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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 英文名:
Hep G2+LUC
- 库存:
100
- 供应商:
镜像绮点
- 肿瘤类型:
肝细胞癌
- 细胞类型:
-
- 品系:
细胞系
- 组织来源:
肝癌组织
- 相关疾病:
肝细胞癌
- 物种来源:
组织
- 免疫类型:
否
- 细胞形态:
上皮细胞样
- 是否是肿瘤细胞:
是
- 器官来源:
肝癌组织
- 运输方式:
冻存/复苏
- 年限:
长期
- 生长状态:
贴壁生长
- 规格:
T25
细胞介绍
该细胞系来自15岁男性白人的组织。形态为上皮形,模式染色体数为55,在免疫抑制小鼠中不致瘤。
该细胞通过慢病毒转染的方式携带Luc基因。
细胞特性
1) 来源:肝细胞癌
2) 形态:上皮细胞样,贴壁生长
3) 含量:>1x10^6 细胞数
4) 规格:T25瓶或者1mL冻存管包装
5) 用途:仅供科研使用。

细胞筛选
该细胞为已经构建好的稳定转染Luc的细胞,随细胞传代次数的增加,其Luc荧光强度会逐渐减弱。若实验要求需要维持荧光强度,可以加入嘌呤霉素进行再次筛选。建议收到细胞后至少传3代,冻存留种后再进行筛选。初次进行细胞筛选时,建议加入终浓度为1ug/ml嘌呤霉素的完全培养基维持培养,若无细胞漂浮或者漂浮较少,即可更换为含2ug/ml嘌呤霉素的完全培养基继续筛选,以此类推,至最高药物浓度为5ug/ml。若筛选过程中,漂浮细胞大于60%,则停止筛选,换成正常培养基培养,至细胞密度约80%,可继续加入同浓度嘌呤霉素进行筛选。当加入5ug/ml嘌呤霉素时细胞正常增殖,可停止筛选,用不含药完全培养基正常培养。
一.培养基及培养冻存条件准备
1) 准备MEM(推荐iCell-0012)培养基;优质胎牛血清,10%;双抗,1%。
2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
培养注意事项:1. hepg2细胞复苏或传代后会有少部分的细胞贴壁和部分悬浮的细胞,复苏两天后细胞会从贴壁细胞向外开始生长,有时细胞再生长过程中,细胞会再贴壁细胞的上方生长,形成不同的细胞层,这种情况会有发生。 在细胞复苏的一周内,培养瓶中 通常会有悬浮的活的细胞团,在换液过程中不要丢弃在这些活的悬浮细胞,可以通过离心(125×g)回收细胞,重新打回到培养瓶中,分离或者丢弃漂浮的活细胞会使细胞数量变少,引起细胞的停滞生长或细胞死亡。
2.培养条件的细微变化,尤其是pH和培养基中血清的质量,可能会影响细胞的生长状况,在细胞的生长过程中会有细胞内的液泡出现,特别在细胞快要融合是会出现这种情况。培养细胞时使用未被灭活的高质量、低内毒素的胎牛血清,可以使细胞更好的贴壁和形成单层细胞。
3. 细胞在生长过程中可以通过将血清浓度提到到20%来改善细胞生长缓慢的情况。(参考atcc 有关该细胞的描述)
3) 冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。
该细胞为轻微贴壁和少量悬浮培养细胞,传代可以参考以下方法
1. 收集:将培养瓶中的悬浮的细胞收集到离心管中。用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。由于细胞贴壁不牢PBS润洗后细胞会脱落所以PBS也要回收到离心管中。
2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL)置于37℃培养箱中消化1-2分钟(难消化的细胞可以适当延长消化时间),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。
3. 将收集到的悬浮细胞、pbs清洗液中的细胞和消化下来的贴壁细胞以1000rpml离心5min,弃去上清,补加1-2mL培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
3) 细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。
业务范围



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