布平板;若转化的DNA 总量较少,可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少,可通过离心(4,000rpm,2分钟)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2. 新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3. 涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。
北京现货一管式病毒RNA提取试剂盒优惠价关键词:BTN3073,One-tube virus RNA extraction kit,一管式病毒RNA提取试剂盒
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RN1201 PLANTeasy 植物RNA提取试剂
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