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- AE-H005
- 2025年12月09日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
常温/液氮保存
- 保质期：
永久
- 英文名：
WISH
- 库存：
1*10的6次方个
- 供应商：
上海钰博生物科技有限公司
- 规格：
T25瓶，1*10的6次方个
WISH；人羊膜细胞
细胞名称：WISH 人羊膜细胞
培养条件：MEM +10% FBS
形 态：贴壁；上皮细胞样
描述
该细胞是胸腺激酶缺陷骨肉瘤细胞株。
培养条件：DMEM/F12(or MEM) 10%FBS （0.015 mg/ml溴甙）
传代方法：1:4~1:8传代；每周换液2-3次。
STR位点信息：
| STR Profile | AMEL | CSF1PO | D13S317 | D16S539 | D5S818 | D7S820 | TH01 | TPOX | vWA |
| WISH；人羊膜细胞 | X | 12 | 12 | 10 13 | 13 | 11 12 | 6 | 11 | 14 18 |
(WISH；人羊膜细胞培养的具体步骤和要求以及注意事项)
一、 复苏
1. 把冻存管从液氮中取出来，立即投入37℃水浴锅中，轻微摇动。液体都融化后（大概1-1.5分钟），拿出来喷点酒精放到超净工作台里。
2. 把上述细胞悬液吸到装10ml培养基的15ml的离心管中（用培养基把冻存管洗一遍，把粘在壁上的细胞都洗下来），1000转离心5分钟。
3. 把上清液倒掉，加1ml培养基把细胞悬浮起来。吸到装有10ml培养基的10cm培养皿中前后左右轻轻摇动，使培养皿中的细胞均匀分布。
4. 标好细胞种类和日期、培养人名字等，放到CO2培养箱中培养，细胞贴壁后换培养基。
5. 3天换一次培养基。
二、 传代
1. 培养皿中的细胞覆盖率达到80%-90%时要传代。
2. 把原有培养基吸掉。
3. 加适当的胰蛋白酶（能覆盖细胞就行），消化1-2分钟。
4. 细胞都变圆后加如入等体积的含血清的培养基终止消化。
5. 用移液枪吹打细胞，把细胞都悬浮起来。
6. 把细胞吸到15ml的离心管中，1000转离心5分钟。
7. 倒掉上清液，加1-2ml培养基，把细胞都吹起来。
8. 根据细胞种类把细胞传到几个培养皿中。一般，癌细胞分5个，正常细胞传3个。继续培养。
三、 冻存
把细胞消化下来并离心（同上）。用配好的冻存液把细胞悬浮起来，分装到灭菌的冻存管中，静止几分钟，写明细胞种类，冻存日期。4℃ 30min，-20℃ 30min，-80℃过夜，然后放到液氮灌中保存。
冻存液的配制： 70%的完全培养基+20%FBS+10%DMSO. DMSO要慢慢滴加，边滴边摇。
要注意的就是无菌操作！
(培养WISH；人羊膜细胞细胞的常规观察)
细胞接种或传代以后，实验者每天或至多间隔1～2d，要对细胞做常规性检查。观察细胞形态和生长情况以及培养的pH变化、有无污染等。根据细胞动态变化，做换液或传代处理，如发现异常情况应及时采取措施。
1. 细胞形态 生长状态良好的细胞，在一般显微镜下观察时可见，细胞透明度大、折光性强、轮廓不清。细胞生长不良时，轮廓增强，胞质中常出现空泡、脂滴和其他颗粒状物，细胞之间空隙加大，细胞形态可变得不规则甚至失去原有特点，如上皮细胞变成类上皮细胞等。某些染料当细胞死亡时能透过变性的胞膜与解体的细胞核DNA结合，而令其着色。因而常用台盼蓝(trypan blue) 鉴别细胞死活，活细胞不着色，死细胞核呈蓝色。
2. 细胞生长 初代培养或传代的细胞悬液接种以后，经过长短不同的潜伏期后开始增殖。传代细胞系、胚胎组织或幼体组织一般在第二天即可见细胞生长，一周内便可连接成片。接种细胞长满瓶壁后，应及时做再培养。否则由于营养物消耗和代谢积累，细胞即进入停止期或退化期。此时细胞轮廓增强，细胞内常出现颗粒状堆积物，为膨胀的线粒体，细胞质呈空泡化，细胞变圆、粗糙，严重时细胞从瓶壁脱落，只有及时再做传代处理，才能使细胞继续生长繁殖。
3. 营养液 正常情况下，培养液呈桃红色。如果细胞维持在pH6.5～6.6条件下，细胞会脱落死亡。当培养液酸化变黄时，说明培养液中代谢产物已堆积到一定量，需要更换新鲜培养液。培养液中如加Hepes或用5％CO2温箱培养可使pH维持相对稳定。更换营养液的时间，可依营养物的消耗而定，细胞生长旺盛时2～3d换一次，生长缓慢时，3～4d亦可。要特别注意各种细胞对pH值要求是不一样的。
4. 微生物污染 微生物污染培养细胞培养物后会出现pH值改变，培养液呈现混浊状。细菌感染后，由于细菌的运动，光镜观察可见有微闪光；真菌感染则在镜下见许多细丝状菌丝，有时还密集有群集孢子；支原体的污染需要借助一些检测手段才可检出。细胞污染以后一般应当废弃，对于重要的细胞株，可以参考相关专著，介绍采取一些措施清除污染。比较重要的实验、珍贵的细胞，至少由两个实验人员独立培养操作，或由一个人分次(不同时)操作。除培养实验室的卫生条件外，空气中的湿度与微生物污染关系密切。重要的、周期长的实验尽量安排在空气湿度低的秋冬季进行。
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文献和实验wish细胞是上皮细胞， 人羊膜细胞 ，培养基我用的是最常见的1640（10％小牛血清，加双抗）。1、细胞长满培养瓶时既要传代。我用胰酶和edta的混合液消化。用D-Hank's液配制成0.25%的胰酶。edta的终浓度是0.02%。2、使用前37度预热，每个25ml培养瓶加9滴的胰酶和edta混合液，消化液的量可根据自己培养瓶的大小而定，原则就是能够盖满瓶底。加入胰酶和edta混合液以后，为使酶的活性最大，将培养瓶盖拧紧后放回培养箱中，5分钟左右即用含血清的培养基终止消化。如果在室温情况下消
Gene expression can be analyzed at high spatial resolution via RNA in situ detection methods. For many tissues and species, these will be performed on sections of embedded and fixed plant material. When very small or fragile tissues
实验材料：1. 人胎盘；2. PBSA/GASP：含抗生素的PBSA（庆大霉素，50μg/ml；两性霉素B，1.25μg/ml；链霉素100μg/ml；青霉素100U/ml）；3. 丙三醇；4. 含50%丙三醇的DMEM；5. 胰蛋白酶/EDTA；6. Millicell微孔膜组织培养插片；7. 塑料刮片和无菌棉拭子；实验方法：1. 用PBSA/GASP清洗组织；2. 分离人羊膜，用戴手套的手从胎盘上将羊膜钝性分离下来，分离出的羊膜薄层包括上皮细胞，基底膜和一些基质组织；3. 用无菌棉拭子除去
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