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文献和实验[1]把细胞内外某离子的电化学电位等于零时的膜电位,称为该离子的平衡电位。可通过能斯特方程计算,例如钾离子的平衡电位 Ek 可赋予下式: 式中, [K ]0 和 [K ]1 分别是钾离子在膜外、内的浓度(确切的说是移动度), F是法拉第常数, T是绝对温度, R是气体常数。哺乳类动物骨胳肌的静息电位是 -90mV,离子的平衡电位钠是 66mV,钾是 -97mV,氯是 -90mV。因为在静息状态下,细胞膜主要对 K 、 Cl
反应速率 ④.底物浓度:酶被饱和 ⑤. 酶浓度 ⑥. 温度 ⑦. pH值 3. 酶的提取 ①. 破碎方法 机械匀浆法、超声波法、冻融法、渗透压法、酶消化法。 ②. 冻融液 需加入蛋白酶抑制剂PMSF、配合剂EDTA、还原剂DTT等防止破坏目的酶。 ③. 酶消化法 利用溶菌酶、蛋白水解酶、糖苷酶对细胞膜或细胞壁的酶解作用,使细胞崩解破裂。 4. 酶失活原因 1. 蛋白酶水解和自溶作用 酶在使用和储藏过程中的失活常是由于微生物和外源蛋白水解酶作用的结果。 2. 聚合作用 3. 极端pH值 4. 氧
样本 1) 取50 mg组织置于培养皿中,手术剪剪碎,加入200 μL预冷的裂解液工作液,冰上用玻璃匀浆器匀浆 (组织量加倍时,加入的预冷裂解液也加倍)。 2) 将匀浆好的样本转移到1.5 mL的离心管中,冰浴放置5 min裂解。 3.12,000 rpm在4°C下离心10-15 min。 4.小心地吸取上清转移至新的EP管中,并置于冰上待用。 5.立即测定Caspase的酶活性或者-70°C保存样本,亦可取少量样本用Bradford法[E-BC-K168,详询当地经销商]测定蛋白浓度。 6.Caspase
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