北京Gateway entry clone构建试剂盒厂家

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京Gateway entry clone构建试剂盒厂家的品牌：百奥莱博，是优质的克隆与表达产品，用于生化科学研究，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多Gateway entry clone构建试剂盒等克隆与表达产品请联系我司咨询订购。

名称：北京Gateway entry clone构建试剂盒厂家
产地：国产|进口
英文名：Gateway entry Clone Construction Kit
规格：20次
品牌：百奥莱博
本试剂盒采用了世界最先进的定向拓扑异构酶克隆技术可以在5分钟内将待表达目的基因（高保真酶扩增的平末端片段）一步法定向克隆到Gateway入门载体，得到的入门克隆可以和各种Gateway目的载体通过LR重组反应，生成表达克隆。方便目的基因在原核/哺乳动物细胞/酵母/昆虫表达系统切换表达。

试剂盒组份：
Gateway入门载体(30ng/μl)—————20μl
10×Enhancer-———————————20μl

产品特点：
1. 简单快速，加入待表达基因片段室温仅需5分钟便可完成入门克隆构建。
2. 定向克隆技术，超过90%插入为正确方向插入，减少克隆筛选耗费的时间。
3. 构建的入门克隆不含原核表达Shine-Dalgarno（SD)序列，因此构建原核表达克隆时应选择带SD序列的目的载体进行Gateway LR重组。

储存条件：-20℃，有效期12个月。

本品别名：Gateway entry clone构建试剂盒|Gateway入门克隆构建试剂盒

北京Gateway entry clone构建试剂盒厂家正在火爆热销，除此之外，为您推荐下别热销产品：

·T Simple 载体连接试剂盒（不含多克隆位点）
编号：ALH347
英文名称：T Simple vector ligation Kit
规格：20次|60次
本试剂盒T Simple Vector是一种高效克隆PCR产物 (TA Cloning) 的专用载体。这种载体是由pBlueScript II SK(+)质粒改建而成，和传统T载体ECOR V切开后加T方法不同，T Simple载体通过改造pBlueScript II SK(+)，在原pBlueScript II SK(+)多克隆位点引入 Xcm I酶切后使其原多克隆位点两侧的3’末端直接产生未配对的T碱基，因此有更高的重组效率。同时它消除了pBlueScript II SK(+)载体上的多克隆酶切位点，需要在PCR扩增引物上导入合适的酶切位点。此时如果使用PCR扩增引物导入的酶切位点进行DNA酶切时，酶切反应将不会受到T载体上其它多克隆酶切位点上的限制酶影响，可以大大提高酶切效率，增加亚克隆成功率。此外，本公司载体连接体系还有背景低（蓝斑小于10%），重组率高（白斑中超过90%有插入片段），可快速连接等特点。本说明书末列出了T Simple 载体相关的技术资料，其全序列可参照pBlueScript II SK(+)序列，只是其多克隆酶切位点处序列稍有不同。

试剂盒组份：
T Simple Vector(30ng/μl)———————20μl
1000bp Control（30ng/μl）-——————5μl
10×PEG Enhancer-———————————50μl
10×Ligation Buffer-—————————40μl
2×Quick Ligation Buffer-———————100μl
T4 DNA ligase（5Uμl）—————————20μl

储存条件：-20℃。

·粪便基因组DNA提取试剂盒
编号：ALH170
英文名称：Fecal genomic DNA Extraction Kit
规格：50次
本试剂盒适用于快速提取各种粪便DNA。常规的DNA纯化方式并不能有效地去除粪便中存在的大量抑制因子而导致下游实验的失败，如PCR不能扩增出所需片段。该试剂盒采用DNA吸附柱和新型独特的溶液系统，能有效去除动物粪便中各种影响下游实验(如PCR)的抑制因子，并能高效地回收粪便中的基因组DNA。动物粪便样品经特殊缓冲液ASL重悬后，70℃处理5分钟裂解细菌；离心去除不溶解的杂质，蛋白酶K消化进一步去除蛋白和杂质；然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜， 再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤， 抑制物去除液和漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除， 最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。

试剂盒组份(50次)：
缓冲液ASL—————————0.5ml
杂质清除剂AB———————50ml
结合液CB—————————20ml
抑制物去除液IR——————25ml
漂洗液WB —————————25ml
洗脱缓冲液EB ———————20ml
蛋白酶K——————————20mg
吸附柱AC —————————50个
收集管(2ml)————————50个

产品特点：
1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.不需要使用有毒的*酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。
3.快速，简捷，单个样品操作一般可在40分钟内完成。
4.多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280典型的比值达1.7～1.9，可直接用于PCR，Southern-blot和各种酶切反应。

注意事项：
1. 所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
2. 开始实验前将需要的水浴先预热到70℃备用。
3. 结合液CB 和抑制物去除液IR 中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
4. 洗脱液EB不含有螯合剂EDTA， 不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱， 但应该确保pH大于7.5， pH 过低影响洗脱效率。用水洗脱DNA 应该保存在－20℃。DNA 如果需要长期保存，可以用TE 缓冲液洗脱（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH 8.0），但是EDTA 可能影响下游酶切反应，使用时可以适当稀释。
5. PCR 可能被过量的DNA（一般大于1μg）抑制，使用最小用量的洗脱DNA（适当稀释）反而可以得到更好的扩增。一般加入的洗脱DNA 体积不要超过总PCR反应体积的10％。我们建议在PCR反应体系中加入终浓度0.1 μg/μl的BSA（牛血清白蛋白）有助于得到最佳扩增效果。

储存条件：室温，有效期12个月。


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·超纯总RNA提取试剂盒(TRIzol法)
编号：ALH011
英文名称：Ultra Pure Total RNA Fast Extraction Kit
规格：20次|50次
本试剂盒适用于动植物组织、动植物培养细胞的总RNA提取，采用改进的异硫*酸胍/酚一步法(TRIzol法)裂解细胞和灭活RNA酶，然后总RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤,去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除，最后低盐的RNase free water将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。

产品特点：
1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.结合了异硫*酸胍/酚一步法试剂稳定性好，纯度高和离心柱方便快捷的优点，不需要异丙醇沉淀和乙醇洗涤过程，RNA可以直接从离心柱上洗脱避免了过度干燥不易溶解问题。
3.独特的RL裂解液配方，可以有效的消除基因组污染。
4.多次漂洗去蛋白过程，提取RNA纯度更高。
5.有效的去除了5S在总RNA中含量，提高了纯度。

试剂盒组份：

 

组份	20次	50次
裂解液RL	20ml	50ml
去蛋白液RE	15ml	25ml
漂洗液RW	5ml	10ml
RNase-free H2O	10ml	10ml
吸附柱和收集管	20套	50套

储存条件：室温，有效期一年。(裂解液RL需4℃避光保存)

注意事项：
1. 第一次使用前请先在漂洗液RW瓶中加入指定量乙醇，加入后请及时打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!
2. 本试剂盒抑制RNA酶效果极佳，所有离心步骤如未加说明，均可在常温进行。
3. 裂解液RL和去蛋白液RE中含有刺激性有害化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
4. 考虑到环保问题，本试剂盒不含有实验室常用试剂*仿，使用前需要自备*仿。
5. 常规的琼脂糖凝胶电泳和变性胶电泳均可以用来分析RNA的质量。好的RNA产物在电泳后应该可以看到明显的二条优势核糖体RNA带，分别为~5Kb（28S），~2Kb（18S），条带亮度比值约为2：1。有时候也可以看到~0.1kb和0.3Kb(5S，tRNA)带。但有时候根据不同的物种如某些植物组织可以看到4，5条带也属于正常现象，如果RNA未成熟的前体或者不均一核RNA、小核RNA提取出来也可能看到介于7Kb和15Kb之间的不连续的高分子量条带。
6. 检测OD260/OD280吸光度比值时，如需稀释RNA样品应该用TE（PH 8)，如果用水稀释后检测，由于一般水离子强度和PH值低，会使OD280升高，从而使比值降低。
7. 加入裂解液RL匀浆后，加*仿前，样品可在–60℃～70℃ 保存一个月以上。
8. 若提取细菌RNA，推荐细菌RNA提取试剂盒（目录号：ALH027和ALH029）。

操作步骤（实验前请先阅读注意事项）
 提示：第一次使用前请先在漂洗液RW 瓶中加入指定量无水乙醇!
1. 匀浆处理
a. 组织
将组织在液氮中磨碎，每50~100mg组织加1ml的裂解液RL后匀浆。组织样品容积不能超过RL容积的10%。
b. 单层生长的细胞
直接往直径3.5 cm的培养板中加入1ml的RL溶解细胞，并用移液枪轻轻吹打混匀。依据培养板的面积而不是依据细胞的数量来决定所需的RL量（每10cm2加1ml）。一般情况下，普通大小的细胞培养瓶，加入1ml的RL, 迅速轻摇使RL充分和瓶底所有细胞接触裂解细胞并灭活RNA酶，轻轻用移液枪反复吹打混匀。当RL量不足时可导致抽提的RNA中污染有DNA。
c. 悬浮生长的细胞
通过离心来沉淀细胞，小心弃上清。每5~10×106的动物细胞或植物细胞加1ml的RL。在RL试剂中用移液枪反复吹打来裂解细胞。在加入RL前应避免洗涤细胞，否则会增加mRNA降解的可能性。
2. 将匀浆样品剧烈震荡混匀，在15～30℃条件下孵育5分钟以使核蛋白体完全分解。
3. 可选步骤：4℃的条件下12,000rpm 离心10分钟，小心取上清转入一个新的RNase free的离心管中。当样品富含蛋白质、脂肪、多糖或是细胞外物质例如肌肉、脂肪组织或植物的块茎部分时可能需要一额外的分离步骤。匀浆化后在2~8℃的条件下以12,000rpm离心10分钟，移除匀浆中不溶解的物质，余下的沉淀中包含有细胞外膜、多糖、以及高分子量DNA，而上层的超浮游物含有RNA。
4. 每1ml RL加0.2ml*仿。盖紧样品管盖，剧烈振荡15秒并将其在室温下孵育3分钟。
5. 于4℃12,000rpm 离心10分钟，样品会分成三层：下层有机相，中间层和上层无色的水相，RNA存在于水相中。水相层的容量大约为所加RL体积的50%，把水相小心转移到新管中（不要触碰中间层），记录水相体积。
6. 加入水相体积一半也就是0.5倍体积的无水乙醇，混匀（此时可能会出现沉淀）。得到的溶液和可能沉淀一起转入吸附柱中（吸附柱套在收集管内，若一次不能将全部溶液和混合物加入吸附柱中，请分两次转入吸附柱中。) ，12,000rpm离心45秒，弃废液，将吸附柱重新套回收集管。
7. 加500μl 去蛋白液RE，12000rpm 离心45 秒，弃废液。
8. 加入500μl漂洗液RW（请先检查是否已加入无水乙醇!），12000rpm 离心45秒，弃废液。
9. 重复步骤8一次。
10. 将吸附柱放回空收集管中，13000rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液, 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
11. 取出吸附柱，放入一个RNase free离心管中，根据预期RNA产量在吸附膜的中间部位加50-80μl RNase free water，室温放置2分钟，12000rpm 离心1分钟。如果需要较多RNA，可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，离心1分钟，或者另外再加30μl RNase free water，离心1分钟，合并两次洗脱液。洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要RNA 浓度较高，可以适当减少洗脱体积， 但是最小体积最好不少于30μl，体积过小降低RNA 洗脱效率，减少RNA产量。


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