结肠癌cDNA组织芯片30点，cDNA-HColA030CS

做PCR达人，从引物设计开始

图 引物设计总体上包含三个程序：模板的获得、同源性分析以及引物筛选。模板的获得有多种来源，根据实验目的来定，这里不多作讨论。同源性分析的目的是看引物与模板有没有非特异性结合位点，特别要避免非特异性结合位点的3’末端完全配对。为最大程度确保获得较好的PCR结果，引物筛选需要满足以下几项基本原则：   01 引物长度：18-30 nt  大多数应用的最短引物长度为18个核苷酸，引物长度的上限并不是很重要，主要与反应效率有关。引物越长，退火结合到靶DNA上形成稳定双链模板的速率越

基因表达之RT-PCR之我见

和sb GAPDH超过28－30循环的话，结果是不可信的，实际上即使超过25循环也是值得商榷的，肯定再RNA或者cDNA的步骤有问题，此时因该增加模板量，而不是增加循环数，即使目的基因要用30以上也要考虑一下。对于想脾脏这样的组织，actin甚至可能要低于20循环，实际上在后文谈到的凝胶成像仪的检测范围之内，应该循环数越少越好。还是那句话，并不是在指数期就可以的。 提示：另外，不是很亮（跑电泳时）并不代表没有到平台期，再看看我们的做的定量PCR的图就明白了，有些基因的平台期是达不到很高的（这不

基因芯片技术知识概要

较简单，只需将预先制备好的寡核苷酸或cDNA等样品通过自动点样装置点于经特殊处理的玻璃片或其它材料上即可。 1、原位光蚀刻合成　寡聚核苷酸原位光蚀刻合成技术是由Affymetrix公司开发的，采用的技术原理是在合成碱基单体的5'羟基末端连上一个光敏保护基。合成的第一步是利用光照射使羟基端脱保护，然后一个5'端保护的核苷酸单体连接上去，这个过程反复进行直至合成完毕。使用多种掩盖物能以更少的合成步骤生产出高密度的阵列，在合成循环中探针数目呈指数增长。某一含n个核苷酸的寡聚核苷酸，通过4×n个化学