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- AE-H870
- 2025年07月08日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
常温/液氮保存
- 保质期：
永久
- 英文名：
U2OS(U-2 OS；U2-OS；U-2OS)
- 库存：
1*10的6次方个
- 供应商：
上海钰博生物科技有限公司
- 规格：
T25瓶，1*10的6次方个
U2OS(U-2 OS；U2-OS；U-2OS)；人骨肉瘤细胞
细胞名称：U-2 OS 人骨肉瘤细胞
组织来源：骨
培养条件：DMEM+10%FBS
形 态：贴壁；上皮细胞样
描述
该细胞是胸腺激酶缺陷骨肉瘤细胞株。
培养条件：DMEM/F12(or MEM) 10%FBS （0.015 mg/ml溴甙）
传代方法：1:4~1:8传代；每周换液2-3次。
STR位点信息：
| STR Profile | AMEL | CSF1PO | D13S317 | D16S539 | D5S818 | D7S820 | TH01 | TPOX | vWA |
| U2OS(U-2 OS；U2-OS；U-2OS)；人骨肉瘤细胞 | X | 12 | 12 | 10 13 | 13 | 11 12 | 6 | 11 | 14 18 |
(U2OS(U-2 OS；U2-OS；U-2OS)；人骨肉瘤细胞培养的具体步骤和要求以及注意事项)
一、 复苏
1. 把冻存管从液氮中取出来，立即投入37℃水浴锅中，轻微摇动。液体都融化后（大概1-1.5分钟），拿出来喷点酒精放到超净工作台里。
2. 把上述细胞悬液吸到装10ml培养基的15ml的离心管中（用培养基把冻存管洗一遍，把粘在壁上的细胞都洗下来），1000转离心5分钟。
3. 把上清液倒掉，加1ml培养基把细胞悬浮起来。吸到装有10ml培养基的10cm培养皿中前后左右轻轻摇动，使培养皿中的细胞均匀分布。
4. 标好细胞种类和日期、培养人名字等，放到CO2培养箱中培养，细胞贴壁后换培养基。
5. 3天换一次培养基。
二、 传代
1. 培养皿中的细胞覆盖率达到80%-90%时要传代。
2. 把原有培养基吸掉。
3. 加适当的胰蛋白酶（能覆盖细胞就行），消化1-2分钟。
4. 细胞都变圆后加如入等体积的含血清的培养基终止消化。
5. 用移液枪吹打细胞，把细胞都悬浮起来。
6. 把细胞吸到15ml的离心管中，1000转离心5分钟。
7. 倒掉上清液，加1-2ml培养基，把细胞都吹起来。
8. 根据细胞种类把细胞传到几个培养皿中。一般，癌细胞分5个，正常细胞传3个。继续培养。
三、 冻存
把细胞消化下来并离心（同上）。用配好的冻存液把细胞悬浮起来，分装到灭菌的冻存管中，静止几分钟，写明细胞种类，冻存日期。4℃ 30min，-20℃ 30min，-80℃过夜，然后放到液氮灌中保存。
冻存液的配制： 70%的完全培养基+20%FBS+10%DMSO. DMSO要慢慢滴加，边滴边摇。
要注意的就是无菌操作！
(培养U2OS(U-2 OS；U2-OS；U-2OS)；人骨肉瘤细胞细胞的常规观察)
细胞接种或传代以后，实验者每天或至多间隔1～2d，要对细胞做常规性检查。观察细胞形态和生长情况以及培养的pH变化、有无污染等。根据细胞动态变化，做换液或传代处理，如发现异常情况应及时采取措施。
1. 细胞形态 生长状态良好的细胞，在一般显微镜下观察时可见，细胞透明度大、折光性强、轮廓不清。细胞生长不良时，轮廓增强，胞质中常出现空泡、脂滴和其他颗粒状物，细胞之间空隙加大，细胞形态可变得不规则甚至失去原有特点，如上皮细胞变成类上皮细胞等。某些染料当细胞死亡时能透过变性的胞膜与解体的细胞核DNA结合，而令其着色。因而常用台盼蓝(trypan blue) 鉴别细胞死活，活细胞不着色，死细胞核呈蓝色。
2. 细胞生长 初代培养或传代的细胞悬液接种以后，经过长短不同的潜伏期后开始增殖。传代细胞系、胚胎组织或幼体组织一般在第二天即可见细胞生长，一周内便可连接成片。接种细胞长满瓶壁后，应及时做再培养。否则由于营养物消耗和代谢积累，细胞即进入停止期或退化期。此时细胞轮廓增强，细胞内常出现颗粒状堆积物，为膨胀的线粒体，细胞质呈空泡化，细胞变圆、粗糙，严重时细胞从瓶壁脱落，只有及时再做传代处理，才能使细胞继续生长繁殖。
3. 营养液 正常情况下，培养液呈桃红色。如果细胞维持在pH6.5～6.6条件下，细胞会脱落死亡。当培养液酸化变黄时，说明培养液中代谢产物已堆积到一定量，需要更换新鲜培养液。培养液中如加Hepes或用5％CO2温箱培养可使pH维持相对稳定。更换营养液的时间，可依营养物的消耗而定，细胞生长旺盛时2～3d换一次，生长缓慢时，3～4d亦可。要特别注意各种细胞对pH值要求是不一样的。
4. 微生物污染 微生物污染培养细胞培养物后会出现pH值改变，培养液呈现混浊状。细菌感染后，由于细菌的运动，光镜观察可见有微闪光；真菌感染则在镜下见许多细丝状菌丝，有时还密集有群集孢子；支原体的污染需要借助一些检测手段才可检出。细胞污染以后一般应当废弃，对于重要的细胞株，可以参考相关专著，介绍采取一些措施清除污染。比较重要的实验、珍贵的细胞，至少由两个实验人员独立培养操作，或由一个人分次(不同时)操作。除培养实验室的卫生条件外，空气中的湿度与微生物污染关系密切。重要的、周期长的实验尽量安排在空气湿度低的秋冬季进行。
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文献和实验激光诱导 DNA 损伤后 U2OS 细胞的活细胞成像 双链 DNA 断裂是对 DNA 损伤最有害的形式之一。损伤之后，细胞中的 DNA 损伤反应（DDR）通路被触发，诱导 DDR 因子募集到断裂位点，并启动细胞周期检查点信号传导和 DNA 修复活性的调控。精准的信号转导和断裂位点修复对于细胞的生存和防止致癌突变至关重要。因此，了解 DNA 修复过程中的相关机制尤为关键。在此应用中，我们使用 FV3000 共聚焦显微镜，研究了 U2OS 细胞（人骨肉瘤上皮细胞）DNA 修复蛋白在激光诱导损伤
腺瘤细胞 SMMC-7721 人肝癌细胞 SW 13 人肾上腺皮质瘤 SW480 人结直肠癌 T84 人结肠癌细胞 TALL104 IL-2依赖株(B类) TF1 人红系白血病细胞(B类) THP1 人单核细胞型淋巴瘤 U-2 OS 人骨肉瘤细胞 U251 人神经胶质细胞瘤 U-937 人淋巴瘤细胞 UACC812 人乳腺导管瘤 UT-7 人类原巨核细胞白血病细胞(B类) ZR-75-1 人乳腺导管癌
指数反应。我们也对两种附加肿瘤细胞系：SH-SY5Y神经母细胞瘤与 U2OS骨肉瘤细胞，以及两种原代细胞类型：人血管内皮细胞（HUVEC）与混合原代肾上皮细胞（这里简称 MREC）的 GPCR 配体进行检测。 为测定细胞系的相应活性配体，我们将 8 个对照孔的最大与最小细胞指数反应值与固有变异性进行比较。细胞指数值超出或低于对照孔细胞检测值的三个标准差的检测孔细胞被视为呈活性反应。配体诱导活性反应见图3 与 4。每种细胞相应内源性 GPCR 见表 1。 一种或更多细胞类型中，有14
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