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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
避免反复冻融。2-8°C不超过一个月,-80°C不超过12个月
- 保质期:
1年
- 英文名:
Recombinant Major Histocompatibility Complex Class II DR Alpha (MHCDRa)
- 库存:
30
- 供应商:
联迈生物
- 规格:
10µg/50µg/200µg/1mg/1g
| 来源 | 原核表达 |
| 宿主 | E.coli |
| 内毒素水平 | <1.0EU/µg(LAL法测定) |
| 亚细胞定位 | n/a |
| 片段与标签 | N-terminal His Tag |
| 缓冲液成份 | 磷酸盐缓冲液(pH7.4,含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.) |
| 性状 | 冻干粉 |
原理:
蛋白质的翻译效率很大程度上跟翻译起始效率有关,因此mRNA的5'端必须得很好翻译,最好不要有复杂的二级结构;通过PCR的方法在基因的5‘端引入简并序列,构建克隆,挑选多个克隆,诱导表达之,SDS-PAGE电泳检测表达量的高低,挑选高表达克隆进行测序。
实验步骤:
1.设计目的重组蛋白质的N端10-15个氨基酸的简并序列。
2.引物合成上述简并序列,同时设计合成目的基因反向引物。
3.PCR扩展目的基因,这样在目的基因的5‘端就引入了兼并序列,同时不改变氨基酸序列。
4.双酶切,插入到目标载体。
5.转化。
6.挑选多个克隆(比如100-200个)到1.5ml EP管,直接诱导表达(记得带上为改造克隆菌株的对照)。
7.SDS-PAGE检测。
8.挑选高表达的多个克隆,测序。
重组蛋白的特性
Immune tech的重组蛋白分为冻干粉和溶液态两种保存形式,原核细胞表达的重组蛋白为冻干粉状态,真核细胞表达的重组蛋白为溶液态保存,这样使得重组蛋白非常稳定,在-80℃条件下可保存数年。冻干粉在使用前需进行溶解,其中溶解的方法非常关键,因为溶解不好会降低蛋白的效用。溶液态保存的重组蛋白在冻融稀释使用过程中也需要仔细注意,这些都是用户在实际应用中经常遇到的问题。
(1)原核细胞表达的重组蛋白。Immune tech大肠杆菌表达的冻干重组蛋白,已经从包涵体中提纯,添加了蛋白保护剂,使用过滤后的无菌水作为复溶剂即可,复溶冻干蛋白100 μg,用86 μl的超纯水,轻轻摇晃使蛋白溶解,再用移液枪的枪头轻吹几下即可完全溶解,一定不能使用涡旋仪进行快速振荡或剧烈摇晃。
(2)真核细胞表达的重组蛋白。有活性的蛋白质不仅要转录和翻译,还要进行翻译后的加工,使得蛋白质的空间折叠方式维持正常,所以重组蛋白必须在真核细胞中进行,如哺乳动物细胞能够识别和去除基因中的内含子,对翻译后的蛋白质进行加工,这样表达的蛋白质具有生物活性。我们用溶液态来保存,保持了其良好的活性和稳定性。
(3)重组蛋白的保护剂。在冻干和储存过程中常用的保护剂或稳定剂有糖类,多元醇,聚合物,表面活性剂,某些蛋白和氨基酸等。我们通常加8%(质量比体积)的海藻糖和甘露醇作为冻干保护剂。海藻糖可明显阻止蛋白质二级结构改变以及冻干过程中蛋白质的伸展和聚集,甘露醇也是一种普遍应用的冻干保护剂和填充剂。
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文献和实验HLA Ⅱ类基因区 HLAⅡ类基因区位于HLA复合体的着丝粒端,即从DRA到HLA-DPA3的一段区域,长度为0.9Mb,包含34个基因座位,其中16个为表达基因,3个后选基因,15个假基因。在16个表达基因中除了BRD2(原名RING3)外均有免疫学功能。Ⅱ类区域内至少含有DR、DQ、DP、DOA、IX)B和DM六个亚区。 (1)HLA-DR亚区:DR亚区有1个DRA基因及9个DRB基因。DRA基因不具多态性,其产物为DR分子的。链。9个DRB基因分别命名为DRBl~
大鼠5α-还原酶Ⅱ 酶联免疫 分析 试剂 盒使用说明书 本试剂仅供研究使用 目的:本试剂盒用于测定大鼠血清,血浆,细胞上清及相关液体样本中5α-还原酶Ⅱ的含量。 实验原理 : 本试剂盒应用双抗体夹心法测定 标本 中 大鼠5 α - 还原酶Ⅱ 水平。用纯化的 大鼠5 α - 还原酶Ⅱ 抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入 5α - 还原酶Ⅱ,再与 HRP 标记的 5 α - 还原酶Ⅱ抗体结合,形成
HLA Ⅱ类分子结构 Ⅱ类分子是由α链和β链组成的异二聚体。α链分子质量为33kDa,β链分子质量为28kDa,α链和β链以非共价键相互连接。与I类分子轻链不同,α链和β链各自均有两个胞外结构域(α1、α2和βl、β2)、穿膜序列和胞内段。α2/β2结构域与I类分子的α3结构域相似,能与T细胞表面的CD4受体结合。与I类分子不同,Ⅱ类分子的抗原结合槽分别由α链的α1结构域和β链的β1结构域相互结合,各自构成二条α7-螺旋和八条平行β-片层的一半,凹槽形状与I类分子凹槽极相似
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