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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
常温运输和保存,RNase A 需要-2
- 保质期:
长期
- 英文名:
Plasmid DNA column extraction kit
- 库存:
962
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
柱式质粒DNA提取试剂盒怎么卖由专业试剂供应商北京百奥莱博提供,用于生化研究,本产品质量好,且极具价格优势,深为用户称道,了解更多柱式质粒DNA提取试剂盒等DNA纯化产品请联系我司咨询订购。
名称:柱式质粒DNA提取试剂盒怎么卖
编号:BTN60205
规格:50次
品牌:百奥莱博
产地:国产|进口
本试剂盒是用于质粒DNA小量制备与纯化的试剂盒。菌体先经碱裂解法处理,再通过离心吸附柱,专一结合DNA,最后洗去杂质,高效快速提取质粒DNA,全*(代"套")操作可以在30分钟之内完成。使用本试剂盒可从1-5mL过夜培养的菌液纯化得到高达20μg的高纯度质粒DNA(OD260/OD280 = 1.8-2.0),可以直接用于酶切、转化、测序及PCR等。
试剂盒特点:
1.快速、步骤少,整个操作在半个小时之内完成。
2. 不需要预平衡离心吸附柱。
3. 洗柱液即开即用,不需要额外加乙醇。
4. 纯度高,采用本试剂盒提取的质粒OD 比值在1.8-2.0 之间。
5.产量高,每毫升过夜培养的细菌可以提取到2-5μg/mL。
6. 用途广,适用于低拷贝和高拷贝质粒。
7. 价格低,比多数国内同类产品的价格更便宜。
试剂盒组成:
| 成分 | 规格 |
| 溶液A | 13ml |
| 溶液B | 13ml |
| 溶液C | 18ml |
| RNase A溶液(10mg/mL) | 0.15ml |
| 通用洗柱液 | 50ml |
| DNA洗脱液2.0 | 10ml |
| 离心吸附柱,6层 | 50只 |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输和保存,RNase A 需要-20℃保存,有效期一年。
使用方法:
1. 先将全部RNase A溶液全部加入到溶液A中,摇匀后再取用,未用完的溶液A最好在4℃保存。
2.从筛选平板上挑取单菌落至含抗生素的培养基中,37℃震荡培养12-16小时(摇床转速200-300)。注意:建议使用LB培养基,营养更丰富的培养基会使菌体浓度过高,超过纯化系统处理能力而降低DNA 质量。另外,延长培养时间有利于提高质粒DNA浓度,但是菌液培养过长时间会因细胞死亡、裂解而造成质粒DNA浓度降低。
3. 用1.5mL离心管收集1-4mL 过夜培养饱和菌液,室温12000rpm离心1分钟,弃上清,再短暂离心,吸弃残留液体。
4. 加入250μL溶液A,用枪头充分吹打使菌体重悬(此步在冰上操作效果更佳)。
注意:细胞未充分悬浮会影响后续操作,可以使用漩涡振荡器帮助混匀或使用Tip 吸头吹打沉淀至完全混匀。
5. 加入250μL溶液B(如果溶液B有沉淀,用前须37℃加热溶解后冷却到室温方可使用),温和反复颠倒混匀4-6次,看到溶液变粘即可,然后冰上放置不超过4-5分钟。注意:此步处理不能超过5分钟,否则DNA的碱损伤比较严重。同时千万不要剧烈振荡,否则基因组DNA 断裂产生的片段非常容易污染质粒DNA。溶液B用后需要将盖拧紧存放,否则空气中的二氧化碳会进入溶液,形成碳酸,中和溶液B中的NaOH,降低其效率)。
6. 加入350μL 冰上预冷的溶液C,反复颠倒混匀4-6次,可见白色沉淀物产生,然后冰上放置至少5分钟。
7. 最高转速(12000rpm以上)4℃离心5分钟,小心将上清液转移到离心吸附柱中。由于此时的溶液比重较大,有时候出现沉淀漂浮是正常现象,取上清时避开漂浮的沉淀即可。如果此步的离心在室温进行,更容易出现沉淀物漂浮的现象。
8. 静置2分钟以让质粒DNA与吸附柱充分结合,此步十分重要。
9.室温12000rpm离心1分钟,弃收集管中的废液。
10. 加入500μL的通用洗柱液,室温12000rpm离心1分钟,弃收集管中废液。
注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要将盖拧紧存放,否则乙醇会挥发。
11. 重复上步1次。
12.室温12000rpm离心1分钟,甩干残留液体。此步不能省略,否则残留乙醇会影响DNA的后续使用(如DNA上样时不能沉淀到加样孔中)。
13. 将离心吸附柱置于一个新的1.5mL塑料离心管(自备)中,加入30-100μL65-80℃预热的DNA 洗脱液2.0,室温放置2分钟。常温的DNA 洗脱液2.0也可以用于洗脱,但产量稍微有所降低。
14.室温12000rpm离心1分钟,离心管底溶液即质粒DNA。
15. 由于百奥莱博的吸附柱结合DNA 能力较强,如果再加适量DNA 洗脱液2.0 到离心吸附柱中,往往还能洗脱下很多质粒DNA(相当于第一次洗脱的20-30%),但注意不要使用上步得到的DNA洗脱液2.0来洗脱。
关于柱式质粒DNA提取试剂盒怎么卖的更详细说明,请致电我公司咨询,我们将以最饱满的热情为您提供解答,此外,我公司专业供应下列产品:
·地塞米松
编号:BTN131234
英文名称:Dexamethasone DXM Solution
规格:1mL
本产品为浓度为50mg/mL的地塞米松乙醇溶液。地塞米松(Acido*(代"c")ont,Deronil,Dexacortal,dexametona)又名*美松、*甲强地松龙、德沙美松。分子式:C22H29FO5,分子量:392.5,CAS号:50-02-2。溶于乙醇。地塞米松属于糖皮质类激素,具有抗炎、抗过敏、抗风湿、免疫抑制等作用。
储存条件:低温运输,-20℃避光保存,有效期6个月。
·n-十二烷基β-D-麦芽糖苷
编号:BTN131046
英文名称:n-Dodecyl-β-D-Maltoside
规格:1g
本产品用于溶解膜蛋白并保持其活性。HPLC测定其纯度>99%。低紫外吸收(1%溶液的A280<0.04)。与其他的去垢剂相比能够更好地保持溶解后膜蛋白的活性。
储存条件:常温运输和保存,有效期一年。
·大肠杆菌Rosetta感受态细胞
编号:BTN140379
英文名称:E.coli Rosetta Competent Cell
规格:10*100μl
本产品为采用大肠杆菌Rosetta菌株经特殊工艺处理得到的大肠杆菌化学感受态细胞,具有*霉素抗性,补充大肠杆菌缺乏的6 种稀有密码子(AUA,AGG,AGA,CUA,CCC,GGA)对应的tRNA,提高外源基因,尤其是真核基因在原核系统中的表达水平,经 pUC19质粒检测转化效率高达 109cfu/μg。
基因型:F- omp T hsd SB(rB- mB-)gal dcm pRARE(CamR)
储存条件:干冰运输、-80℃保存,有效期半年。
柱式质粒DNA提取试剂盒怎么卖关键词:柱式质粒DNA提取试剂盒,Plasmid DNA column extraction kit,BTN60205
·石蜡包埋组织DNA提取试剂盒
编号:BTN70502
英文名称:FFPE DNA extraction kit
规格:30次
本试剂盒是专门用于从甲醛和非甲醛固定的石蜡包埋组织中快提基因组DNA的试剂。石蜡包埋组织本是珍贵的分子生物学研究材料,但是由于它们的保存时间一般都比较长,很不容易从中提取到高质量的DNA,存在的主要问题是DNA的断裂和脱蜡过程中样品的丢失。
产品特点:
1.一管式操作,避免了可能的交叉污染和样品DNA的丢失。
2.含一步离心式脱蜡试剂,不需要使用有毒的二甲*,健康环保。
3. 得到的提取物可以直接用于PCR反应。
4. 得到的DNA的OD260/280一般在1.6左右,长度在0.4-25 Kb 之间,可以直接作为PCR 模板。
5. 即开即用,客户自己不需要准备额外的试剂。
试剂盒组成:
| 成分 | 规格 |
| 溶液A | 30ml |
| 溶液B | 3ml |
| 溶液C | 5ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输及保存(溶液C需要-20℃保存),有效期一年。
使用方法:
1. 将一片常规的石蜡包埋组织切片转移到1.5mL塑料离心管(最好使用螺旋盖离心管)中并加入1mL溶液A,在振荡器上以最大速度振荡10秒。
2. 加入75μl溶液B,在振荡器上以最大速度振荡10秒。
3. 7000g室温离心2分钟,溶液将形成两个相,其中组织切片位于下相。
4.小心吸弃上层液体。
5. 将离心管放入真空离心机中,7000g离心,抽干下层的液体,一般需要一小时。
6. 加入150μL溶液C,55℃保温过夜。
7. 7000g 短暂离心,95℃保温10分钟。
8. 7000g室温离心5分钟,转移上清到新的离心管中待用。
9. PCR 检测时,一般在50μl PCR体系中加入1-5μL的模板DNA。
注意:很多时候样品中会有未明的PCR 抑制物,多加模板反而会抑制PCR反应。加入百奥莱博的PCR抑制物清除剂(BTN60804)可能会有帮助。
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·PCR抑制物清除剂
编号:BTN60804
英文名称:Scavengers of PCR inhibitor
规格:1mL
用血液、土壤、植物、中药材等样品中提取的DNA 经常含有会抑制PCR的产物。本产品专门用于解除这些PCR 抑制剂的抑制作用,使DNA 能够用于PCR扩增。
产品特点:
1. 使用简单,直接加入PCR反应体系中使用。
2.适用范围广,可以用于解除血液、土壤、植物、中药材等DNA样品中的PCR 抑制剂。
低温运输,-20℃保存,有效期一年。
使用方法:将本产品按1:10的比例加入到PCR反应体系中即可进行PCR,如果PCR反应体系为50μL,则需要加本产品5μL。
·蛋白胶微量回收试剂盒
编号:BTN90402
英文名称:Protein Gel Mini-Extraction Kit
规格:50次
十二烷基硫*(代"酸")*-聚丙*(代"烯")酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)不仅可用于检测蛋白质的相对分子质量,而且也是分离纯化蛋白质的重要工具之一,随着蛋白质技术的微量化,有必要从凝胶中回收蛋白质以用于制备抗体、免疫印迹、*基酸组分分析或末端序列测定等。
产品特点:
1.简单,不需要复杂而昂贵的仪器(如电洗脱仪)。
2.适用于变性胶(SDS-PAGE)和非变性胶。
3.回收率一般在50-90%之间(跟蛋白质大小,洗脱时间相关)。
4.跟后续的实验兼容,包括2-D电泳、质谱测序等。
产品组成:
| 成分 | 规格 |
| 溶液A | 10ml |
| 溶液B | 50ml |
| 微型离心管专用研磨杵 | 50只 |
储存条件:常温运输,4℃保存(微型离心管专用研磨杵可以室温保存),有效期一年。
使用方法:
1.按常规方法进行变性(SDS-PAGE)或非变性蛋白电泳。
2.切取含目的蛋白的胶(尽可能地把多余的胶切除,否则会影响回收效率)。
注意:固定和染色后蛋白回收效果很差,所以建议把样品分多孔上样,电泳后只切其中一个样孔的胶条进行固定和染色,然后将此胶条放回到在整体胶中原来的位置,通过显色胶条上的蛋白条带找到在未染色胶上对应区域,并切下此区域的胶进行回收。
3.将切下的胶块转移到1.5mL塑料离心管中。
4.用研磨杵充分将胶块压磨成尽可能细小的碎片。
5.加入20μL溶液A,4℃摇晃洗脱至少2-16小时(过夜)。此时最好将溶液B放在冰箱预冷。
6.10000g离心10分钟,转移上清到新的离心管中,注意不要吸取碎胶。
7.加入5倍体积的预冷的溶液B,摇晃混匀。
8.-20℃放置至少10-30分钟。
9.室温12000g离心5-20分钟,弃上清。
10.室温充分晾干,得到的沉淀即为回收的蛋白质。回收的蛋白质可溶解在适当的缓冲液中,可用于后续实验(2-D电泳、质谱测序等)。
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内切酶是切不开了。容易受甲基化影响的内切酶有:Dpn1(GA/TC)天生就甲基化;Cla1(ATC/GAT)如果前面加个 G 或后面加个 C 那么恭喜你,dam 甲基化;Xba1(T/CTAGA)如果前面加个 GA 或后面加个 TC 也是 dam 甲基化,等等有好多。这些容易甲基化的切点设计引物时一定要注意,避免引入甲基化位点。如果真是避免不了或者后来才发现问题,那么把甲基化的质粒转化到甲基化酶缺陷型大肠杆菌中再提质粒就没有甲基化,可以切了。甲基化缺陷型菌有:DM1、INV110、JM110
前一阵子一直在做双酶切质粒重组,失败了很多次,不过很快改善了实验方法,用2周重组了14个质粒。现就自己的体会,谈一下质粒重组的一些个人经验。 1. 回收PCR产物: 在进行PCR扩增时候,给引物两端设计好酶切位点,一般说来,限制酶的选择非常重要,尽量选择粘端酶切和那些酶切效率高的限制酶。选好酶切位点后,在各个酶的两边加上保护碱基。 双酶切时间及其体系:需要强调的是很多人建议酶切过夜,其实完全没有必要,我一般酶切3个小时,其实1个小时已经足够。应用大体系,如100
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