- ￥1980 - 4280
- LMAI Bio
- 美国/中国
- LM116Hu01
- 2025年07月11日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
避免反复冻融。2-8°C不超过一个月，-80°C不超过12个月
- 保质期：
1年
- 英文名：
Recombinant Clock Homolog (CLOCK)
- 库存：
30
- 供应商：
联迈生物
- 规格：
10µg/50µg/200µg/1mg/1g
| 来源 | 原核表达 |
| 宿主 | E.coli |
| 内毒素水平 | <1.0EU/µg(LAL法测定) |
| 亚细胞定位 | n/a |
| 片段与标签 | N-terminal His Tag |
| 缓冲液成份 | 磷酸盐缓冲液（pH7.4，含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.） |
| 性状 | 冻干粉 |
原理：
蛋白质的翻译效率很大程度上跟翻译起始效率有关，因此mRNA的5'端必须得很好翻译，最好不要有复杂的二级结构；通过PCR的方法在基因的5‘端引入简并序列，构建克隆，挑选多个克隆，诱导表达之，SDS-PAGE电泳检测表达量的高低，挑选高表达克隆进行测序。
实验步骤：
1.设计目的重组蛋白质的N端10-15个氨基酸的简并序列。
2.引物合成上述简并序列，同时设计合成目的基因反向引物。
3.PCR扩展目的基因，这样在目的基因的5‘端就引入了兼并序列，同时不改变氨基酸序列。
4.双酶切，插入到目标载体。
5.转化。
6.挑选多个克隆（比如100-200个）到1.5ml EP管，直接诱导表达（记得带上为改造克隆菌株的对照）。
7.SDS-PAGE检测。
8.挑选高表达的多个克隆，测序。
重组蛋白的特性
Immune tech的重组蛋白分为冻干粉和溶液态两种保存形式，原核细胞表达的重组蛋白为冻干粉状态，真核细胞表达的重组蛋白为溶液态保存，这样使得重组蛋白非常稳定，在-80℃条件下可保存数年。冻干粉在使用前需进行溶解，其中溶解的方法非常关键，因为溶解不好会降低蛋白的效用。溶液态保存的重组蛋白在冻融稀释使用过程中也需要仔细注意，这些都是用户在实际应用中经常遇到的问题。
（1）原核细胞表达的重组蛋白。Immune tech大肠杆菌表达的冻干重组蛋白，已经从包涵体中提纯，添加了蛋白保护剂，使用过滤后的无菌水作为复溶剂即可，复溶冻干蛋白100 μg，用86 μl的超纯水，轻轻摇晃使蛋白溶解，再用移液枪的枪头轻吹几下即可完全溶解，一定不能使用涡旋仪进行快速振荡或剧烈摇晃。
（2）真核细胞表达的重组蛋白。有活性的蛋白质不仅要转录和翻译，还要进行翻译后的加工，使得蛋白质的空间折叠方式维持正常，所以重组蛋白必须在真核细胞中进行，如哺乳动物细胞能够识别和去除基因中的内含子，对翻译后的蛋白质进行加工，这样表达的蛋白质具有生物活性。我们用溶液态来保存，保持了其良好的活性和稳定性。
（3）重组蛋白的保护剂。在冻干和储存过程中常用的保护剂或稳定剂有糖类，多元醇，聚合物，表面活性剂，某些蛋白和氨基酸等。我们通常加8%（质量比体积）的海藻糖和甘露醇作为冻干保护剂。海藻糖可明显阻止蛋白质二级结构改变以及冻干过程中蛋白质的伸展和聚集，甘露醇也是一种普遍应用的冻干保护剂和填充剂。
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文献和实验许多生物的活动有明显的日周期性，此周期性即使在黑暗或其它环境恒定的条件下出会持续很长的时间。另外，许多生物对光周期具有灵敏的反应（参见光周期性），可知生物对光期或暗期的长短能够察知。再有蜜蜂在与外界隔绝的恒温、恒光照之下，可以学会在每日的一定时刻集中到一定的饲喂地点（时间学习）。某种候鸟似乎根据在一定的时候太阳的位置而了解一定的方位。（参见太阳指针）。从这些情况看来，不可否认生物是有以某种方法察知时间的机制。这种生物体内存在的察知时间的机制称生物钟，也称体内钟。
动物体内决定生物时间节律的一种生物化学机制。室内和田间实验都已表明，很多动物行为的年节律、月节律和日节律都是由生物体内的生物钟控制的，在动物与外界环境隔离的情况下，各种行为节律仍然会表现出来。但在很多情况下，外部环境也存在着定时因素，它可保持生物钟节律和环境节律之间的同步性。当把动物与这种定时因素隔离时，动物的生物钟节律就会偏离环境节律。例如在固定不变的实验室条件下，蜥蜴仍能保持明显的日活动节律，这说明这种节律是内在的。但它又不是对外界温度和光照 24小时周期节律的一种
Identification of Clock Genes Using Difference Gel Electrophoresis
Proteomics is the study of the complete set of proteins encoded by the genome. The study of the proteome involves the investigation of changes in protein abundance, localization, involvement in multiprotein complexes, and detection
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