pNLF1-C [CMV/Hygro]

pNLF1-C [CMV/Hygro]

pNLF1-C载体基本信息

出品公司:	Ybscience
载体名称:	pNLF1-C ; pNLF1-C [CMV/Hygro]
质粒类型:	哺乳动物载体；NanoLuc素酶报告载体
高拷贝/低拷贝:	--
克隆方法:	限制性内切酶，多克隆位点
启动子:	CMV IE
载体大小:	5964 bp
5' 测序引物及序列:	T7 Forward:TAATACGACTCACTATAGGG
3' 测序引物及序列:	--
载体标签:	NanoLuc
载体抗性:	氨苄青霉素
筛选标记:	潮霉素（Hygromycin）
克隆菌株:	TOP10等常规菌株
宿主细胞（系）:	常规哺乳动物细胞等
备注:	pNLF1-C [CMV/Hygro]载体表达NanoLuc融合蛋白；NanoLuc萤光素酶（Nluc）更小（19.1kDa）、更亮（比萤火虫和海肾萤光素酶亮度高 100 倍）。
稳定性:	瞬表达或稳表达
组成型/诱导型:	组成型
病毒/非病毒:	非病毒

 

pNLF1-C载体质粒图谱和多克隆位点信息

 

CMV immediate early enhancer/promoter                        1–742
Chimeric intron                                              857–989
T7 RNA polymerase promoter                                   1033–1052
Multiple cloning region                                      1052–1126
Linker                                                       1127–1138
NanoLuc® protein coding region                               1139–1648
SV40 late poly(A) region                                     1773–1994
SV40 early enhancer/promoter                                 2093–2505
Synthetic hygromycin (Hygr) coding region                    2536–3573
Synthetic poly(A) signal                                     3597–3645
β-lactamase (Ampr) coding region                             3906–4766
ColE1-derived plasmid replication origin                     4921–4957

 

pNLF1-C载体简介

 

NanoLuc萤光素酶融合表达载体pNLF1-C [CMV/Hygro]

更小（19.1kDa）、更亮（比萤火虫和海肾萤光素酶亮度高 100 倍）的 NanoLuc萤光素酶（Nluc）非常适用于蛋白融合应用。NanoLuc 融合蛋白应用广泛：作为蛋白稳定性报告基因、生物发光法细胞成像（BLI）探针或作为供体信号用于生物发光共振能量转移（BRET）研究蛋白: 蛋白或蛋白: 小分子相互作用研究。
NanoLuc 蛋白融合载体可方便的 N- 或 C-端融合 Nluc 和您感兴趣蛋白的融合蛋白；有两类形式载体可供选择：
pNLF 载体系列：产生 N- 或 C- 端融合全长 Nluc 的融合蛋白或应用传统的克隆方法（多克隆位点）将分泌型 Nluc 克隆到感兴趣的蛋白 N 端。 
pF 载体系列：使用 Flexi Vector Cloning System 产生 N- 端或 C- 端融合蛋白；Flexi Vector Cloning System 是一种直接克隆方法，基于两种稀有酶切位点 SgfI 和 PmeI，可以在 Flexi 载体之间转换蛋白编码序列，快速、高效和高保真。

特点 - 优点
 轻松定量蛋白丰度变化：使用 Nano-Glo Luciferase Assay System 进行单一试剂加样，来定量 NanoLuc 融合蛋白的信号，进而检测细胞内蛋白水平。
 生物相关性更高：NanoLuc 报告基因光信号更强，内源性表达水平的 NanoLuc 融合蛋白即可被检测到，可避免过度表达造成的假象。
 使蛋白的细胞内动态变化可视化：NanoLuc 报告基因光信号更强，缩短了成像曝光时间，无需反复激发样本，从而降低了激发造成的细胞毒性反应。
 改进 BRET 研究技术：NanoLuc 拥有更强的光信号，蓝移的发射光谱，因而与荧光受体的光谱交叉更少，信噪比更佳，动态范围更宽。
 灵活的克隆选择：可使用传统克隆方法或 Flexi 克隆系统轻松将 NanoLuc 与目标蛋白的 C 端或 N 端融合。
 可实现从瞬时转染到稳定转染的轻松过渡：所有载体都含有用于建立稳定细胞系的哺乳动物筛选标志物。

应用
 化合物筛选
 蛋白: 蛋白相互作用
 蛋白: 小分子相互作用
 生物发光成像
 蛋白稳定性研究

 

pNLF1-C载体序列

LOCUS       KF811458                5964 bp    DNA     circular SYN 03-FEB-2014
DEFINITION  C CMV-Hygro Vector pNLF1, complete sequence.
ACCESSION   KF811458
VERSION     KF811458.1  GI:576890573
KEYWORDS    .
SOURCE      C CMV-Hygro Vector pNLF1
  ORGANISM  C CMV-Hygro Vector pNLF1
            other sequences; artificial sequences; vectors.
REFERENCE   1  (bases 1 to 5964)
  AUTHORS   McNamara,B., Kopish,K. and Robers,M.
  TITLE     Direct Submission
  JOURNAL   Submitted (06-NOV-2013) Scientific Communications, Promega
            Corporation, 5500 E. Cheryl Parkway, Madison, WI 53711, USA
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..5964
                     /organism="C CMV-Hygro Vector pNLF1"
                     /mol_type="other DNA"
                     /db_xref="taxon:1454393"
     regulatory      1..742
                     /regulatory_class="promoter"
                     /note="CMV immediate early enhancer/promoter"
     intron          857..989
                     /note="chimeric"
     regulatory      1033..1052
                     /regulatory_class="promoter"
                     /note="T7 promoter"
     misc_feature    1052..1126
                     /note="multiple cloning region"
     misc_feature    1127..1138
                     /note="C-terminal NanoLuc linker"
     CDS             <1139..1651
                     /note="C-terminus"
                     /codon_start=1
                     /transl_table=11
                     /product="NanoLuc luciferase"
                     /protein_id="AHH41362.1"
                     /db_xref="GI:576890576"
                     /translation="VFTLEDFVGDWRQTAGYNLDQVLEQGGVSSLFQNLGVSVTPIQR
                     IVLSGENGLKIDIHVIIPYEGLSGDQMGQIEKIFKVVYPVDDHHFKVILHYGTLVIDG
                     VTPNMIDYFGRPYEGIAVFDGKKITVTGTLWNGNKIIDERLINPDGSLLFRVTINGVT
                     GWRLCERILA"
     regulatory      1773..1994
                     /regulatory_class="polyA_signal_sequence"
                     /note="SV40 late polyA signal"
     regulatory      2093..2505
                     /regulatory_class="promoter"
                     /note="SV40 early enhancer/promoter"
     gene            2536..3573
                     /gene="hygR"
     CDS             2536..3573
                     /gene="hygR"
                     /codon_start=1
                     /transl_table=11
                     /product="synthetic hygromycin resistance"
                     /protein_id="AHH41360.1"
                     /db_xref="GI:576890574"
                     /translation="MKKPELTATSVEKFLIEKFDSVSDLMQLSEGEESRAFSFDVGGR
                     GYVLRVNSCADGFYKDRYVYRHFASAALPIPEVLDIGEFSESLTYCISRRAQGVTLQD
                     LPETELPAVLQPVAEAMDAIAAADLSQTSGFGPFGPQGIGQYTTWRDFICAIADPHVY
                     HWQTVMDDTVSASVAQALDELMLWAEDCPEVRHLVHADFGSNNVLTDNGRITAVIDWS
                     EAMFGDSQYEVANIFFWRPWLACMEQQTRYFERRHPELAGSPRLRAYMLRIGLDQLYQ
                     SLVDGNFDDAAWAQGRCDAIVRSGAGTVGRTQIARRSAAVWTDGCVEVLADSGNRRPS
                     TRPRAKEVGRV"
     regulatory      3597..3645
                     /regulatory_class="polyA_signal_sequence"
                     /note="synthetic polyA signal"
     gene            3906..4766
                     /gene="ampR"
     CDS             3906..4766
                     /gene="ampR"
                     /function="resistance to ampicillin"
                     /note="ampicillin-resistance protein"
                     /codon_start=1
                     /transl_table=11
                     /product="beta-lactamase"
                     /protein_id="AHH41361.1"
                     /db_xref="GI:576890575"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGY
                     IELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVE
                     YSPVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRL
                     DRWEPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPL
                     LRSALPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIA
                     EIGASLIKHW"
     rep_origin      4921..4957
                     /note="ColE1-derived plasmid replication origin"
ORIGIN      
        1 tcaatattgg ccattagcca tattattcat tggttatata gcataaatca atattggcta
       61 ttggccattg catacgttgt atctatatca taatatgtac atttatattg gctcatgtcc
      121 aatatgaccg ccatgttggc attgattatt gactagttat taatagtaat caattacggg
      181 gtcattagtt catagcccat atatggagtt ccgcgttaca taacttacgg taaatggccc
      241 gcctggctga ccgcccaacg acccccgccc attgacgtca ataatgacgt atgttcccat
      301 agtaacgcca atagggactt tccattgacg tcaatgggtg gagtatttac ggtaaactgc
      361 ccacttggca gtacatcaag tgtatcatat gccaagtccg ccccctattg acgtcaatga
      421 cggtaaatgg cccgcctggc attatgccca gtacatgacc ttacgggact ttcctacttg
      481 gcagtacatc tacgtattag tcatcgctat taccatggtg atgcggtttt ggcagtacac
      541 caatgggcgt ggatagcggt ttgactcacg gggatttcca agtctccacc ccattgacgt
      601 caatgggagt ttgttttggc accaaaatca acgggacttt ccaaaatgtc gtaataaccc
      661 cgccccgttg acgcaaatgg gcggtaggcg tgtacggtgg gaggtctata taagcagagc
      721 tggtttagtg aaccgtcaga tcactagaag ctttattgcg gtagtttatc acagttaaat
      781 tgctaacgca gtcagtgctt ctgacacaac agtctcgaac ttaagctgca gaagttggtc
      841 gtgaggcact gggcaggtaa gtatcaaggt tacaagacag gtttaaggag accaatagaa
      901 actgggcttg tcgagacaga gaagactctt gcgtttctga taggcaccta ttggtcttac
      961 tgacatccac tttgcctttc tctccacagg tgtccactcc cagttcaatt acagctctta
     1021 aggctagagt attaatacga ctcactatag ggctagcaaa gcgatcgctt ccgaattcct
     1081 accgcggata tctagatttg ggcccaattc ctgcaggcga gctctcggct cgagcggcgt
     1141 cttcacactc gaagatttcg ttggggactg gcgacagaca gccggctaca acctggacca
     1201 agtccttgaa cagggaggtg tgtccagttt gtttcagaat ctcggggtgt ccgtaactcc
     1261 gatccaaagg attgtcctga gcggtgaaaa tgggctgaag atcgacatcc atgtcatcat
     1321 cccgtatgaa ggtctgagcg gcgaccaaat gggccagatc gaaaaaattt ttaaggtggt
     1381 gtaccctgtg gatgatcatc actttaaggt gatcctgcac tatggcacac tggtaatcga
     1441 cggggttacg ccgaacatga tcgactattt cggacggccg tatgaaggca tcgccgtgtt
     1501 cgacggcaaa aagatcactg taacagggac cctgtggaac ggcaacaaaa ttatcgacga
     1561 gcgcctgatc aaccccgacg gctccctgct gttccgagta accatcaacg gagtgaccgg
     1621 ctggcggctg tgcgaacgca ttctggcgta aggccgcgac tctagggcat gcaagctgat
     1681 ccggctgcta acaaagcccg aaaggaagct gagttggctg ctgccaccgc tgagcaataa
     1741 ctagcataac cccttggggc ggccgcttcg agcagacatg ataagataca ttgatgagtt
     1801 tggacaaacc acaactagaa tgcagtgaaa aaaatgcttt atttgtgaaa tttgtgatgc
     1861 tattgcttta tttgtaacca ttataagctg caataaacaa gttaacaaca acaattgcat
     1921 tcattttatg tttcaggttc agggggagat gtgggaggtt tttttaagca agtaaaacct
     1981 ctacaaatgt ggtaaaatcg aattttaaca aaatattaac gcttacaatt tcctgatgcg
     2041 gtattttctc cttacgcatc tgtgcggtat ttcacaccgc atacgcggat ctgcgcagca
     2101 ccatggcctg aaataacctc tgaaagagga acttggttag gtaccttctg aggcggaaag
     2161 aaccagctgt ggaatgtgtg tcagttaggg tgtggaaagt ccccaggctc cccagcaggc
     2221 agaagtatgc aaagcatgca tctcaattag tcagcaacca ggtgtggaaa gtccccaggc
     2281 tccccagcag gcagaagtat gcaaagcatg catctcaatt agtcagcaac catagtcccg
     2341 cccctaactc cgcccatccc gcccctaact ccgcccagtt ccgcccattc tccgccccat
     2401 ggctgactaa ttttttttat ttatgcagag gccgaggccg cctcggcctc tgagctattc
     2461 cagaagtagt gaggaggctt ttttggaggc ctaggctttt gcaaaaagct cgattcttct
     2521 gacactagcg ccaccatgaa gaagcccgaa ctcaccgcta ccagcgttga aaaatttctc
     2581 atcgagaagt tcgacagtgt gagcgacctg atgcagttgt cggagggcga agagagccga
     2641 gccttcagct tcgatgtcgg cggacgcggc tatgtactgc gggtgaatag ctgcgctgat
     2701 ggcttctaca aagaccgcta cgtgtaccgc cacttcgcca gcgctgcact acccatcccc
     2761 gaagtgttgg acatcggcga gttcagcgag agcctgacat actgcatcag tagacgcgcc
     2821 caaggcgtta ctctccaaga cctccccgaa acagagctgc ctgctgtgtt acagcctgtc
     2881 gccgaagcta tggatgctat tgccgccgcc gacctcagtc aaaccagcgg cttcggccca
     2941 ttcgggcccc aaggcatcgg ccagtacaca acctggcggg atttcatttg cgccattgct
     3001 gatccccatg tctaccactg gcagaccgtg atggacgaca ccgtgtccgc cagcgtagct
     3061 caagccctgg acgaactgat gctgtgggcc gaagactgtc ccgaggtgcg ccacctcgtc
     3121 catgccgact tcggcagcaa caacgtcctg accgacaacg gccgcatcac cgccgtaatc
     3181 gactggtccg aagctatgtt cggggacagt cagtacgagg tggccaacat cttcttctgg
     3241 cggccctggc tggcttgcat ggagcagcag actcgctact tcgagcgccg gcatcccgag
     3301 ctggccggca gccctcgtct gcgagcctac atgctgcgca tcggcctgga tcagctctac
     3361 cagagcctcg tggacggcaa cttcgacgat gctgcctggg ctcaaggccg ctgcgatgcc
     3421 atcgtccgca gcggggccgg caccgtcggt cgcacacaaa tcgctcgccg gagcgcagcc
     3481 gtatggaccg acggctgcgt cgaggtgctg gccgacagcg gcaaccgccg gcccagtaca
     3541 cgaccgcgcg ctaaggaggt aggtcgagtt tagactctag ccatcacgat ggccgcaata
     3601 aaatatcttt attttcatta catctgtgtg ttggtttttt gtgtgaatcg atagcgataa
     3661 ggatcctctt tgcgcttgcg ttttcccttg tccagatagc ccagtagctg acattcatcc
     3721 ggggtcagca ccgtttctgc ggactggctt tctacgtaat ggtttcttag acgtcaggtg
     3781 gcacttttcg gggaaatgtg cgcggaaccc ctatttgttt atttttctaa atacattcaa
     3841 atatgtatcc gctcatgaga caataaccct gataaatgct tcaataatat tgaaaaagga
     3901 agagtatgag tattcaacat ttccgtgtcg cccttattcc cttttttgcg gcattttgcc
     3961 ttcctgtttt tgctcaccca gaaacgctgg tgaaagtaaa agatgctgaa gatcagttgg
     4021 gtgcacgagt gggttacatc gaactggatc tcaacagcgg taagatcctt gagagttttc
     4081 gccccgaaga acgttttcca atgatgagca ctttcaaagt tctgctatgt ggcgcggtat
     4141 tatcccgtat tgacgccggg caagagcaac tcggtcgccg catacactat tctcagaatg
     4201 acttggttga gtactcacca gtcacagaaa agcatcttac ggatggcatg acagtaagag
     4261 aattatgcag tgctgccata accatgagtg ataacactgc ggccaactta cttctgacaa
     4321 ctatcggagg accgaaggag ctaaccgctt ttttgcacaa catgggggat catgtaactc
     4381 gccttgatcg ttgggaaccg gagctgaatg aagccatacc aaacgacgag cgtgacacca
     4441 cgatgcctgt agcaatggca acaacgttgc gcaaactatt aactggcgaa ctacttactc
     4501 tagcttcccg gcaacaatta atagactgga tggaggcgga taaagttgca ggaccacttc
     4561 tgcgctcggc ccttccggct ggctggttta ttgctgataa atctggagcc ggtgagcgtg
     4621 ggtctcgcgg tatcattgca gcactggggc cagatggtaa gccctcccgt atcgtagtta
     4681 tctacacgac ggggagtcag gcaactatgg atgaacgaaa tagacagatc gctgagatag
     4741 gtgcctcact gattaagcat tggtaattcg aaatgaccga ccaagcgacg cccaaccggt
     4801 atcagctcac tcaaaggcgg taatacggtt atccacagaa tcaggggata acgcaggaaa
     4861 gaacatgtga gcaaaaggcc agcaaaaggc caggaaccgt aaaaaggccg cgttgctggc
     4921 gtttttccat aggctccgcc cccctgacga gcatcacaaa aatcgacgct caagtcagag
     4981 gtggcgaaac ccgacaggac tataaagata ccaggcgttt ccccctggaa gctccctcgt
     5041 gcgctctcct gttccgaccc tgccgcttac cggatacctg tccgcctttc tcccttcggg
     5101 aagcgtggcg ctttctcata gctcacgctg taggtatctc agttcggtgt aggtcgttcg
     5161 ctccaagctg ggctgtgtgc acgaaccccc cgttcagccc gaccgctgcg ccttatccgg
     5221 taactatcgt cttgagtcca acccggtaag acacgactta tcgccactgg cagcagccac
     5281 tggtaacagg attagcagag cgaggtatgt aggcggtgct acagagttct tgaagtggtg
     5341 gcctaactac ggctacacta gaaggacagt atttggtatc tgcgctctgc tgaagccagt
     5401 taccttcgga aaaagagttg gtagctcttg atccggcaaa caaaccaccg ctggtagcgg
     5461 tggttttttt gtttgcaagc agcagattac gcgcagaaaa aaaggatttc aagaagatcc
     5521 tttgatcttt tctacggggt ctgacgctca gtggaacgaa aactcacgtt aagggatttt
     5581 ggtcatgaga ttatcaaaaa ggatcttcac ctagatcctt ttatagtccg gaaatacagg
     5641 aacgcacgct ggatggccct tcgctgggat ggtgaaacca tgaaaaatgg cagcttcagt
     5701 ggattaagtg ggggtaatgt ggcctgtacc ctctggttgc ataggtattc atacggttaa
     5761 aatttatcag gcgcgattgc ggcagttttt cgggtggttt gttgccattt ttacctgtct
     5821 gctgccgtga tcgcgctgaa cgcgttttag cggtgcgtac aattaaggga ttatggtaaa
     5881 tccacttact gtctgccctc gtagccatcg agataaaccg cagtactccg gccacgatgc
     5941 gtccggcgta gaggatcgag atct