北京T4聚核苷酸激酶现货供应

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")北京T4聚核苷酸激酶现货供应，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：北京T4聚核苷酸激酶现货供应
英文名：T4 Polynucleotide Kinase
编号：BTN120506
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
T4聚核苷酸激酶能够催化ATP的γ-位磷酸基团转移到寡核苷酸链(双链或单链DNA或RNA)的5´-羟基末端以及3´-单磷酸核苷上。本产品还具有3´磷酸酶活性，将3´-磷酸基团从寡核苷酸的3´磷酸末端、脱氧3´-单磷酸核苷和脱氧3´-二磷酸核苷上水解掉。其反应示意图如下：


产品用途：
1．DNA或RNA的末端标记，用作寡核苷酸探针和进行DNA测序。
2．寡核苷酸5´末端的磷酸化，以便进行连接反应。
3．除去3´磷酸基团。

产品组成：

 

成分	规格
T4聚核苷酸激酶，10U/μL	25μl
10×反应缓冲液	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性定义：1 单位指在37℃条件下，30分钟内催化 1nmol 酸不溶性 [32P] 掺入所需要的酶量。

1×反应缓冲液：[70mM Tris-HCl(pH7.6@25℃)，10mM MgCl2，5mM DTT]，37℃温育。

热失活：65℃加热20分钟。

来源：重组E.coli菌株，克隆有T4多聚核苷酸激酶或修饰的T4多聚核苷酸激酶基因。

自备试剂：0.5M EDTA(pH8.0)、[γ-³²P或γ-³³P]-ATP或0.1mM ATP、DNA纯化试剂盒。

使用方法：

一、DNA 5´末端标记：
1．参考如下表格设置反应体系：

待磷酸化DNA	1～50 pmol(5´末端)
10×反应缓冲液	5μL
自备的[γ-³²P或γ-³³P]-ATP(3000Ci/mmol)	50pmol
补充无核酸酶的去离子水	至48μL
T4聚核苷酸激酶,10U/μL	2μL

2．按上表设置好反应体系后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
3．37℃孵育30分钟。
4．加入自备的1μL 0.5M EDTA(pH8.0)混匀，以终止反应。
5．后续可以使用酚*仿抽提、乙醇沉淀等方法纯化标记的DNA，也可以使用适当的DNA 纯化试剂盒进行纯化。DNA纯化试剂盒可以向我公司订购。

二、DNA 5´末端磷酸化：
1．参考如下表格设置反应体系：

待磷酸化DNA	1～50 pmol(5´末端)
10×反应缓冲液	5μL
自备的0.1mM ATP	3μL
补充无核酸酶的去离子水	至48μL
T4聚核苷酸激酶，10U/μL	2μL

2．按上表设置好反应体系后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
3．37℃孵育30分钟。
4．加入自备的1μl 0.5M EDTA(pH8.0)混匀，以终止反应。
5．后续可以使用酚*仿抽提、乙醇沉淀等方法纯化标记的DNA，也可以使用适当的DNA 纯化试剂盒进行纯化。

更多有关北京T4聚核苷酸激酶现货供应的价格及使用说明等，请联系我们的业务经理王欣女士咨询，我公司还销*(代"售")以下产品：

·一管式反转录试剂盒
编号：BTN170403
英文名称：One-tube RT Kit
规格：10次
本产品是一管式反转录预混Mix，内含反转录第一链合成所需的所有试剂(MMLV、Random primers、Oligo dT Primer、dNTP Mixture、反应Buffer等)，用户只需加入模板 RNA和RNase-Free 水即可进行反应。

产品特点：
1. cDNA的合成更加方便，用户只需准备模板和水即可进行反应。
2.快捷，操作步骤已经最大限度地简化，能减少污染，降低实验误差。
3. 效率高，特殊优化的oligo dT和N6 随机引物配比，反转录效率高。
4. 速度快，只需42℃，20分钟即可完成cDNA 第一链的合成。
5. 能够用于GC含量高，二级结构复杂的RNA 模板，合成cDNA片段长度可达12kb。
6. 兼容性好，合成的cDNA可直接用于荧光定量PCR反应，灵敏度高、稳定性好。

试剂盒组成：

成分	规格
2×RT MasterMix	0.1ml
RNase-Free 水	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
1. 解冻后颠倒轻弹混匀各组分，以20μL 体系为例，按下表加入(2×RT Master Mix很粘稠，取用前请短暂离心，并避免吸头外壁沾附损失)：
2×RT MasterMix

10μl
Total RNA/mRNA 模板(自备)	50ng-2μg/5-200ng
补RNase-Free 水到	20μl

 注意：对于二级结构很复杂的RNA 模板，推荐使用变性步骤，即在操作步骤之前，将模板RNA在65℃孵育5分钟后迅速转移到冰上，再进行下一步操作。
2. 轻轻混匀，42℃孵育20分钟进行反转录反应。
 注意：对亍二级结构复杂或者GC含量高的模板，可以提高温度至50℃，以增强反转录效率。
3. 85℃加热5秒钟灭活反转录酶置冰上备用(更长时间保存请置于-20℃)。

注意事项：
1. 实验过程中请注意避免RNase污染，防止RNA降解或实验中的交叉污染。
2. 使用之前请完全溶解并充分混匀，以防因盐离子浓度丌均影响实验结果。
3. 使用后应尽快放回-20℃，避免反复冻融。
4. RNA模板的完整性对cDNA合成效率起着决定性作用，因此请选择可靠的RNA提取/纯化方法。
5. 如果扩增片段较长或者RNA结构复杂，为了加强转录效果，可以将RNA单独置于65-70℃加热5-10分钟后再加入体系。
6. 操作人员请带口罩和一次性手套，并经常更换手套。


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·动物细胞裂解液A(非变性)
编号：BTN80807A
英文名称：Animal Cell Lysis Solution(A)
规格：100mL
本产品含有多种细胞裂解成分和蛋白酶抑制成分，可以在非变性或变性条件下迅速裂解组织或培养细胞，使之释放出细胞内蛋白，用于后续实验。

产品特点：
1.快速裂解，多种裂解成分经过精心优化，能快速使细胞裂解。
2. 非变性(BTN80807A)产品能最大程度地保留蛋白天然结构和功能，主要用于免疫沉淀和免疫共沉淀，还可以用于蛋白活性检测(信号传递研究和酶动力学检测)和Western Blot等各种后续实验。
3.变性(BTN80807B)裂解细胞的效率更高，主要用于对抗原空间构型不敏感的免疫共沉淀实验，还可以用于Western Blotting。
4.适用于培养细胞(包括悬浮细胞)和新鲜组织。

储存条件：常温运输、4℃保存，有效期一年。

注意事项：
1. 如果在本产品中额外再加入终浓度为1×的、新鲜配制的蛋白酶抑制剂复合物，可以更有效地抑制蛋白酶活性，防止蛋白降解。
2. 如果用于信号传递研究，最好在本产品中加入终浓度为1×的、新鲜配制的磷酸酶抑制剂复合物。
3. 整个裂解步骤都要在冰浴或4℃操作。本产品和PBS 均需预先冷却。
4. 本产品所含有较高浓度的去垢剂会对Bradford蛋白浓度测定有较大影响，因此只能使用BCA法测定蛋白浓度。

使用方法：

一：处理贴壁的培养细胞
1. 去除贴壁细胞培养液，用冰浴预冷的PBS 洗两遍，去尽残留的PBS。
2. 将培养板放置在冰上待用。
3. 按每106个细胞加入0.1mL 本产品(或100mm 贴壁细胞加1mL 本产品)的比例向培养板中加入适量的本产品(按此比例裂解得到的裂解物的蛋白浓度约在5-10mg/mL 之间)。
 注意：裂解效率跟细胞数量和本产品用量的比例密切相关。一般情况下6孔板的单孔(1～2×106细胞)需要0.1～0.2mL本产品；25 cm2培养瓶(3～6×106细胞)需要0.3~0.6mL；75 cm2培养瓶(1～2×107细胞)需要1～2mL。对于特别大或特别小的细胞，需要用户摸索最佳用量。
4. 冰上放置10-30分钟(最佳时间跟细胞系相关)，其间偶尔轻轻摇晃或用枪头轻轻吹打。
5. 将细胞培养板倾斜使上清液汇集在一端，并将其全部转移到一个新的1.5mL塑料离心管中。
6. 15000×g，4℃离心10分钟，将上清转移到一个新的1.5mL塑料离心管中，放置在冰上待用或放-80℃长期保存。注意：如果用于免疫沉淀，最好新鲜使用。
7. 用前最好先测定上清液的蛋白浓度，然后再进行后续的电泳、Western或免疫沉淀操作。

二：处理悬浮细胞
1. 400×g，4℃离心10分钟收集悬浮细胞，弃上清。
2. 用等体积的预冷PBS 洗涤细胞沉淀两遍，步骤同第一步。
3. 按每106个细胞加入0.1mL 本产品的比例加入本产品，充分悬浮细胞。
4. 冰上放置15分钟裂解细胞，期间偶尔轻柔震荡。
5. 15000×g，4℃离心10分钟，将上清转移到一个新的1.5mL塑料离心管中。为避免吸取到细胞沉淀，最好留20-40μL液体不取。
6. 将上清液放置在冰上待用或放-80℃长期保存。注意：如果用于免疫沉淀，最好新鲜使用。
7. 使用前最好先测定上清液的蛋白浓度，然后再进行后续的电泳、Western或免疫沉淀操作。

三：处理组织块
1. 称量组织块，用毛玻片或玻璃匀浆器研磨或匀浆，用5-10倍体积的、预冷的PBS洗两次(包括冲洗器材)。
2. 将匀浆物转移到离心管中，1500g、4℃离心5分钟后弃上清。
3. 按每50mg 组织加入0.2mL 本产品的比例加入预冷的本产品，吹打混匀，放置冰上。
4. 每隔5分钟振荡器轻柔振荡一次，共4次。
5. 15000×g、4℃离心10分钟，将上清转移到一个新的1.5mL塑料离心管中，放置在冰上待用或放-80℃长期保存。注意：如果用于免疫沉淀，最好新鲜使用。
6. 使用前最好先测定上清液的蛋白浓度，然后再进行后续的电泳、Western或免疫沉淀操作。


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DP104 高纯质粒小提试剂盒
C0701 绵羊血清(无菌过滤) 100ml/200ml/500ml/500ml*20瓶
BL1215 *甲*(代"酚")绿-甲基红指示剂溶液
ARB11346 人类白细胞抗原A(HLA-A)含量分析 Human leukocyte antigen a,hla-a ELISA KIT
ARB12366 大鼠转化生长因子β2(TGFβ2)Elisa方法检测 Rat transforming growth factorsβ2,tgfβ2 ELISA KIT
4-(二甲*基)*甲醛 2,2-Bis(4-hydroxyphenyl) propane 100-10-7
糖原 Sodium diethyldithiocarbamate trihydrate 9005-79-2
Boc-L-天冬*酸4-环己酯 PDTC 73821-95-1
ARB10584 人延伸蛋白A(EloA)elisa测定使用说明书 Human elongin a,eloa ELISA KIT
还原型谷胱甘肽 Nuclear fast red 70-18-8
SJ0225 N-Acetyl-D-glucosamine N-乙酰-D-*基葡萄糖
甲基橙 H-Glu-PNA 547-58-0
J0204 兔抗牛酪蛋白抗血清 1ml/10ml
PY02-020  *化十六烷基三甲铵琼脂  250克  
ARB10134 人P53(P53)定量分析 Human p53/tumor protein, p53/tp53 ELISA KIT
BL0281 DMEM (高)
漂白土粉 Potassium bromide 8031-18-3
ARB10267 人刀豆素A(ConA)酶联免疫定量检测 Human concanavalin a,cona ELISA KIT
ARB11898 人磷酸甘油酸变位酶2(PGAM2)elisa检测 Human phosphoglyceRate mutase 2,pgam2 ELISA KIT
ARB11261 人骨成型蛋白2(BMP-2)Elisa定量检测 Human bone morphogenetic protein 2,bmp-2 ELISA KIT
BTN70202 柱式酵母质粒DNAOUT Yeast Plasmid DNAOUT
ARB14246 大鼠受体相互作用丝*酸苏*酸激酶3(RIPK3)尿液中含量检测 

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