- ￥1980 - 4280
- LMAI Bio
- 美国/中国
- LM539Hu02
- 2025年12月09日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
避免反复冻融。2-8°C不超过一个月，-80°C不超过12个月
- 保质期：
1年
- 英文名：
Recombinant Serum Amyloid P Component (SAP)
- 库存：
30
- 供应商：
联迈生物
- 规格：
10µg/50µg/200µg/1mg/1g
| 来源 | 原核表达 |
| 宿主 | E.coli |
| 内毒素水平 | <1.0EU/µg(LAL法测定) |
| 亚细胞定位 | n/a |
| 片段与标签 | N-terminal His Tag |
| 缓冲液成份 | 磷酸盐缓冲液（pH7.4，含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.） |
| 性状 | 冻干粉 |
原理：
蛋白质的翻译效率很大程度上跟翻译起始效率有关，因此mRNA的5'端必须得很好翻译，最好不要有复杂的二级结构；通过PCR的方法在基因的5‘端引入简并序列，构建克隆，挑选多个克隆，诱导表达之，SDS-PAGE电泳检测表达量的高低，挑选高表达克隆进行测序。
实验步骤：
1.设计目的重组蛋白质的N端10-15个氨基酸的简并序列。
2.引物合成上述简并序列，同时设计合成目的基因反向引物。
3.PCR扩展目的基因，这样在目的基因的5‘端就引入了兼并序列，同时不改变氨基酸序列。
4.双酶切，插入到目标载体。
5.转化。
6.挑选多个克隆（比如100-200个）到1.5ml EP管，直接诱导表达（记得带上为改造克隆菌株的对照）。
7.SDS-PAGE检测。
8.挑选高表达的多个克隆，测序。
重组蛋白的特性
Immune tech的重组蛋白分为冻干粉和溶液态两种保存形式，原核细胞表达的重组蛋白为冻干粉状态，真核细胞表达的重组蛋白为溶液态保存，这样使得重组蛋白非常稳定，在-80℃条件下可保存数年。冻干粉在使用前需进行溶解，其中溶解的方法非常关键，因为溶解不好会降低蛋白的效用。溶液态保存的重组蛋白在冻融稀释使用过程中也需要仔细注意，这些都是用户在实际应用中经常遇到的问题。
（1）原核细胞表达的重组蛋白。Immune tech大肠杆菌表达的冻干重组蛋白，已经从包涵体中提纯，添加了蛋白保护剂，使用过滤后的无菌水作为复溶剂即可，复溶冻干蛋白100 μg，用86 μl的超纯水，轻轻摇晃使蛋白溶解，再用移液枪的枪头轻吹几下即可完全溶解，一定不能使用涡旋仪进行快速振荡或剧烈摇晃。
（2）真核细胞表达的重组蛋白。有活性的蛋白质不仅要转录和翻译，还要进行翻译后的加工，使得蛋白质的空间折叠方式维持正常，所以重组蛋白必须在真核细胞中进行，如哺乳动物细胞能够识别和去除基因中的内含子，对翻译后的蛋白质进行加工，这样表达的蛋白质具有生物活性。我们用溶液态来保存，保持了其良好的活性和稳定性。
（3）重组蛋白的保护剂。在冻干和储存过程中常用的保护剂或稳定剂有糖类，多元醇，聚合物，表面活性剂，某些蛋白和氨基酸等。我们通常加8%（质量比体积）的海藻糖和甘露醇作为冻干保护剂。海藻糖可明显阻止蛋白质二级结构改变以及冻干过程中蛋白质的伸展和聚集，甘露醇也是一种普遍应用的冻干保护剂和填充剂。
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文献和实验上海西唐生物科技有限公司 021-55229872, 65333639 www.westang.com 人血清淀粉样蛋白P (SAP)ELISA 试剂盒 ( 用于血清、血浆、细胞培养上清液和其它生物体液内 ) 原理 本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA 法。用抗人 SAP 单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的 SAP与单抗结合，加入生物素化的抗人 SAP ，形成免疫复合
(acutephaseprotein)，在人和小鼠中分别以C反应蛋白(CRP)及血清淀粉样P成分(SAP)为代表。这些分子在炎症信号及IL-6的激发下由肝脏产生。 (2)长分子家族以PTX3为代表，与短分子家族不同点是该家族成员带有一个长的N端结构域。PTX3在炎症信号激发下由单核／巨噬细胞、DC、成纤维细胞和内皮细胞产生。PTX3基因缺陷小鼠易于罹患真菌和细菌感染，表明这是一种重要的抗菌蛋白。 五聚体蛋白识别PAMP成分中的磷酸胆碱，并可结合多种分子如Clq、纤维母细胞生长因子2(FGF2)、胞外基质蛋白(TSC
、可识别一种或多种PAMP的受体分子。PRR与BCR或TCR不同，缺乏足够的多样性，非克隆性地表达于多种固有免疫效应细胞(尤其是Mφ等专职ATT；)表面。PRR一旦识别PAMP，效应细胞即立刻被激活而介导快速的生物学反应。 有人将PRR分为体液PRR和细胞PRR。前者属PAMP识别分子，如五聚体蛋白(pentraxin)家族，短分子家族如C反应蛋白(CRP)和血清淀粉样P蛋白(SAP)，长分子家族如PTX3、甘露糖结合凝集素(MBL)、脂多糖结合蛋白(LBP)等(见第七
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