北京一站式GST标记蛋白质微量纯化套装优惠促销

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京一站式GST标记蛋白质微量纯化套装优惠促销是高品质的蛋白质研究产品，由北京百奥莱博供应，用于科研实验，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多一站式GST标记蛋白质微量纯化套装等蛋白质研究产品请联系我司咨询订购。

名称：北京一站式GST标记蛋白质微量纯化套装优惠促销
品牌：百奥莱博
规格：20次
编号：BTN111116A
英文名：One-Stop GST-Tagged Protein Miniprep Pack(A)
产地：国产|进口
重组蛋白N端的GST谷胱甘肽S转移酶能提高重组蛋白的水溶性，所以常用于蛋白质重组表达。GST-谷胱甘肽亲和层析是利用GST 标记的蛋白能与谷胱甘肽层析介质结合，并能被还原型谷胱甘肽洗脱的特点而建立，是目前分离纯化GST 标记蛋白质的重要方法。本产品就是专门用于上述目的，其原理如下：


产品特点：
1．一站式套装，含所需的谷胱甘肽介质、溶液和层析柱，用户只需要提供表达GST 标记蛋白的细菌(酵母、杆状病毒、培养细胞)即可，非常方便。
2．专一性强，一次过柱即可获得纯度高达95%的GST-标记蛋白。
3．只能在非变性条件下使用，只可用于纯化没形成包涵体的GST 标记蛋白。
4．每次可以处理20mL的表达菌液，适合初步筛选和鉴定。
5．提供4mL浓度为50%的谷胱甘肽-Agarose 介质，可吸附5-10mg GST 标记蛋白质。
6．本介质可以反复使用多次。

试剂盒组成：

 

成分	20次(A)	20次(B)
谷胱甘肽-Agarose介质,50%	4ml	4ml
10×PBS缓冲液	100ml	100ml
溶液A	1ml	无
GST洗脱缓冲液成分一	25ml	25ml
GST洗脱缓冲液成分二	约80mg	约80mg
溶菌酶(20KU/mg)	无	30mg
Benzonase(2U/μL)	无	20μl
PMSF(10mg/mL)	0.5ml	0.5ml
6mL层析柱(带筛板)	1套	1套
说明书	1份	1份

储存条件：常温运输和保存，溶菌酶、Benzonase和PMSF 需低温运输。收到货后，介质需4℃保存，溶菌酶、Benzonase和PMSF 需-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
注意：
1．每步得到的样品最好都留存少量作为SDS-PAGE分析的对照，在下面描述中就不再提醒。
2．本实验需要用到的1×PBS缓冲液可用自备的超纯水稀释本试剂盒提供的10×PBS缓冲液而得。PBS缓冲液用超纯水稀释后极其容易长细菌，注意防止污染。
3．GST 洗脱液的配制方法是将约80mg GST 洗脱液成分二干粉全部加入到GST 洗脱液成分一溶液中，摇晃直到干粉全部溶解即得GST 洗脱液，分装成小份放-20℃保存，每次用一管。

一、重组蛋白的表达和细菌收集
1．37℃振荡培养20mL含表达质粒的细菌到OD600=0.6-0.8。
2．加IPTG 到终浓度为0.1mM，30℃振荡培养3小时或22℃振荡培养8小时(或过夜)。
3．4℃ 5000g离心10分钟收集20mL表达菌液，弃上清。
4．用1×PBS缓冲液重悬细菌沉淀，4℃ 5000g离心10分钟，弃上清。沉淀可直接用于裂解或放-80℃保存。

二、细胞裂解
5．如果用本产品A型，用1mL冰浴的新鲜配制的细胞裂解液(1mL 1×PBS缓冲液+50μl溶液A+ 25μl 10mg/mL的PMSF溶液)重悬细菌沉淀，冰上超声裂解菌体直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。超声参数需根据仪器型号自行摸索，一般选1K-10K 频率处理15次，每次20秒，间隔1分钟(必需放置在冰上)。裂解物不能粘稠，否则会堵塞层析柱。
6．如果用本产品B型，在1mL冰浴的新鲜配制的细胞裂解液(在20mL 1×PBS缓冲液中加入所有30mg 溶菌酶干粉，溶解后分装成1mL/管，取一管使用，剩余的-20℃放置)中加入25μl 10mg/mL的PMSF溶液和1μl Benzonase，用此混合液重悬细菌沉淀后冰上放置30分钟，得到细菌裂解物。
7．将超声或酶法细胞裂解物在13000 g 4℃离心10分钟去除未裂解细胞和裂解细胞碎片以防堵柱，所得上清即含可溶性GST 标记蛋白。

三、层析柱的制备和GST蛋白纯化
8．摇晃将谷胱甘肽-Agarose 介质充分混匀后，取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中(介质用量需要根据GST蛋白产量决定，100mL菌液一般使用200μL介质即可)。下列步骤各溶液的用量均针对200μL介质而定，如果介质用量不同，各溶液用量需相应调整。
9．用5mL预冷的1×PBS缓冲液洗柱。
10．将第7 步得到的上清液(含可溶性GST标记蛋白)上柱，让重力使上柱液自然流出，收集并保存穿透液用于SDS-PAGE电泳。GST和谷胱甘肽之间的结合很缓慢，所以流速一定不能快，否则结合不充分。流速一般在0.2-1mL/分钟即可。如要提高GST 标记蛋白与介质的结合效率，可用本试剂盒提供的红盖将层析柱下的漏液口堵上，让细菌裂解液和介质在4℃结合30分钟或过夜。也可以将穿透液反复上柱。
11．用0.5-2mL 1×PBS缓冲液洗柱，收集并保存穿透液(含杂蛋白)。
12．用0.2-1mL GST洗脱液洗柱，收集并保存穿透液(含GST 标记蛋白)。由于可能含蛋白酶污染，所以穿透液不能在4℃放置，需立即用于后续处理(如浓度测定或SDS-PAGE电泳)或-80℃长期放置。
13．对收集的2种穿透液和洗脱液进行蛋白定量或SDS-PAGE分析。注意：如果不预先脱盐，则只能用Bradford法或OD 检测法(1 OD280 约等于0.5mg/mL蛋白)测定穿透液和洗脱液的蛋白浓度。由于GST的分子量为26 KD，所以在SDS-PAGE胶上，GST 标记蛋白将比天然蛋白大26 KD。

附：GST柱的恢复(本试剂盒不含所需试剂)
1．用3倍体积的6M盐*(代"酸")胍处理柱子10分钟。
2．用3倍体积的超纯水处理柱子10分钟。
3．用3倍体积的缓冲液一(0.5M NaCl，0.1M Tris·HCl，pH8.5)处理柱子10分钟。
4．用3倍体积的缓冲液二(0.5M NaCl，0.1M Tris·HCl，pH4.5)处理柱子10分钟。
5．再重复3-4 步两次。
6．用3倍体积的超纯水处理柱子3次。
7．用3倍体积的1×PBS缓冲液处理柱子2次。
8．堵上漏口，加3倍体积的1×PBS缓冲液待用。若长时间不用，则第7步和第8步的1×PBS改成20%的乙醇。

更多有关北京一站式GST标记蛋白质微量纯化套装优惠促销的价格及使用说明等，请联系我们的业务经理王欣女士咨询，我公司还销*(代"售")以下产品：

·20%PVP K30溶液(不含RNase)
编号：BTN60605
英文名称：RNase-free PVP K30
规格：250mL

·酸洗玻璃珠(100μm)
编号：BTN100307A
英文名称：Acid-Washed Glassbeads(100μm)
规格：10g
本品是用浓酸充分洗涤后的玻璃珠，它是玻璃珠法破碎细菌和真菌的必备成分，主要用于从具有坚硬外壁的微生物细胞(如真菌孢子、酵母细胞、结核细胞等)中提取DNA、RNA和蛋白质大分子，因为用其他方法，包括酶解方法都很难沉底破碎具有坚硬外壁的微生物细胞。

产品特点：
1. 经过充分的酸洗，免去用户接触具有腐蚀性的浓酸。
2. 用本产品破碎具有坚硬外壁的微生物细胞，属于物理方法，不但比温和的化学破壁法普适性更好、重复性更好，同时不需要使用酶，因此不容易被酶中的外源核酸或蛋白质污染。
3. 用玻璃珠破碎法提取一个样品只需要10余分钟时间，非常快捷。注意：本产品需要跟本公司提供的裂解液、上柱液、离心吸附柱等配合使用才能用于核酸纯化。
4.一次可以处理5mL的微生物样品。
5. 本系列产品有各种规格、适用于不同材料。具体请参考下表：

编号	玻璃珠直径	最适用途
BTN100307A	100μm	作为超声破碎细菌时的添加物
BTN100307B	200μm	破碎细菌
BTN100307C	400μm	破碎酵母(如酿酒酵母)
BTN100307D	800μm	破碎霉菌、孢子等

储存条件：常温运输及保存，保存期为两年。

使用方法：
以我公司玻璃珠法柱式真菌DNA提取试剂盒(BTN100303)为例：离心收集1-5mL过夜培养的真菌细胞，加入0.5mL溶液A和体积相当于0.5mL的、直径为400μm玻璃珠(大约0.5克)，振荡器上以最高速度振荡10分钟，，再加入0.5mL溶液B，震荡2分钟，2000rpm离心2分钟，在上清中加入3倍体积的溶液C，上柱，用通用洗涤液洗两次，干甩一次，最后用50-100μL DNA洗脱液洗脱基因组DNA待用。

使用效果：

图注：使用本产品C型(BTN100307C)提取3mL过夜培养的毕赤酵母菌液，最后用50μl DNA洗脱液洗脱，5μl用于琼脂糖电泳。电压300V，电泳时间5分钟，染料为绿如蓝，缓冲液为SuperBuffer。


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·DNA marker(pBR322/BstN I)
编号：BTN90602G
英文名称：DNA ladder(pBR322/BstN I)
规格：50次
 本系列产品为传统的酶切分子量标准，由单一的质粒DNA或噬菌体DNA经单个限制性内切酶完成消化后，加热灭活而成。每次上样总DNA含量已知，每条带的含量可根据其摩尔数的比值计算出来。本系列产品成分中已经含有上样缓冲液，所以可以直接上样电泳。得到的电泳条带长度准确，明亮清晰，背景较低，稳定性很好。
 每次加样量为5μL，可用于相对定量。本系列产品与各种琼脂糖和各种电泳缓冲液兼容。

储存条件：低温运输、-20℃保存，有效期一年。

使用方法：直接上样电泳，每次加样量为5uL。

使用效果：


疑难解答：
a)如对带型要求较高，建议使用0.8-1.5%琼脂糖凝胶(对SuperBuffer-2缓冲液，电压为250-400V)或1.5-2.0%琼脂糖凝胶(对TAE或TBE缓冲液，电压为80V)，同时适当延长电泳时间。
b)电泳图象的质量与琼脂糖、电泳缓冲液有关。请采用高质量的琼脂糖，同时要经常更换电泳缓冲液。


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SJ0222 D-Gluconate Sodium  D-葡萄糖酸*
9006-59-1 Albumin  Egg   卵清蛋白
ARB13271 小鼠酸性磷酸酶(ACP)Elisa定量检测 Mouse acid phosphatase,acp ELISA KIT
D-*丙*醇 Glyphosate 5267-64-1
9007-34-5 Collgen TypeⅡ  胶原蛋白Ⅱ型(鸡)
ARB13355 牛甲状腺素(T4)ELISA代测服务 
ARB10420 人丙*酸转*酶/谷丙转*酶(ALT/GPT)elisa检测说明书 Human alanine aminotransferase,alt/gpt ELISA KIT
DNA Marker Ⅱ Uric acid sodiu*(代"m") salt
HC0132 玻璃纸
D0102 脱纤维新生牛血(无菌 袋装)
ARB13468 鸡免疫球蛋白A(IgA)酶标法分析 Chicken immunoglobulin a,IgA ELISA KIT
ARB13555 兔子中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)定量分析 Rabbit neutrophil elastase,ne ELISA KIT
ARB11296 人钩端螺旋体IgG(Lep IgG)酶免分析 Human leptospira igg,lep igG ELISA KIT

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