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农杆菌EHA105化学感受态细
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干冰运输、-80℃保存
长期
E.coli EHA105 Chemical Competent Cell
413
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产供应农杆菌EHA105化学感受态细胞品牌,我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂,价格优惠,欢迎广大科研工作者垂询订购。
名称:农杆菌EHA105化学感受态细胞品牌品牌:百奥莱博产地:国产|进口编号:BTN140383 本产品为EHA105农杆菌化学感受态细胞,为C58型背景,核基因中含有筛选标签-利福平抗性基因rif,为了便于转化操作,此菌株携带一无自身转运功能的琥珀碱型Ti质粒pEHA105(pTiBo542DT-DNA),此质粒含有vir基因(vir基因是T-DNA 插入植物基因组必需的元件,pEHA105(pTiBo542DTDNA)质粒自身的T-DNA转移功能被破坏,但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移)。本产品适用于水稻、烟草等植物的转基因操作,经pCAMBIA2301质粒检测转化效率高达103cfu/μg。储存条件:干冰运输、-80℃保存,有效期一年。自备试剂:质粒DNA、液氮等使用方法:转化前准备1. 冰水浴和37℃水浴。2.液氮或干冰/乙醇混合物。3. 将抗性平板在28℃培养箱中平衡至少15分钟。转化方法1. 取-80℃保存的农杆菌感受态细胞于冰水浴中融化。2. 无菌条件下,向刚刚融化的感受态细胞悬液中加入需要转化的质粒,每100μL感受态细胞加1ug(体积不大于10μl)质粒DNA,轻柔混匀。冰水浴中静置5分钟。3. 将离心管置于液氮中速冻5分钟(注:也可以用干冰和无水乙醇混合物替代液氮)。4. 迅速将离心管置于37℃水浴静置中5分钟,不要晃动水面。然后快速转至冰水浴中静置5分钟。5. 加入800μl 无抗生素的2×YT或LB液体培养基,28-30℃振荡培养2~3小时。使菌体复苏,表达抗性。6. 5000rpm离心1分钟收菌,保留100μl左右上清,轻轻吹打重悬菌体,均匀涂布到含有相应抗生素的LB 固体培养基平板上,待平板中的液体完全吸收后,倒置平板,28-30℃培养48-72小时。 注:当平板只含有50μg/mL kan时,28℃培养48 h 即可;平板中同时加入50μg/mL kan、20μg/mL rif时,需28℃培养60 h;如果使用的平板含有50μg/mL rif 则需要28℃培养72-90h。注意事项:1. 加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10;质粒不纯或存在乙醇等有机物污染,转化效率急剧下降;质粒增大一倍,转化效率下降一个数量级。2. 混入质粒时应轻柔操作。转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。3. 平板上阳性克隆密度过大时,由于营养不足,阳性克隆生长变慢,菌落变小,为了获得大的菌落,应减少质粒用量。4. 利福平浓度不应高于25μg/mL,过高的利福平浓度不利于农杆菌生长,会降低其生长速度和转化效率。本公司感受态计算转化效率时所用平板只含有50μg/mL kan,若所用平板含有20μg/mL rif 则转化效率降低到1/2。5.培养基中加入利福平的目的是防止杂菌生长、筛选农杆菌;根据所用菌株抗性加入Ti质粒筛选抗生素可防止Ti质粒丢失,但Ti质粒筛选抗生素不利于农杆菌的转基因操作,所以一般培养农杆菌时不考虑这些抗生素,Ti质粒丢失的概率极低(可以忽略)。除农杆菌EHA105化学感受态细胞品牌外,我公司正在打折促销以下产品:·*蛋白酶抑制剂Ⅰ溶液(10mg/mL)编号:BTN130537英文名称:Calpain InhibitorⅠSolution规格:10mL本品为10mg/mL的甲醇溶液,工作浓度为17μg/mL。*蛋白酶抑制剂Ⅰ(N-acetyl-Leu-Leunorleucinal,Ac-LLnL-CHO),分子量是383.5,不溶于水。可以抑制*依赖性的中性半胱*酸蛋白酶活性。储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期6个月(4℃稳定一周)。避免反复冻融。·BAL 31核酸酶编号:BTN120409英文名称:BAL 31 Nuclease规格:50UBAL 31核酸酶纯化自埃氏交替单胞菌BAL-31培养物。BAL-31核酸外切酶降解双链DNA的3´和5´末端,不切割分子内部。该酶同时还是高度特异性的单链核酸内切酶,在切刻、缺口、双链DNA单链区和双链RNA的单链区进行切割。其工作原理图如下:产品特点:1.从两端逐步对双链DNA进行切割,缺失的长度适合于100~1000个碱基左右。2.加入EGTA可失活。3.限制性酶切图谱的构建。储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。活性定义:1单位指在50μl反应体系,1X核酸酶BAL-31反应缓冲液,30℃条件下,10分钟从线性双链φX174 DNA(40μg/ml)的两端各切下200个碱基对所需要的酶量。使用方法:1.在离心管中加入下列溶液:
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