pCold III

pCold III

pColdIII载体基本信息

出品公司:	Ybscience
载体名称:	pCold III, pColdIII, pCold-III
质粒类型:	大肠杆菌蛋白表达载体
表达水平:	高
启动子:	CSPA
克隆方法:	多克隆位点，限制性内切酶
载体大小:	4377 bp
5' 测序引物及序列:	pCold-F: 5'-ACGCCATATCGCCGAAAGG-3'
3' 测序引物及序列:	pCold-R: 5'-GGCAGGGATCTTAGATTCTG-3'
载体标签:	/
载体抗性:	Ampicillin 氨苄
备注:	温度诱导，冷休克蛋白表达载体
稳定性:	瞬时表达 Transient
组成型:	诱导表达
病毒/非病毒:	非病毒

pColdIII载体质粒图谱和多克隆位点信息

pColdIII载体简介

阐明蛋白质的结构和功能是后基因组研究的一个重要课题。高效率的蛋白质表达系统是研究这些课题的不可缺少的基本技术。大肠杆菌作为宿主的表达系统中被广泛 使用于生产重组蛋白。大肠杆菌表达系统具有良好的优势,方法简单，成本低。然而，对于某些基因，蛋白表达很困难，表达的蛋白质不溶。

为了解决这些问题，TAKARA与Masayori Inouye教授（美国新泽西医学和牙科大学）进行联合研究，以制定一个高效基于低温冷休克蛋白基因的大肠杆菌表达载体。pCold DNA系列产品具有上述的优点，并提供了一个重要功能和结构的分析以及其他蛋白质研究领域的工具。

<产品概况和特点>
当培养的大肠杆菌的温度充分降低，几乎暂时停止生长大部分的蛋白表达减少，而此时一组蛋白质称为“冷休克蛋白”被专门诱导表达。

冷休克表达载体，pCold I-IV，是利用冷休克基因CSPA启动子设计高效率蛋白质表达载体。 CSPA的启动子的下游处，插入了lac操纵子，以便严格控制表达。此外，5'非翻译区（5'UTR），翻译增强元件（TEE），His标签序列，Xa因 子切割位点和多克隆位点（MCS）位于在CSPA启动子的下游的。由于该产品采用了大肠杆菌的启动子，大多数大肠杆菌菌株可被用作表达宿主。有四种类型的 pCold载体，他们的下列原件的位置稍有不同，TEE，His标签序列和Factor XA酶切位点。

pColdIII载体序列

LOCUS       pCold\III                4377 bp    DNA     circular SYN 10-AUG-2004
DEFINITION  Expression vector pColdIII DNA, complete sequence.
ACCESSION   AB186390
VERSION     AB186390.1  GI:51090253
KEYWORDS    .
SOURCE      Expression vector pColdIII
  ORGANISM  Expression vector pColdIII
            other sequences; artificial sequences; vectors.
COMMENT     This file is created by Vector NTI
            http://www.biofeng.com/
COMMENT     VNTAUTHORNAME|biofeng.com|
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..4377
                     /organism="Expression vector pColdIII"
                     /mol_type="other DNA"
                     /db_xref="taxon:289231"
                     /lab_host="Escherichia coli"
                     /note="expresses an open reading frame as a fusion to the
                     translation enhancing element. This plasmid is derived
                     from pUC118."
     gene            15..482
                     /gene="cspA"
     promoter        15..81
                     /gene="cspA"
     misc_feature    82..121
                     /gene="cspA"
                     /note="synthetic lac operator sequence"
     5'UTR           122..255
                     /gene="cspA"
                     /note="modified cspA 5'UTR"
     misc_feature    256..270
                     /gene="cspA"
                     /note="TEE (translation enhancing element)"
     misc_feature    271..330
                     /gene="cspA"
                     /note="MCS = Multiple cloning sites contain the follow
                     restriction sites: NdeI, SacI, KpnI, XhoI, BamHI, EcoRI,
                     HindIII, SalI, PstI, XbaI"
     3'UTR           338..482
                     /gene="cspA"
                     /note="cspA 3'UTR"
     misc_feature    complement(681..1154)
                     /note="M13 intergenic region"
     gene            1341..2201
                     /gene="Amp"
     CDS             1341..2201
                     /gene="Amp"
                     /codon_start=1
                     /transl_table=11
                     /product="beta-lactamase"
                     /protein_id="BAD35138.1"
                     /db_xref="GI:51090254"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGY
                     IELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVE
                     YSPVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRL
                     DRWEPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPL
                     LRSALPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIA
                     EIGASLIKHW"
     rep_origin      2361..2975
                     /note="ColE1 origin"
     gene            complement(3132..4214)
                     /gene="lacI"
     CDS             complement(3132..4214)
                     /gene="lacI"
                     /codon_start=1
                     /transl_table=11
                     /product="lactose operon repressor"
                     /protein_id="BAD35139.1"
                     /db_xref="GI:51090255"
                     /translation="MKPVTLYDVAEYAGVSYQTVSRVVNQASHVSAKTREKVEAAMAE
                     LNYIPNRVAQQLAGKQSLLIGVATSSLALHAPSQIVAAIKSRADQLGASVVVSMVERS
                     GVEACKAAVHNLLAQRVSGLIINYPLDDQDAIAVEAACTNVPALFLDVSDQTPINSII
                     FSHEDGTRLGVEHLVALGHQQIALLAGPLSSVSARLRLAGWHKYLTRNQIQPIAEREG
                     DWSAMSGFQQTMQMLNEGIVPTAMLVANDQMALGAMRAITESGLRVGADISVVGYDDT
                     EDSSCYIPPLTTIKQDFRLLGQTSVDRLLQLSQGQAVKGNQLLPVSLVKRKTTLAPNT
                     QTASPRALADSLMQLARQVSRLESGQ"
ORIGIN      
        1 aaggaatggt gtggccgatt aatcataaat atgaaaaata attgttgcat cacccgccaa
       61 tgcgtggctt aatgcacatc aaattgtgag cggataacaa tttgatgtgc tagcgcatat
      121 ccagtgtagt aaggcaagtc ccttcaagag ttatcgttga tacccctcgt agtgcacatt
      181 cctttaacgc ttcaaaatct gtaaagcacg ccatatcgcc gaaaggcaca cttaattatt
      241 aagaggtaat acaccatgaa tcacaaagtg catatggagc tcggtaccct cgagggatcc
      301 gaattcaagc ttgtcgacct gcagtctaga taggtaatct ctgcttaaaa gcacagaatc
      361 taagatccct gccatttggc ggggattttt ttatttgttt tcaggaaata aataatcgat
      421 cgcgtaataa aatctattat tatttttgtg aagaataaat ttgggtgcaa tgagaatgcg
      481 caggcccttt cgtctcgcgc gtttcggtga tgacggtgaa aacctctgac acatgcagct
      541 cccggagacg gtcacagctt gtctgtaagc ggatgccggg agcagacaag cccgtcaggg
      601 cgcgtcagcg ggtgttggcg ggtgtcgggg ctggcttaac tatgcggcat cagagcagat
      661 tgtactgaga gtgcaccata aaattgtaaa cgttaatatt ttgttaaaat tcgcgttaaa
      721 tttttgttaa atcagctcat tttttaacca ataggccgaa atcggcaaaa tcccttataa
      781 atcaaaagaa tagcccgaga tagggttgag tgttgttcca gtttggaaca agagtccact
      841 attaaagaac gtggactcca acgtcaaagg gcgaaaaacc gtctatcagg gcgatggccc
      901 actacgtgaa ccatcaccca aatcaagttt tttggggtcg aggtgccgta aagcactaaa
      961 tcggaaccct aaagggagcc cccgatttag agcttgacgg ggaaagccgg cgaacgtggc
     1021 gagaaaggaa gggaagaaag cgaaaggagc gggcgctagg gcgctggcaa gtgtagcggt
     1081 cacgctgcgc gtaaccacca cacccgccgc gcttaatgcg ccgctacagg gcgcgtacta
     1141 tggttgcttt gacgtatgcg gtgtgaaata ccgcacagat gcgtaaggag aaaataccgc
     1201 atcaggcgtc aggtggcact tttcggggaa atgtgcgcgg aacccctatt tgtttatttt
     1261 tctaaataca ttcaaatatg tatccgctca tgagacaata accctgataa atgcttcaat
     1321 aatattgaaa aaggaagagt atgagtattc aacatttccg tgtcgccctt attccctttt
     1381 ttgcggcatt ttgccttcct gtttttgctc acccagaaac gctggtgaaa gtaaaagatg
     1441 ctgaagatca gttgggtgca cgagtgggtt acatcgaact ggatctcaac agcggtaaga
     1501 tccttgagag ttttcgcccc gaagaacgtt ttccaatgat gagcactttt aaagttctgc
     1561 tatgtggcgc ggtattatcc cgtattgacg ccgggcaaga gcaactcggt cgccgcatac
     1621 actattctca gaatgacttg gttgagtact caccagtcac agaaaagcat cttacggatg
     1681 gcatgacagt aagagaatta tgcagtgctg ccataaccat gagtgataac actgcggcca
     1741 acttacttct gacaacgatc ggaggaccga aggagctaac cgcttttttg cacaacatgg
     1801 gggatcatgt aactcgcctt gatcgttggg aaccggagct gaatgaagcc ataccaaacg
     1861 acgagcgtga caccacgatg cctgtagcaa tggcaacaac gttgcgcaaa ctattaactg
     1921 gcgaactact tactctagct tcccggcaac aattaataga ctggatggag gcggataaag
     1981 ttgcaggacc acttctgcgc tcggcccttc cggctggctg gtttattgct gataaatctg
     2041 gagccggtga gcgtgggtct cgcggtatca ttgcagcact ggggccagat ggtaagccct
     2101 cccgtatcgt agttatctac acgacgggga gtcaggcaac tatggatgaa cgaaatagac
     2161 agatcgctga gataggtgcc tcactgatta agcattggta actgtcagac caagtttact
     2221 catatatact ttagattgat ttaaaacttc atttttaatt taaaaggatc taggtgaaga
     2281 tcctttttga taatctcatg accaaaatcc cttaacgtga gttttcgttc cactgagcgt
     2341 cagaccccgt agaaaagatc aaaggatctt cttgagatcc tttttttctg cgcgtaatct
     2401 gctgcttgca aacaaaaaaa ccaccgctac cagcggtggt ttgtttgccg gatcaagagc
     2461 taccaactct ttttccgaag gtaactggct tcagcagagc gcagatacca aatactgttc
     2521 ttctagtgta gccgtagtta ggccaccact tcaagaactc tgtagcaccg cctacatacc
     2581 tcgctctgct aatcctgtta ccagtggctg ctgccagtgg cgataagtcg tgtcttaccg
     2641 ggttggactc aagacgatag ttaccggata aggcgcagcg gtcgggctga acggggggtt
     2701 cgtgcacaca gcccagcttg gagcgaacga cctacaccga actgagatac ctacagcgtg
     2761 agctatgaga aagcgccacg cttcccgaag ggagaaaggc ggacaggtat ccggtaagcg
     2821 gcagggtcgg aacaggagag cgcacgaggg agcttccagg gggaaacgcc tggtatcttt
     2881 atagtcctgt cgggtttcgc cacctctgac ttgagcgtcg atttttgtga tgctcgtcag
     2941 gggggcggag cctatggaaa aacgccagca acgcggcctt tttacggttc ctggcctttt
     3001 gctggccttt tgctcacata gtcatgcccc gcgcccaccg gaaggagctg actgggttga
     3061 aggctctcaa gggcatcggt cgagatcccg gtgcctaatg agtgagctaa cttacattaa
     3121 ttgcgttgcg ctcactgccc gctttccagt cgggaaacct gtcgtgccag ctgcattaat
     3181 gaatcggcca acgcgcgggg agaggcggtt tgcgtattgg gcgccagggt ggtttttctt
     3241 ttcaccagtg agacgggcaa cagctgattg cccttcaccg cctggccctg agagagttgc
     3301 agcaagcggt ccacgctggt ttgccccagc aggcgaaaat cctgtttgat ggtggttaac
     3361 ggcgggatat aacatgagct gtcttcggta tcgtcgtatc ccactaccga gatatccgca
     3421 ccaacgcgca gcccggactc ggtaatggcg cgcattgcgc ccagcgccat ctgatcgttg
     3481 gcaaccagca tcgcagtggg aacgatgccc tcattcagca tttgcatggt ttgttgaaaa
     3541 ccggacatgg cactccagtc gccttcccgt tccgctatcg gctgaatttg attgcgagtg
     3601 agatatttat gccagccagc cagacgcaga cgcgccgaga cagaacttaa tgggcccgct
     3661 aacagcgcga tttgctggtg acccaatgcg accagatgct ccacgcccag tcgcgtaccg
     3721 tcttcatggg agaaaataat actgttgatg ggtgtctggt cagagacatc aagaaataac
     3781 gccggaacat tagtgcaggc agcttccaca gcaatggcat cctggtcatc cagcggatag
     3841 ttaatgatca gcccactgac gcgttgcgcg agaagattgt gcaccgccgc tttacaggct
     3901 tcgacgccgc ttcgttctac catcgacacc accacgctgg cacccagttg atcggcgcga
     3961 gatttaatcg ccgcgacaat ttgcgacggc gcgtgcaggg ccagactgga ggtggcaacg
     4021 ccaatcagca acgactgttt gcccgccagt tgttgtgcca cgcggttggg aatgtaattc
     4081 agctccgcca tcgccgcttc cactttttcc cgcgttttcg cagaaacgtg gctggcctgg
     4141 ttcaccacgc gggaaacggt ctgataagag acaccggcat actctgcgac atcgtataac
     4201 gttactggtt tcacattcac caccctgaat tgactctctt ccgggcgcta tcatgccata
     4261 ccgcgaaagg ttttgcgcca ttcgatggtg tccgggatct cgacgctctc ccttatgcga
     4321 ctcctgcatt aggaagcagc ccagtagtag gttgaggccg ttgagcaccg ccgccgc