- ￥1980 - 4280
- LMAI Bio
- 美国/中国
- LM388Ra02
- 2025年07月25日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
避免反复冻融。2-8°C不超过一个月，-80°C不超过12个月
- 保质期：
1年
- 英文名：
Recombinant Complement Component 5a (C5a)
- 库存：
30
- 供应商：
联迈生物
- 规格：
10µg/50µg/200µg/1mg/1g
| 来源 | 原核表达 |
| 宿主 | E.coli |
| 内毒素水平 | <1.0EU/µg(LAL法测定) |
| 亚细胞定位 | n/a |
| 片段与标签 | N-terminal His Tag |
| 缓冲液成份 | 磷酸盐缓冲液（pH7.4，含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.） |
| 性状 | 冻干粉 |
原理：
蛋白质的翻译效率很大程度上跟翻译起始效率有关，因此mRNA的5'端必须得很好翻译，最好不要有复杂的二级结构；通过PCR的方法在基因的5‘端引入简并序列，构建克隆，挑选多个克隆，诱导表达之，SDS-PAGE电泳检测表达量的高低，挑选高表达克隆进行测序。
实验步骤：
1.设计目的重组蛋白质的N端10-15个氨基酸的简并序列。
2.引物合成上述简并序列，同时设计合成目的基因反向引物。
3.PCR扩展目的基因，这样在目的基因的5‘端就引入了兼并序列，同时不改变氨基酸序列。
4.双酶切，插入到目标载体。
5.转化。
6.挑选多个克隆（比如100-200个）到1.5ml EP管，直接诱导表达（记得带上为改造克隆菌株的对照）。
7.SDS-PAGE检测。
8.挑选高表达的多个克隆，测序。
重组蛋白的特性
Immune tech的重组蛋白分为冻干粉和溶液态两种保存形式，原核细胞表达的重组蛋白为冻干粉状态，真核细胞表达的重组蛋白为溶液态保存，这样使得重组蛋白非常稳定，在-80℃条件下可保存数年。冻干粉在使用前需进行溶解，其中溶解的方法非常关键，因为溶解不好会降低蛋白的效用。溶液态保存的重组蛋白在冻融稀释使用过程中也需要仔细注意，这些都是用户在实际应用中经常遇到的问题。
（1）原核细胞表达的重组蛋白。Immune tech大肠杆菌表达的冻干重组蛋白，已经从包涵体中提纯，添加了蛋白保护剂，使用过滤后的无菌水作为复溶剂即可，复溶冻干蛋白100 μg，用86 μl的超纯水，轻轻摇晃使蛋白溶解，再用移液枪的枪头轻吹几下即可完全溶解，一定不能使用涡旋仪进行快速振荡或剧烈摇晃。
（2）真核细胞表达的重组蛋白。有活性的蛋白质不仅要转录和翻译，还要进行翻译后的加工，使得蛋白质的空间折叠方式维持正常，所以重组蛋白必须在真核细胞中进行，如哺乳动物细胞能够识别和去除基因中的内含子，对翻译后的蛋白质进行加工，这样表达的蛋白质具有生物活性。我们用溶液态来保存，保持了其良好的活性和稳定性。
（3）重组蛋白的保护剂。在冻干和储存过程中常用的保护剂或稳定剂有糖类，多元醇，聚合物，表面活性剂，某些蛋白和氨基酸等。我们通常加8%（质量比体积）的海藻糖和甘露醇作为冻干保护剂。海藻糖可明显阻止蛋白质二级结构改变以及冻干过程中蛋白质的伸展和聚集，甘露醇也是一种普遍应用的冻干保护剂和填充剂。
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文献和实验补体成分 C5(C5a/C5b) 补体成分：C5 血清浓度(μg/ml)：70 分子量(kDa)：190 亚单位(链)及分子量(kDa)：α∶115；β∶75 激活产物：C5a；C5b 生物学活性：C5a 强的过敏毒素作用、趋化作用、促代谢作用及免疫调节作用 C5b
补体受体及其生物学功能 补体系统许多生物学活性是通过表达于各种细胞表面的补体受体而实现的。业已阐明的补体受体，多数针对C3，其他受体以C4a和C5a等为配体，参与激发炎症反应和调控补体活性。 列出4种针对C3的补体受体，其中涉及C3的各种成分，包括其解离后的片段iC3b、C3d和C3dg等这些片段有的可单独与补体受体结合，有的具有与病原体表面黏着的活性。 补体成分Q的裂解 和各种相关分子的产生 以C3片段为配体的主要补体受体
型超敏反应 Ⅲ型超敏反应的主要特点是形成了大量游离于全身的抗原―抗体复合物，不能被肝和脾脏及时清除，从而在局部沉积。免疫复合物的形成原因可分为四类：轻度的持续感染；被动或长期免疫；自身免疫性疾病；吸入或摄人某些抗原物质。 小分子质量的免疫复合物可以透过血管内皮细胞间隙，达到毛细胞血管末梢，主要是皮肤、关节和肾脏局部，并结合到基底膜细胞上。免疫复合物能够活化补体经典途径，该过程中释放的补体成分C3a、C5a可刺激肥大细胞和嗜碱粒细胞释放
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