农杆菌AGL1化学感受态细胞优惠

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")农杆菌AGL1化学感受态细胞优惠，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：农杆菌AGL1化学感受态细胞优惠
产地：国产|进口
英文名：E.coli AGL1 Chemical Competent Cell
规格：10×100μL
品牌：百奥莱博
 AGL1菌株为C58，RecA型背景，核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因rif和羧苄青霉素抗性基因carb，为了便于转化操作，此菌株携带一无自身转运功能的琥珀碱型Ti质粒 pTiBo542DT-DNA，此质粒含有vir基因(vir基因是T-DNA 插入植物基因组必需的元件，pTiBo542DT-DNA质粒自身的T-DNA转移功能被破坏，但可以帮助转入的双元载体T-DNA 顺利转移)。

 本产品为AGL1 农杆菌化学感受态细胞，适用于水稻、杨树、拟南芥等植物的转基因操作，经pCAMBIA2301质粒检测转化效率高达103cfu/μg。

基因型：C58 RecA(rifr/carbr)Ti pTiBo542DT-DNA Succinamopine。

储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期一年。

自备试剂：质粒DNA、液氮等

使用方法：

转化前准备
1. 冰水浴和37℃水浴。
2.液氮或干冰/乙醇混合物。
3. 将抗性平板在28℃培养箱中平衡至少15分钟。
转化方法
1. 取-80℃保存的农杆菌感受态细胞于室温或手心片刻待其部分融化，处于冰水混合状态时插入冰中。
2. 无菌条件下，向刚刚融化的感受态细胞悬液中加入需要转化的质粒，每100μL感受态细胞加1μg(体积不大于10μl)质粒DNA，轻柔混匀。冰水浴中静置5分钟。
3. 将离心管置于液氮中速冻5分钟(注：也可以用干冰和无水乙醇混合物替代液氮)。
4. 迅速将离心管置于37℃水浴静置中5分钟，不要晃动水面。然后快速转至冰水浴中静置5分钟。
5. 加入800μl 无抗生素的2×YT或LB液体培养基，28-30℃振荡培养2～3小时。使菌体复苏，表达抗性。
6. 5000rpm离心1分钟收菌，保留100μl左右上清，轻轻吹打重悬菌体，均匀涂布到含有相应抗生素的LB 固体培养基平板上，待平板中的液体完全吸收后，倒置平板，28-30℃培养48-72小时。(注：当平板只含有50μg/mLkan时，28℃培养48小时即可；平板中同时加入50μg/mL kan，20μg/mL rif时，需28℃培养60小时；如果使用的平板含有50μg/mL rif 则需要28℃培养72-90小时)。

除农杆菌AGL1化学感受态细胞优惠外，我公司正在打折促销以下产品：

·SDS-PAGE电泳液(干粉)
编号：BTN81203
英文名称：SDS-PAGE Running Buffer
规格：5L
本产品为干粉型SDS-PAGE电泳液，加水配制后即可直接用于SDS-PAGE电泳，非常方便。

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

·dATP溶液(100mM)
编号：BTN120615
英文名称：dATP Solution(100mM)
规格：0.5mL
本产品纯度在98%以上(HPLC检测)，不含DNA内切酶、DNA外切酶、RNA酶和磷酸酶的污染，可以直接用于PCR、RT-PCR、cDNA合成、DNA测序、DNA探针标记等反应。

dATP分子式为C10H13N5O12P3Na3,分子量是557.2，消光系数为15.2×103 M-1×cm-1(pH7.0)。λmax为259nm。

储存条件：低温运输和-20℃保存、有效期一年。

·细菌膜蛋白质微量提取试剂盒
编号：BTN100929
英文名称：Bacterial Membrane Protein Miniprep Kit
规格：50次
本试剂盒是基于超速离心的快速提取细菌膜蛋白的试剂盒。其原理是裂解细胞后，通过超速离心分离出细胞膜和附着的蛋白质。

产品特点：
1.一步式分离细胞膜和膜蛋白，密度梯度离心法简单快捷。
2. 膜蛋白纯度高，能够去除各种胞浆蛋白的污染，也能去除松散附着在细胞膜上的蛋白，所得膜蛋白主要是整合蛋白。
3. 膜蛋白完整性好，主要是由于实际中有抑制蛋白酶成分。
4. 回收效率高，一般能得到相当于总蛋白量6%的膜蛋白。
5.可用于E.coli，S.typhimurium，K.aerogens，P.aeruginosa，C.crescentus等细菌。

试剂盒组成：

 

成分	规格
溶液A	125ml
溶液B	25ml
溶液C	250ml
DNase I干粉	3.5mg
说明书	1份

储存条件：低温运输和保存，DNase I 需要低温保存。有效期一年。

使用方法：
准备：第一次使用本试剂盒时需要将所有DNase I干粉倒入溶液B中，轻柔颠倒使DNase干粉溶解。未用完的部分需要放-20℃保存，最好在一个月内完，否则DNase 将逐渐失去活性。此外，最好在实验前1小时将溶液B冰浴预冷。

用法一：小量制备(主要用于上样量比较小的SDS-PAGE电泳等实验)
1．收集20-40mL 过夜培养的细菌饱和培养液(OD420在1.5左右即可)，2500g室温离心10分钟后弃上清。
2．加入2mL溶液A，轻柔吹打，将细菌重悬于溶液A中。
3．2500 g室温离心10分钟后弃上清。
4．加入0.5mL溶液B(必须已经提前加入了DNase I干粉)，轻柔吹打使细菌重悬。注：如果细菌起始量没有20-40mL，溶液A的用量可以等比例降低。重悬在溶液A中的细菌可以放-80℃长期保存。
5．用超声或French Press方法裂解细胞。如果用French Press方法，则需要处理至少两次，每次的压力为9.65×10E7(=14000 psi)。注意：不论用哪种裂解方法，都必须在显微镜下检查细菌是否已经裂解，否则还需要重复细菌裂解过程，直到80%以上的细菌都裂解为止。
6．2500g室温离心8分钟后小心转移上清到新的10mL-15mL塑料离心管中(如Beckman Optima 台式超速离心机离心管)，弃沉淀(未破裂细胞)。
7．在上清(细菌裂解液)中加入5mL预冷的溶液C，轻柔颠倒混匀后冰浴放置30-60分钟。其间可以轻柔颠倒混匀3-5次。
8．用 Bechman Optima 台式超速离心机115000g 4℃离心60分钟。也可以使用其他冷冻超速离心机，但离心力应该一致，否则有可能得不到沉淀。
9．小心移弃上清，在沉淀中加入0.2mL溶液A，充分吹打混匀。
10．用Beckman Optima 台式超速离心机 115000g 4℃离心60分钟。也可以使用其他冷冻超速离心机，但离心力应该一致，否则有可能得不到沉淀。
11．小心移弃上清，所得沉淀放-20℃长期保存，也可以直接加入0.1mL自备的，跟后续实验兼容的缓冲液(如1×SDS-PAGE上样液中，可从本公司购买)，所得膜蛋白的浓度将在1mg/mL左右。

用法二：大量制备(主要用于上样量比较大的2D电泳等实验)
1．收集200-400mL 过夜培养的细菌饱和培养液(OD420在1.5左右即可)，2500 g室温离心10分钟后弃上清。
2．加入20mL溶液A，轻柔吹打，将细菌重悬于溶液A中。
3．2500 g室温离心10分钟后弃上清。
4．加入5mL溶液B(必须已经提前加入了DNase I干粉)，轻柔吹打使细菌重悬。注：如果细菌起始量没有200-400mL，溶液A的用量可以等比例降低。重悬在溶液A中的细菌可以放-80℃长期保存。
5．用超声或French Press方法裂解细胞。如果用French Press方法，则需要处理至少两次，每次的压力为9.65×10E7(=14000 psi)。注意：不论用哪种裂解方法，都必须在显微镜下检查细菌是否已经裂解，否则还需要重复细菌裂解过程，直到80%以上的细菌都裂解为止。
6．2500g室温离心8分钟后小心转移上清到干净的玻璃烧杯中，弃沉淀(未破裂细胞)。
7．在上清(细菌裂解液)中加入50mL预冷的溶液C，轻轻在冰浴中搅拌混匀30-60分钟。注：可以在大烧杯中装冰，然后将装有样品的小烧杯放入，在放入干净的搅拌子，以最低速度搅拌。
8．用 Beckman Type 55.2 Ti转头 115000g 4℃离心60分钟。也可以使用其他冷冻超速离心机，但离心力应该一致。
9．小心移弃上清，在沉淀中加入2mL溶液A，充分吹打混匀。
10．用Beckman Type 55.2 Ti转头 115000g 4℃离心60分钟。也可以使用其他冷冻超速离心机，但离心力应该一致。
11．小心移弃上清，所得沉淀放-20℃长期保存或溶解在1mL自备的，跟后续实验兼容的缓冲液(如1×等电点电泳上样液，可从本公司购买)，所得膜蛋白的浓度在1mg/mL左右。


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