北京快速DNA连接试剂盒哪里卖

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北京百奥莱博主要从事生物试剂的生产和销售，产品线涵盖北京快速DNA连接试剂盒哪里卖在内的分子生物学试剂产品，还包括PCR及荧光定量PCR、核酸提取试剂盒类、样本核酸保护试剂、核酸提取、克隆与转化、蛋白纯化、蛋白检测、免疫组化、细胞凋亡与抗体等。

规格：100次|500次
编号：YT028
英文名：Rapid DNA Ligation Kit
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口

快速DNA连接试剂盒是我公司研发的一种把DNA*(代"片")段在短至5分钟内快速插入到载体(vector)中的连接试剂盒。对于双粘端DNA*(代"片")段的插入仅需5分钟即可完成，对于双平端DNA*(代"片")段的插入仅需15分钟即可完成。同时本试剂盒也可以用于其它各种常规的双链DNA连接反应。
本试剂盒可以用于PCR片段和载体的连接、酶切产物和载体的连接、linker和载体的连接、linker和linker的连接等各种双链DNA的连接。
为了获得快速高效的连接效果，本试剂盒采用了一种特殊的高活力DNA连接酶，即Rapid T4 DNAligase，确保在短时间内可以获得很好的连接效果。
为了方便后续连接产物转化细菌，我公司对本试剂盒的快速连接缓冲液进行了优化，在确保连接效果的同时，确保完成连接后不必进行任何纯化即可直接转化细菌。另外，快速连接缓冲液中已经含有ATP、镁离子等各种必需物质，无需再添加其它任何试剂。
本试剂盒用于总体积为10μl的连接体系时可以进行100个连接反应，用于总体积为20μl的连接体系时可以进行50个连接反应。
保存条件：
-20℃保存。
注意事项：
连接反应完成后即可直接转化细菌，请勿采用加热方法失活Rapid T4 DNA ligase。加热处理会导致后续的转化效率显著下降。
对于载体单酶切插入外源片段的情况，需注意对载体进行脱磷处理，以避免质粒自连。

使用说明：
1. PCR产物或酶切片段和普通载体的连接：
a. 取1-2μg载体酶切过夜，或至少酶切3-5小时以上。尽量确保酶切充分，否则后续会导致产生很多自连的克隆。
b. 载体酶切完毕后，可以使用试剂盒进行纯化，例如PCR纯化试剂盒/DNA纯化试剂盒(D0033)。也可以采用常规的酚氯*(代"仿")抽提乙醇沉淀方法纯化载体。对于酶切产生较大片段(大于50-60bp)的情况推荐采用切胶回收的方式。
c. 对于PCR产物：PCR产物凝胶电泳后，切胶回收预期大小的DNA*(代"片")段。凝胶中DNA*(代"片")段的回收可以使用试剂盒进行操作，例如我公司的DNA凝胶回收试剂盒(D0056)。也可以采用反复冻融等方法回收DNA*(代"片")段。
d. 对于回收的PCR产物或其它需酶切的质粒或DNA*(代"片")段，用适当内切酶酶切，随后纯化酶切产物。注：这一步的酶切不必酶切特别充分，通常酶切效率能达到80-90%以上即可。即本步骤的酶切通常酶切1-2小时即可。酶切产物可以使用试剂盒进行纯化，例如我公司的PCR纯化试剂盒/DNA纯化试剂盒(D0033)。也可以采用常规的酚氯*(代"仿")抽提乙醇沉淀方法纯化载体。
e. 取约25-100ng经过酶切和纯化的载体，加入3倍摩尔数的待插入片段。参考下表设置连接反应体系。注：很多时候由于载体量和待插入片段的量都比较少，在回收后很难定量。此时可以根据回收前电泳条带的亮度进行大致的估计。通常以DNA分子量标准的某一条带为参考，估计或通过灰度半定量您的目的条带和该参考条带的亮度的比例关系。然后再按照预计的纯化或凝胶回收时的得率计算出最终得到的载体量和待插入片段量的比例关系。
载体 约25-50ng 约50-100ng
待插入片段 约载体摩尔数的3倍 约载体摩尔数的3倍
快速连接缓冲液(2X) 5μl 10μl
双蒸水或MilliQ水 至9.5μl 至19μl
Rapid T4 DNA ligase 0.5μl 1μl
总体积 10μl 20μl
f. 用移液器轻轻吹打混匀或轻微Vortex混匀，室温离心数秒，使液体积聚于管底。
g. 室温(25℃)孵育连接5-10分钟或更长时间。对于双平端连接需室温(25℃)孵育15-30分钟或更长时间。注1：对于双粘端连接：孵育5分钟通常可以达到孵育更长时间所能达到最佳连接效率的70-80%以上。孵育15分钟和孵育更长时间如60分钟等相比，无显著差异。连接5分钟后，如果转化等后续步骤还没有准备好，完全可以适当延长连接时间。但通常不宜超过60分钟。如果可能超过60分钟，可以在4℃或16℃放置较长时间甚至过夜。注2：对于双平端连接：孵育15分钟通常可以达到孵育更长时间所能达到最佳连接效率的70-80%以上。孵育30分钟和孵育更长时间如60分钟等相比，无显著差异。连接15分钟后，如果转化等后续步骤还没有准备好，完全可以适当延长连接时间。但通常不宜超过60分钟。如果可能超过60分钟，可以在4℃或16℃放置较长时间甚至过夜。注3：上述连接效率的数据在25℃时获得，在20-27℃时获得的连接效率比较接近。室温较低或较高时推荐在25℃水浴进行连接。
h. 随后即可直接取连接产物用于转化感受态细菌。
2. PCR产物和T载体的连接：
a. PCR产物凝胶电泳后，切胶回收预期大小的DNA*(代"片")段。凝胶中DNA*(代"片")段的回收可以使用试剂盒进行操作，例如我公司的DNA凝胶回收试剂盒(D0056)。也可以采用反复冻融等方法回收DNA*(代"片")段。
b. 按照T载体的说明书取适量T载体，加入3倍摩尔数的待插入片段。参考下表设置连接反应体系。注：很多时候由于载体量和PCR产物的量都比较少，在回收后很难定量。此时可以根据回收前电泳条带的亮度进行大致的估计。通常以DNA分子量标准的某一条带为参考，估计或通过灰度半定量您的目的条带和该参考条带的亮度的比例关系。然后再按照预计的纯化或凝胶回收时的得率计算出最终得到的载体量和PCR产物的量的比例关系。
T载体 适量 适量
待插入片段 约载体摩尔数的3倍 约载体摩尔数的3倍
快速连接缓冲液(2X) 5μl 10μl
双蒸水或MilliQ水 至9.5μl 至19μl
Rapid T4 DNA ligase 0.5μl 1μl
总体积 10μl 20μl
c. 用移液器轻轻吹打混匀或轻微Vortex混匀，室温离心数秒，使液体积聚于管底。
d. 室温孵育5-10分钟或更长时间。
注：孵育5分钟通常可以达到孵育更长时间所能达到最佳连接效率的70-80%以上。孵育15分钟和孵育更长时间如60分钟等相比，无显著差异。连接5分钟后，如果转化等后续步骤还没有准备好，完全可以适当延长室温的连接时间。但通常不宜超过60分钟。如果可能超过60分钟，可以在4℃或16℃放置较长时间甚至过夜。
e. 随后即可直接取连接产物用于转化感受态细菌。
3. Linker或RNAi片段和载体的连接：
a. 载体的酶切和纯化同步骤1a和1b。
b. Linker或RNAi片段的退火可以选择适当的DNA退火缓冲液，例如我公司的Annealing Buffer for DNA Oligos(5X)(D0251)， 进行退火反应。
c. 长度大于8bp的Linker或退火的RNAi片段，可以按照5:1至10:1的比例和载体进行连接反应。例如载体为0.03pmol，则插入片段可以为0.15至0.3pmol。长度小于8bp的linker，比例需调整为10:1以上。
d. 除插入片段的用量外，随后按照步骤1e，1f，1g，和1h进行。
4. DNA自身环化的连接：
参考步骤1e，待插入片段换成适量的水即可。其余步骤按照步骤1f，1g，和1h进行。
5. 其它类型的DNA*(代"片")段连接参考上述方法进行。
常见问题：
1. 连接反应后转化效率很低或阳性克隆非常少：
a. 可能感受态细菌转化效率太低，用质粒作为阳性对照同时检测感受态的转化效率。
b. 可以尝试提高载体或插入片段的纯度。对于平端连接需注意适当延长连接时间。
c. 可能载体酶切不够充分，用未经连接的载体转化作为阴性对照。
d. 用存放DNA的溶液进行转化，作为阴性对照，检测感受态细菌是否存在问题。
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·Cy3标记驴抗山羊IgG免疫荧光染色试剂盒
编号：YT101
英文名称：Immunol Fluorence Staining Kit with Cy3-Labeled Donkey Anti-Goat IgG
规格：>300次

免疫荧光染色试剂盒－抗山羊Cy3，含有Cy3标记的驴抗山羊IgG(H+L)抗体，可以用于检测山羊来源的相应一抗，观察到的颜色为非常鲜艳的红色。
Cy3是近年新开发的一种红色荧光探针。它比绝大部分其它的红色荧光探针更加明亮，更加不容易淬灭，而且背景更低。
本试剂盒提供了含有荧光标记抗体稳定剂的免疫荧光染色二抗稀释液，可以确保荧光标记抗体稀释后在4℃可以保存长达6个月，并且在6个月内至少可以重复使用10次。
本试剂盒含有抗荧光淬灭封片液，可以使荧光更加持久。
本试剂盒对于六孔板内的细胞样品或常规切片，至少可以检测300个样品。
保存条件：
-20℃保存，一年有效。同时抗山羊Cy3需避光保存。
注意事项：
需荧光显微镜或激光共聚焦显微镜。
在使用抗荧光淬灭封片液的情况下可以减缓淬灭，但仍宜尽量避光，特别是需要尽量缩短在荧光显微镜下的观察时间。
荧光物质均易发生淬灭，染色后宜尽快进行荧光显微镜下的观察。如果不能及时观察可以4℃避光保存，但存放时间通常不宜超过一周，随着存放时间的延长可能会导致观察效果越来越差。
免疫荧光染色效果的好坏和一抗的关系非常密切。建议选购有较多文献报道的并注明可以用于免疫荧光染色的一抗用于本实验。
如果观察时发现荧光过弱，可以适当提高一抗的浓度；如果荧光还是比较弱，可以适当提高荧光标记抗体的浓度。
需自行配制用于免疫荧光染色的相关试剂，需自备盖玻片和载玻片。



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ARB10874 人抗胰岛素受体抗体(AIRA)elisa检测 Human anti-insulin receptor antibody,aira ELISA KIT
ARB10194 人α乳清蛋白(α-LA)含量检测 Human α lactalbumin,α-la ELISA KIT
ARB12266 大鼠多巴胺(DA)Elisa方法检测 Rat dopamine,da ELISA KIT
N-壬酰基-N-甲基葡萄糖胺 Pyrene 85261-19-4
F030227 HRP标记兔抗鸭IgY IgG抗体 Rabbit Anti-Duck IgY*HRP
ARB11302 人复合前列腺特异性抗原(CPSA)Elisa分析 Human complex edprostate specific antigen,cpsa ELISA KIT
缩二脲 3-O-Methylglucose 108-19-0
830-81-9 1-Naphth 1 acetate 乙酸－1－奈脂
ARB13238 小鼠维生素B6(VB6)Elisa定量检测 Mouse vitamin b6,vb6 ELISA KIT
HC0253 多道可调移液器整支可消毒系列
25322-68-3 PEG12000 聚乙二醇
PY06-012 Rambach琼脂 1000ml，用于沙门氏菌及部分肠杆菌科细菌的快速分离与鉴别
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·总抗氧化能力检测试剂盒(FRAP法)
编号：YT312
英文名称：Total Antioxidant Capacity Assay Kit with FRAP method
规格：100次

总抗氧化能力检测试剂盒(FRAP法)，简称T-AOC Assay Kit，是一种采用Ferric Reducing Ability of Plasma(FRAP)方法，可以对血浆、血清、唾液、尿液等各种体液，细胞或组织等裂解液、植物或中草药抽提液、或各种抗氧化物(antioxidant)溶液的总抗氧化能力进行检测的试剂盒。
活性氧(Reactive oxygen species,ROS)主要包括羟基自由基、超氧自由基和过氧化氢。在细胞或组织的正常生理代谢过程中会产生活性氧，同时一些环境因子例如紫外照射、γ射线照射、吸烟、环境污染等也可以诱导活性氧的产生。活性氧产生后，可以导致细胞内脂、蛋白和DNA等的氧化损伤，诱发氧化应激(Oxidative stress)，继而导致各种肿瘤、动脉粥样硬化、风湿性关节炎、糖尿病、肝损伤、以及中枢神经系统疾病等。
机体中存在多种抗氧化物，包括抗氧化大分子、抗氧化小分子和酶等，可以清除体内产生的各种活性氧，以阻止活性氧诱导的氧化应激(oxidative stress)的产生。一个体系内的各种抗氧化大分子、抗氧化小分子和酶的总的水平即体现了该体系内的总抗氧化能力。因此测定血浆、血清、尿液、唾液等各种体液，细胞或组织等裂解液中的总抗氧化能力具有非常重要的生物学意义。
植物或中草药抽提液、或各种抗氧化物溶液的总抗氧化能力的检测可以用于检测各种溶液的抗氧化能力的强弱，可以用于筛选强抗氧化能力的药物。
FRAP法测定总抗氧化能力的原理是酸性条件下抗氧化物可以还原Ferric-tripyridyltriazine(Fe3+-TPTZ)产生蓝色的Fe2+-TPTZ，随后在593nm测定蓝色的Fe2+-TPTZ即可获得样品中的总抗氧化能力。由于反应在酸性条件下进行，可以抑制内源性的一些干扰因素。并且由于血浆等样品中的铁离子或亚铁离子的总浓度通常低于10μM，因此血浆等样品中的铁离子或亚铁离子不会显著干扰FRAP法的检测反应。由于反应体系中的铁离子或亚铁离子是和TPTZ螯合的，样品本身含有的少量金属离子螯合剂通常也不会显著影响检测反应。
保存条件：
-20℃保存，一年有效。其中S0116-2 TPTZ溶液，S0116-3 检测缓冲液和S0116-5 Trolox溶液(10mM)需避光保存。
注意事项：
在酸性条件下呈蓝色或接近蓝色的试剂会对本试剂盒的检测产生干扰，需尽量避免。
如果样品中含有外加的较高浓度的铁盐或亚铁盐，会干扰测定。但血浆、血清、细胞或组织裂解液等样品中含有的微量的铁盐或亚铁盐不会干扰测定。
样品中不能添加DTT、巯基乙醇等影响氧化还原反应的物质，也不宜添加Tween、Triton和NP-40等去垢剂。
测定时需可以测定A593的酶标仪一台(测585-605nm也可以)或可以测定微量样品的分光光度计一台。
TPTZ对人体有刺激性，请注意适当防护。

北京百莱博科技有限公司专业生产供应销售生物试剂、化学试剂、抗原抗体、血清血浆、Elisa试剂盒，更多试剂产品需求，欢迎来电咨询选购。