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-20℃
CAS: 91932-65-9
储存温度:冻干粉,2-8℃
来源:基因工程生产,大肠杆菌表达。
1.产品简介
蛋白A是金黄色葡萄球菌的一种膜蛋白,具有与抗体特异性结合的能力,蛋白A亲和层析柱已成为应用广泛的纯化抗体的亲和柱,可从腹水,血清和细胞培养上清或细胞抽提物中分离和纯化多种哺乳动物不同亚型的抗体或包含抗体Fc片段的基因工程重组蛋白。重组耐碱蛋白A为我公司自主研发和生产, 具自主知识产权。产品由大肠杆菌表达,经层析纯化获得,纯度95%以上。纯化过程不使用抗体柱亲和层析,避免了产品中掺入无关IgG的可能。
2.产品特性
| 外观 | 白色、类白色粉末 |
| 溶解性 | 澄清液体 |
| 生物载量 | ≤ 1 cfu/ mg |
| 电泳 | 单一主条带 |
| 分子量 | 25kD |
| 紫外检测 | E275/250 ≥1.2, E0.1% at 275nm=0.17-0.23 |
| 纯度(HPLC) | ≥ 95% |
3.储存和运输稳定性
储存稳定性:重组蛋白A冻干粉存于2-8℃,24个月稳定; 胶连 时用 PBS ( p H7.4 ) 溶解,现配现用 ; 如果需要保存,用水溶解 后 ,-20℃ 以下 保存 。
运输稳定性:蓝冰保温运输,活性稳定。
4.产品优势
1)非抗体柱纯化,产品中无任何其它抗体如IgG等的污染。
2)SPA-25为本公司自主研发产品,pH耐受范围广,可耐受0.5 M NaOH和0.5M HCl 处理,不降解,抗体结合能力不变。
3)产品有特为抗体纯化柱设计的连接基团,可直接用于蛋白A柱的制备。
4)质量稳定:批量生产,可保证稳定连续的批次生产;产品批次间无差异,质量稳定。
5)纯度高:宿主蛋白残留小于生物制品限度要求。
6)冻干粉:易于储存和运输;
7)符合法规要求:生产设备和生产环境符合相关法规要求,生产过程完全遵循NSF ISO 9001:2015质量体系并符合GMP指导原则。
8)质量文件完整性:按客户需求,可提供相关法规支持文件。
5.产品用途
重组蛋白A的C末端含有半胱氨酸,可定向偶联到固体分离介质上,用于单克隆抗体或多克隆抗体的纯化。可结合大多数人类和小鼠免疫球蛋白子类(如。,人类IgG1 IgG2 IgG4;鼠标IgG2 IgG2a,IgG2b IgG3),还结合牛,几内亚猪,仓鼠,房子,猪,兔子总免疫球蛋白的形式。重组蛋白A可与多种报告分子(荧光染料、酶标记、生物素、胶体金、放射性标记等)偶联并不影响其与抗体结合的活性。这些偶联后的蛋白A衍生物可用于Western-blot、ELISA、免疫组化等的抗体检测。
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文献和实验金黄色葡萄球菌 A 蛋白 (Staphylococcal Protein A 、简称 SPA) 是细胞壁抗原的主要成分,几乎 90% 以上的菌株均含有这种成分,但不同的菌株含量差别十分悬殊。 SPA 占整个细胞壁蛋白成分的 6.7% ,通过胞壁肽聚糖以共价键与之结合。其它葡萄球菌如表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌不含 SPA 。SPA 的理化性质 SPA 是一种蛋白质 , 由亮、缬、脯、丙、苏、甘、丝、谷丙、天门冬及赖氨酸
常用的培养基配方如下: 1. 配方一 蛋白胨10.00g 葡萄糖1.00g 氯化钠3.00g Na2 HPO4 · 12H2 O2.00g 牛肉浸液 ( 或 5% 牛肉膏 ) 1 000.0ml 混合,调 pH 7.8 欲配固体培养基则另加琼脂25.00g 2. 配方二 胰酶消化酪蛋白17.00g 大豆胨3.00g
1.DEAE-Sephadex A-25离子交换层析法 ⑴ 用0.1mol/L NH4HCO3缓冲液平衡DEAE-Sephadex A-25柱。 ⑵ 加样后,用0.1mol/L NH4HCO3缓冲液洗脱12h~14h。 ⑶ 改用0.4mol/L NH4HCO3缓冲液洗脱,流速0.15ml~0.2ml/min,收集流出液,测OD275nm。 ⑷ 测SPA活性(以对流免疫电泳),能与人及猪正常血清产生沉淀线的各管合并。 ⑸ 浓缩或冻干保存。 2.Sphadex G100凝胶过柱法
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