北京PCR法DNA探针标记试剂盒厂商

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产供应北京PCR法DNA探针标记试剂盒厂商，我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

名称：北京PCR法DNA探针标记试剂盒厂商
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
英文名：PCR DNA Labeling Kit
PCR标记的原理是用带标记的dNTP进行PCR，最后得到的PCR产物将带有标记，可以直接用于杂交试验。其原理示意图如下：


产品特点：
1.一站式，本试剂盒提供经过优化的试剂，不需要用户自己摸索。
2. 足够10次50μl体系的常规PCR(用于制备标记反应的模板和设置对照反应)和5次50μl体系的标记反应。
3.一次标记可以得到μg级的双链DNA探针或约700ng的单链DNA探针，足够多次杂交实验用。
4. 既可用于制备双链探针，也可以用于单链探针。
5. 90604A需自备含标记核苷酸的dNTP，90604B和90604C分别含生物素和地高*(代"辛")标记的底物。自备的标记包括fluorescein-dUTP、hydroxycoumarin-dUTP、resorufin-dUTP和aminoallyl-dUTP等。
6. 本产品得到的探针参入率一般为4-5%(每100个核苷酸中有4-5个将带有非同位素标记)，有效降低了空间阻碍，检测效果最佳。
7.可以用于Southern和Northern Blot、原位杂交、菌落和斑点印迹杂交等分析。

试剂盒组成：

 

成分	规格
2×标记专用PCR Mix	500μl
dNTP，2mM each	50μl
含Biotin-11-dUTP的dNTP	25μL(仅B有)
含DIG-11-dUTP的dNTP	25μL(仅C有)
超纯水	1ml
说明书	1份

注：标记专用PCR Mix不含dNTP。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一：准备工作
1. 按常规的方法设计PCR引物，使探针长度在400-800bp之间。过短则标记参入少，探针杂交信号强度减弱；过长则非特异杂交增加，背景变强。
2. 根据PCR引物优化PCR条件。
3. 由于标记的dNTP比较珍贵，所以本试剂盒不推荐以基因组DNA或其他复杂DNA为模板直接进行PCR标记，而是建议采取下述的两步法标记来提高成功率，即先制备非标记PCR产物，再以之为模板制备标记的PCR产物。
二：非标记PCR产物的制备
4. 设置50μL PCR的反应体系：

成份	用量
2×标记专用PCR Mix	25μl
dNTP，2mM each	5μl
自备的探针引物一(10pmol/μL)	1μL(10μM)
自备的探针引物二(10pmol/μL)	1μL(10μM)
自备的模板DNA	1μg基因组DNA或1ng质粒DNA
超纯水	补到50μL

5. 按已经优化的PCR参数进行PCR。
6.电泳检测和胶回收所需的PCR产物，并定量。用10 pmol引物一般能得到1μg左右的PCR产物(具体取决于PCR产物的长度)。注意：最好采取胶回收而不是PCR回收以避免残留引物干扰后续的标记PCR。
三：标记PCR反应(最好做一个不加标记的对照用于定量)
说明：在设置下面反应时，如果加一种引物，就得到单链标记的PCR产物；如果加两种引物，则得到双链标记的PCR产物。由于双链PCR探针在杂交前虽然要变性成单链后使用，但杂交时变性的双链彼此还会复性，这种复性会与探针-靶DNA杂交反应相竞争，降低杂交效率，因此强烈推荐使用单链标记的DNA探针。

成份	样品	对照
2×标记专用PCR Mix	25μl	25μl
含Biotin-11-dUTP的dNTP或 含DIG-11-dUTP的dNTP或 自备的含其他标记dUTP的dNTP	5μl	不加
dNTP，2mM	不加	5μl
双链标记：探针引物一和引物二 单链标记：探针引物一或引物二	每种50 pmol 一种50 pmol	每种50 pmol 一种50 pmol
上步胶纯化所得PCR产物 (单链标记可用100ng)	10 ng	10 ng
超纯水	补到50μL	补到50μL

 注意：本试剂盒提供的dNTP混合物中，标记底物与非标记底物的比例已经进过优化，如果自备标记dUTP，其与dTTP的最佳比例需要优化，标记不同，比例不同。对DIG-11-dUTP，最佳比例1：3；对BrdUTP，最佳比例为1：1。
7. 按第5步的PCR参数进行标记PCR，但需要进行下列修改：一是循环数增加到35-55个循环。由于模板为纯化后的PCR产物，探针对扩增长度完整性要求不高(长度不均的探针由于能形成网络结构，效果反而更好)，所以可以增加循环数；二是延伸时间增加15秒，因为标记dUTP参入到DNA的速度比常规的dTTP慢；三是降低复性温度5-7℃，因为标记核苷酸参入到DNA后，新模板的Tm值将降低。
8. 标记探针的定量：取标记反应和对照反应的产物1-5μl，在琼脂糖凝胶上跟浓度已知的DNA marker一起电泳，并判断探针的浓度。由于标记反应的PCR产物中额外带有非同位素的配体(生物素，地高*(代"辛")等)、因此其泳动速度将慢于非标记PCR产物(但同位素标记不能用此法)。
 注意：如果扩增的是单链DNA探针，其结合EB的能力远低于双链DNA(EB是嵌合到双链碱基对之间的，而单链DNA没有碱基对，只有一些局部区域折叠形成的有限双链区，因此能结合的EB很少)，因此EB染色的强弱不能准确反应DNA的浓度，可以采用银染定量(跟marker比较)。一般100ng模板按上述条件经过单链PCR扩增可得到700ng左右探针。
9. 剩余的PCR标记产物可以不经过纯化，直接加入(对单链PCR探针)杂或加热变性并急冷后加入(对双链PCR探针)到杂交液中使用。如果暂时不用请放-20℃长期保存。如果需要纯化，请使用乙酸铵/乙醇沉淀法。

北京PCR法DNA探针标记试剂盒厂商正在火爆热销，除此之外，为您推荐下别热销产品：
B0201 特级新生牛血清(辐照灭菌) 100ml/200ml/500ml/500ml*20瓶
ARB12872 小鼠可溶性血小板内皮细胞粘附分子1(sPECAM-1/sCD31)Elisa方法检测 Mouse soluble platelet endothelial cell adhesion molecule 1,specam-1 ELISA KIT
*化金 DFO 27988-77-8
HC0052 (带刻度)袋装吸头
*化铯 Phosphodiesterase Ⅱ from bovine spleen 7647-17-8
130-22-3 茜素红
ARB13640 兔子高迁移率族蛋白B1(HMGB-1)elisa检测 Rabbit high mobility group protein b1,hmgb-1 ELISA KIT
PY02-100  克氏双糖铁琼脂(上层)  250克  
BTN90610 卵白蛋白标准品 Ovalbumin Standard
ARB11954 大鼠Ⅱ型胶原(Col Ⅱ)含量测试 Rat collagen type Ⅱ,col Ⅱ ELISA KIT
ARB13703 兔肾素(RenIn)酶标法分析 Rabbit renin ELISA KIT
DAB法显色试剂盒"
F030421 胶体金标记兔抗山羊IgG抗体 Rabbit Anti-Goat IgG*GOLD
PY01-039  核黄素(VB2)  10克  
ARB12576 大鼠高敏三碘甲状腺原*酸(u-T3)代做ELISA实验 Rat ultrasensitivity tri-iodothyronine,u-t3 ELISA KIT
ARB12227 大鼠血纤蛋白原(Fbg)elisa检测 Rat fibrinogen,fbg ELISA KIT
F040401 乙肝表面抗原 HBSAg
A0201 特级新生牛血清(无菌采制)
ARB11445 人核糖核酸酶(RNASE)Elisa定量检测 Human ribonuclease,rnase ELISA KIT
ARB14097 人白细胞介素17A(IL-17A)酶标法分析 Human interleukin 17a (IL-17a) ELISA KIT
脱氧核糖核酸(鲱鱼精) Zymosan A from Saccharomyces cerevisiae
北京PCR法DNA探针标记试剂盒厂商关键词：PCR DNA Labeling Kit,PCR法DNA探针标记试剂盒,BTN90604A

SJ0716 TES缓冲液(10×)
L-甘露糖 2",4"-Dihydroxyacetophenone 10030-80-5
ARB10422 人丙*(代"酮")酸激酶(PK)酶联免疫定量检测 Human pyruvate kinase,pk ELISA KIT
NF-268 AFP阳性对照
BTN90318 柱式DNA清除剂 Column DNA Erasol
ARB10115 人Klotho蛋白代做ELISA实验 Human klotho ELISA KIT
ARB14202 小鼠组蛋白(Histone)血清中含量检测 
ARB11638 人淋巴毒素β(LTB)定量分析 Human lymphotoxinβ,ltb ELISA KIT
ARB13347 牛一氧化*(代"氮")(NO)酶联免疫定量检测 
等离子体胺氧化酶 Silicon dioxide 9001-66-5
BTN100809 SSPE溶液,20× SSPE,20×
ARB11349 人类白细胞抗原E(HLA-E)酶免分析 Human leukocyte antigen e,hla-e ELISA KIT
虫胶 Sarcosine Oxidase 9000-59-3
ARB13638 兔子胶原酶Ⅱ(CollAgenAse Ⅱ)ELISA检测服务 Rabbit collagenase type Ⅱ ELISA KIT
ARB12965 小鼠血管紧张素原(AGT)代做ELISA实验 Mouse angiotensinogen,agt ELISA KIT
BL1207 芽孢染色液(试剂盒)
ARB10744 人纤溶酶原激活物抑制因子(PAI)酶标法分析 Human plasminogen activator inhibitor,pai ELISA KIT
H0701 山羊血浆(去红细胞、无菌过滤) 100ml/200ml/500ml/500ml*20瓶
BTN131019 无内毒素萤火虫荧光素 Endo-free Luciferin
维拉帕米盐*(代"酸")盐 Boc-D-glutamine 152-11-4
BTN130995 Cy3-dCTP溶液 Cy3-dCTP Solution
北京PCR法DNA探针标记试剂盒厂商关键词：PCR DNA Labeling Kit,PCR法DNA探针标记试剂盒,BTN90604A

BTN81205 一站式Tricine-SDS-PAGE套装 One-Stop Tricine-SDS-PAGE Pack
ARB11002 人补体1抑制物抗体(C1INH)酶免分析 Human complement 1 inhibitor autoantibody,c1inh ELISA KIT
54010-71-8 葡萄糖-6-磷酸一* D-Glucose6-phosphate Sodium sslt
BL0978 豚鼠外周血淋巴细胞分离液
4,5-二"青"基咪唑 5(6)?-?Carboxy-?di-?O-?acetylfluorescein 1122-28-7
52-90-4 L-Cysteine  L-半胱*酸
E0102 抗凝新生牛血(无菌 袋装)
ARB10578 人早老素2(PS-2)含量检测 Human presenilin 2,ps-2 ELISA KIT
对羟基*甲*(代"酸")乙酯 9,10-Phenanthrenequinone 120-47-8
ARB11162 人疟原虫裂殖子表面蛋白1(MSP-1)elisa测定使用说明书 Human merozoite surface protein-1 ,msp-1 ELISA KIT
蛋白酶(枯草杆菌) Sodium propionate 9014-01-1
BL0833 HRP标记亲和素
BL0844 羊抗小鼠IgG纯化抗体
ARB13078 小鼠性激素结合球蛋白(SHBG)酶联免疫定量检测 Mouse sex hormone-binding globulin,shbg ELISA KIT
BL1068 麦芽汁琼脂
ARB10128 人N*黏蛋白/神经*黏蛋白(N-CAd)elisa测定使用说明书 Human neural-cadherin, n-cad ELISA KIT
BL1388 SABC兔IgG-AP kit
ARB11373 人前列腺素F2A(PGF2A)血清中含量检测 Human prostaglandin f2α,pgf2α ELISA KIT
CYB165008 生物素化羊抗人IGM
HC0090 离心管(尖底罗口)

我公司强烈推荐探针标记及检测系列产品，热情期待您的咨询选购北京PCR法DNA探针标记试剂盒厂商。