农杆菌EHA101感受态细胞特价促销

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名称：农杆菌EHA101感受态细胞特价促销
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
规格：10×100μL
编号：BTN161205
 EHA101菌株为C58型背景，核基因中含有筛选标签-利福平抗性基因rif，为了便于转化操作，此菌株携带一无自身转运功能的胭脂碱型Ti质粒pEHA101(pTiBo542DT-DNA)，此质粒含有vir基因，vir基因是T-DNA 插入植物基因组必需的元件。pEHA101(pTiBo542DT-DNA)质粒自身的T-DNA转移功能被破坏，但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移。pEHA101(pTiBo542DT-DNA)型Ti质粒含有筛选标签：kan，赋予EHA101菌株卡那霉素抗性，适用于玉米、水稻、烟草等植物的转基因操作。

 本公司生产的EHA101化学转化感受态细胞经特殊工艺制作，pK7WGF2质粒(壮观霉素抗性)检测转化效率>104cfu/μg DNA。EHA101农杆菌的基因型是：C58(rifR)TipEHA101(pTiBo542 D T-DNA)(kanR)Nopaline。

产品组成：

 

成分	规格
EHA101 农杆菌感受态细胞	0.1ml×10
pKWGF2(10ng/uL)	10μl
说明书	1份

储存条件：干冰运输，-80℃保存，有效期一年。

自备试剂：质粒DNA、液氮等。

使用方法：

转化前准备
1. 冰水浴和37℃水浴。
2.液氮或干冰/乙醇混合物。
3. 将抗性平板在28℃培养箱中平衡至少15分钟。
转化方法
1. 取-80℃保存的农杆菌感受态于室温或手心片刻待其部分融化，处于冰水混合状态时插入冰中。
2. 每100μL感受态加1μg(体积不大于10μL)质粒DNA，用手拨打管底混匀，依次于冰上静置5分钟、液氮5分钟、37℃水浴5分钟、冰浴5分钟。
3. 加入700μL无抗生素的LB或YEB液体培养基，于28℃振荡培养2～3小时。
4. 6000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的LB或YEB 平板上，倒置放于28℃培养箱培养2-3天(当平板只含有转化所用双元载体抗生素时，28℃培养48小时即可；平板中同时加入双元载体抗生素，20μg/ml rif时，需28℃培养60小时；如果使用的平板含有50μg/ml rif 则需要28℃培养72-90小时)。

注意事项：
1、加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10；质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，转化效率急剧下降；质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。
2、混入质粒时应轻柔操作。转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
3、平板上阳性克隆密度过大时，由于营养不足，阳性克隆生长变慢，菌落变小，为了获得大的菌落，应减少质粒用量。
4、利福平浓度不应高于25μg/mL，过高的利福平浓度不利于农杆菌生长，会降低其生长速度和转化效率。本公司EHA101感受态计算转化效率时所用平板只含有50μg/mL kan，若所用平板含有20μg/mL rif 则转化效率降低到1/2。
5、培养基中加入利福平的目的是防止杂菌生长、筛选农杆菌；根据所用菌株抗性加入链霉素或庆大霉素可防止Ti质粒丢失，但链霉素不利于农杆菌的转基因操作，所以一般培养农杆菌时不考虑链霉素或庆大霉素，Ti质粒丢失的概率极低(可以忽略)。

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·核酸外切酶I
编号：BTN120410
英文名称：Exonulease I
规格：750U
核酸外切酶I是单链特异性3´→5´核酸外切酶，从ssDNA的3´-OH末端分解生成5´-单核苷酸。本酶对单链DNA的特异性非常高，不分解双链DNA及RNA。

产品特点：
➤ PCR反应后残存Primer的分解，对PCR产物进行测序时，如果在反应体系中残存Primer和dNTP，测序反应则不能正常进行。使用Exonuclease I可以解多余的Primer；同时使用SAP(BTN120403)可降解多余的dNTP，之后不需要对 PCR产物进行精制，立即可以进行测序反应。
➤ P在反应液中去除ssDNA fragment。

产品组成：

成分	规格
核酸外切酶I(5U/μl)	150μL
10×Buffer	1ml
使用手册	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期半年。

贮存Buffer：Tris-HCl(pH7.5)20mM，EDTA 0.5mM，DTT1mM，Glycerol 50%。

反应Buffer(10×)：Glycine-KOH(pH9.5)670mM，DTT 10mM，MgCl2 67mM。

热失活：80℃热处理15分钟

活性定义：以热变性的小牛胸腺DNA为底物，在37℃、pH9.5的条件下，30分钟内产生10nmol的酸可溶性物质所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。

纯度
1．25U的本酶和1μg的λDNA-Hind III片段在37℃、pH7.5的条件下反应16小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
2．25U的本酶和1μg的Closed circular(RFI)pBR322 DNA在37℃、pH7.5的条件下反应16小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
3．25U的本酶和1μg的M13 mp18 ssDNA在37℃、pH7.5的条件下反应16小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
4．25U的本酶和1μg的16S，23S rRNA在37℃、pH7.5的条件下反应16小时，RNA的电泳谱带不发生变化。


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