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T4 Polynucleotide Kinase
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511
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北京百奥莱博科技有限公司
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北京百奥莱博专业生产销*(代"售")WE0237型T4多聚核苷酸激酶(T4 PNK)促销,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:WE0237型T4多聚核苷酸激酶(T4 PNK)促销
规格:500U|2500U
英文名:T4 Polynucleotide Kinase
品牌:百奥莱博
产地:国产|进口
T4多聚核苷酸激酶,是由大肠杆菌表达,表达基因的来源为T4嗜菌体,可以催化磷酸在ATP的γ-位和寡核苷酸链(双链或单链DNA或RNA)的5’-羟基末端以及3’-单磷酸核苷间进行转移和交换,同时还具有3’磷酸酶活性,能将3’-磷酸基团从寡核苷酸的3’磷酸末端、脱氧3’-单磷酸核苷和脱氧3’-二磷酸核苷上水解掉。该T4多聚核苷酸激酶可用于寡核苷酸、DNA或RNA的5’末端标记或磷酸化;催化3’磷酸化的单核苷酸5’磷酸化以及去除3’端磷酸基团等。本品于75℃加热10分钟可使其失活,加入EDTA也可使其失活,金属离子螯合剂、磷酸盐、铵根离子、大于50 mM的KCl和NaCl均可显著抑制其活性。
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WE0237型T4多聚核苷酸激酶(T4 PNK)促销关键词:WE0237,T4 Polynucleotide Kinase,T4 PNK,T4多聚核苷酸激酶(T4 PNK)
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WE0237型T4多聚核苷酸激酶(T4 PNK)促销关键词:WE0237,T4 Polynucleotide Kinase,T4 PNK,T4多聚核苷酸激酶(T4 PNK)
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文献和实验【交流】关于NEB的T4 DNA连接酶和快速连接试剂盒的常见问题及解答
液: 1X T4 DNA Ligase Buffer: [50 mM Tris-HCl, 10 mM MgCl2, 10 mM DTT, 1 mM ATP, 25 µg/ml BSA, (pH 7.5 @ 25°C)]。推荐DNA浓度(0.1 - 1 µM 的5′末端)。 使用注意:ATP是反应必须的辅因子。这一点与要求NAD作辅因子的大肠杆菌DNA连接酶不同。 如在反应体系中补加1 mM的ATP,连接反应还可以在NEB提供的四种限制性内切酶缓冲液(NEBuffers)或在T4 DNA多聚核苷酸激酶
我做NF-kB的EMSA实验方法和结果,条带不好,请大家指点!
。 (7)吸取上清,为核蛋白提取物。 (8)马上进行EMSA实验。 探针制备: 用γ-32P-ATP及T4多核苷酸激酶对合成的转录因子结合和突变型寡核苷酸的两条互补链分别进行末端标记。20 µl反应总体积中,加寡核苷酸10 pmol,10×T4多聚核苷酸激酶缓冲液2µl,γ-32P-ATP 3 pmol,T4多核苷酸激酶10 u,37 ℃反应45 min,再置于68 ℃ 10 min灭活。在离心管中加入退火反应液60 µl,互补配对的两条链的标记产物各20 µl,于95 ℃变性5min,缓慢降温
的方法是:用平末端克隆法将片段插入已去磷酸化的载体上,(或使用NEB平端克隆试剂盒 #E0103)。插入片段的5"末端应磷酸化,除非在引物合成时,引物的5"末端已有磷酸基。 PCR产物是否能在PCR反应体系中直接磷酸化? 不能,因为PCR反应中的硫酸胺会抑制T4多聚核苷酸激酶活性。可采用胶回收或G25离心柱法来纯化DNA。在50 μl反应体系,加入1×T4 Polynucleotide Kinase Buffer、1 mM ATP 和 小于200 pmol的5"羟基末端
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