快速实时荧光定量PCR预混体系(高含量ROX校正染料)哪里卖

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名称：快速实时荧光定量PCR预混体系(高含量ROX校正染料)
产地：国产|进口
规格：5ml
品牌：百奥莱博
编号：WE0143
  本品是专用于染料法(SYBR GreenⅠ)实时荧光定量PCR的预混体系，浓度为2×,包含Fast Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、dNTPs、SYBR Green I荧光染料和Mg2+，操作简单方便。主要用于基因组DNA靶序列和RNA反转录后的cDNA靶序列检测。本品所含荧光染料SYBR Green I可以与所有的双链DNA相结合，使该产品可用于不同靶序列的检测而不需合成特异性标记探针。本品含有的Fast Taq DNA Polymerase能有效减少在常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增，酶的激活仅需在95℃孵育20s。整个PCR反应过程比普通反应可节省约40分钟，大大缩短了PCR的反应时间。独特的PCR缓冲体系与热启动酶的组合，有效抑制了非特异产物的产生，并显著提高PCR的扩增效率。该产品应用范围广，适用于普通和快速定量PCR程序，可适用于无需ROX校正的所有荧光定量PCR仪。

  ROX染料用于校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差，一般用于ABI、Stratagene等公司的Real Time PCR 扩增仪。不同仪器的激发光学系统有所不同，因此ROX染料的浓度必须与相应的荧光定量PCR仪相匹配。
不需要ROX校正的仪器(WE0141)：
Roche LightCycler 480，Roche LightCyler 96，Bio-rad iCyler iQ，iQ5，CFX96等。
需要Low ROX校正的仪器(WE0142)：
ABI Prism7500/7500 Fast，QuantStudio® 3 System，QuantStudio® 5 System，QuantStudio® 6 Flex System，QuantStudio® 7 Flex System，ViiA 7 system，Stratagene Mx3000/Mx3005P，Corbett Rotor Gene 3000等。
需要High ROX校正的仪器(WE0143)：
ABI Prism7000/7300/7700/7900，Eppendorf，ABI Step One/Step One Plus等。

产品组成：

 

组份	WE0141-5ml	WE0142-5ml	WE0143-5ml
2×BaFaSYBR Mixture	5×1ml	5×1ml	5×1ml
50×Low ROX	-	200μl	-
50×High ROX	-	-	200μl
ddH2O	5×1ml	5×1ml	5×1ml

注意事项：
1、使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。
2、本产品中含有荧光染料SYBR Green I，保存本产品或配制PCR反应液时应避免强光照射。
3、避免反复冻融本品，反复冻融可能使产品性能下降。本产品长期保存可置于-20℃，避光。如果在短期内需要频繁使用，可在2～8℃保存。
4、本品不能用于探针法荧光定量PCR。

使用方法：
以下举例为常规PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系：
 

试剂	50μl反应体系	终浓度
2×BaFaSYBR Mixture	25μl	1×
Forward Primer，10μM	1μl	0.2μM
Reverse Primer，10μM	1μl	0.2μM
Template DNA	2μl
50×Low ROX or High ROX(可选)	1μl	1×
ddH2O	up to 50μl

注意：
1)通常引物浓度以0.2μM可以得到较好结果，可以在0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。
2)通常DNA模板的量以10-100ng基因组DNA或1-10ng cDNA为参照，因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定最佳的模板使用量。
3)不同仪器的激发光学系统有所不同，根据使用荧光定量的仪器选择加入50×Low ROX or 50×High ROX.

2、PCR反应条件：
 

步骤	温度	时间	循环数
预变性	95℃	20 s
变性	95℃	3 s	35-40个循环
退火/延伸	60℃	30 s
融解曲线分析	95℃	15 s
	60℃	1 min
	95℃	15 s
	60℃	15 s

注意：
1)本产品所采用的酶须在预变性95℃、20s条件下实现酶的活化。在此条件下，大多数模板可良好的进行解链。对GC含量高、二级结构复杂的模板，可将预变性时间延长至1分钟，以使起始模板充分解链。若高温处理时间过长，会对酶的活性造成影响。可根据模板情况确定最佳的预变性时间。
2)建议采用两步法PCR反应程序，退火温度请以60-64℃作为设定范围的参考，发生非特异性反应时，可提高退火温度。若因使用Tm值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法PCR扩增，退火温度请以 56℃-64℃的范围作为设定参考。
3)融解曲线分析请以所使用的荧光定量PCR仪推荐的程序进行设定，本程序是以ABI 7500荧光定量PCR仪为参照设定。

储存条件：-20℃，避免反复冻融
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编号	名称
WE0103	Bes Taq DNA Polymerase
WE0349	抗HA标签单克隆抗体
WE0380	山羊抗兔IgG(H+L)
WE0347	抗GFP标签多克隆抗体
WE0163	高纯质粒中提试剂盒
WE0120	血液直接PCR扩增试剂盒
WE0299	NC膜(0.22μM)
WE0131	高效cDNA第一链合成试剂盒
WE0110	2×Babuddy MasterMix(含染料)
WE0393	HRP标记山羊抗小鼠IgG(H+L)
WE0311	Tris-甘*酸转膜缓冲液(pH8.3,10×)
WE0317	水性封片剂
WE0372	HRP标记驴抗山羊IgG(H+L)
WE0107	Pfu DNA Polymerase
WE0332	抗c-Myc标签单克隆抗体
WE0254	BL21(DE3)pLysS感受态细胞
WE0306	Western Blot封闭液Ⅰ(BSA)
WE0165	酵母质粒提取试剂盒
WE0121	Taq酶抗体
WE0400	口腔拭子DNA样本保存管
WE0339	抗RFP标签单克隆抗体
WE0246	2kb DNA Marker
WE0180	粪便基因组DNA提取试剂盒
WE0286	SDS-PAGE浓缩胶缓冲液(4×)
WE0323	DAB显色试剂盒(WB IHC)
WE0205	磁珠法DNA纯化回收试剂
WE0314	免疫组化试剂盒(兔源一抗)
WE0190	通用型柱式DNA提取试剂盒
WE0348	抗c-Myc标签多克隆抗体
WE0139	一步法Real-Time RT-qPCR试剂盒(高含量ROX校正染料)
WE0330	抗His标签抗体琼脂糖介质
WE0307	低背景ECL化学发光检测试剂盒
WE0381	Cy3标记山羊抗兔IgG(H+L)
WE0368	FITC标记驴抗大鼠IgG(H+L)
WE0155	BaldStar TaqMan Mixture(dUTP+UNG酶)(低含量ROX校正染料)
WE0290	G250蛋白快速染色试剂