北京KOD DNA聚合酶厂商

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北京KOD DNA聚合酶厂商的品牌：百奥莱博，是优质的工具酶产品，用于生化研究，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多KOD DNA聚合酶等工具酶产品请联系我司咨询订购。

名称：KOD DNA聚合酶
编号：BTN101002
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
规格：250U
KOD DNA Polymerase是从克隆有Thermococcus Kodakaraensis DNA聚合酶基因的质粒在大肠杆菌中经诱导表达分离纯化而来。该酶所具有的超强3´→ 5´外切酶活性使得其扩增保真性比Pfu DNA Polymerase更高，保真性是Taq的约50倍，同时具有合成速度快的特点，聚合速度约为普通Pfu DNA Polymerase的5倍，Taq DNA Polymerase的2倍，达到100-138bp/秒，可以在短时间内获得高产量的扩增产物，特别适合于高保真地扩增6 kb以内的PCR产物，扩增所得的DNA为平末端，可用于基因克隆、表达及突变分析等分子生物学实验。

产品组成：

 

成分	规格
KOD DNA聚合酶(5U/μL)	5μl
10×KOD DNA聚合酶缓冲液	1ml
dNTP mix(10mM Each)	0.1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存、有效期一年。

活性定义：1U指75℃条件下，30分钟内使10nmoles的dNTPs掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量。

使用方法：
一、建议PCR条件(以50μl反应体系为例)

成分	体积	终浓度
模板	-	＜0.5μg
正向引物(10μM)	1μl	0.2μM
反向引物(10μM)	1μl	0.2μM
10×KOD DNA聚合酶缓冲液	5μL	1×
dNTPs(10mM each)	1μL	0.2mM
KOD DNA聚合酶	0.25-0.5μL(1.25-2.5U)	-
超纯水	补足到50μL	-

注：实际操作中计算好需补加水的量后，建议先加水，然后按上述顺序添加其它成分，最后添加KOD DNA聚合酶。最好在冰浴上混合PCR各种成分，防止KOD DNA聚合酶降解引物和模板。待各成分充分混匀后，离心数秒，使反应混合物沉到管底。然后将反应管置于PCR仪中进行扩增。

二、关于
PCR条件的优化
1.质粒或者噬菌体模板(模板量5-20ng，循环参数如下表)

循环参数	目标DNA<1kb	目标DNA<2kb	目标DNA3-4kb	目标DNA5-6kb
Step 1	94℃ 2分钟	94℃ 2分钟	94℃ 2分钟	94℃ 2分钟
Step 2	94℃ 20秒	94℃ 20秒	94℃ 20秒	94℃ 30秒
Step 3	Ta 20秒	Ta 20秒	Ta 20秒	Ta 30秒
Step 4	72℃ 20秒	72℃ 30秒	72℃ 40秒	72℃ 60秒
Step 5	72℃ 5分钟	72℃ 5分钟	72℃ 5分钟	72℃ 5分钟
Repeat step 2-4 for 30-35个循环
Ta=Tm－5℃

2.基因组DNA和cDNA模板(基因组DNA模板量为50-100 ng，1-2μl cDNA(起始转录用的RNA为500 ng)，循环参数如下表)

循环参数	目标DNA<2kb
Step 1	94℃ 2分钟
Step 2	94℃ 20-30秒
Step 3	Ta 15-20秒
Step 4	72℃ 20-60秒
Step 5	72℃ 5分钟
Repeat step 2-4 for 30-35个循环
Ta= Tm - 5℃

关键词：BTN101002,KOD DNA Polymerase,KOD DNA聚合酶


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