- ¥10
- 一基
- 上海
- YJ011202 L
- 2025年07月15日
企业认证
相关产品推荐更多 >
万千商家帮你免费找货
0 人在求购买到急需产品
- 详细信息
- 询价记录
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 供应商：
上海一基实业有限公司
致泻大肠埃希氏菌鉴定剂盒（PCR法）
一管式检测试剂为本公司研发的产品，与传统PCR法检测试剂具有等效的检测性能，其中的固封液不影响检测反应与荧光检测性能，并且对试剂蒸发与气溶胶污染起到一定的防范作用。该产品无需分装试剂，有效减少反复冻融及分装过程中造成的试剂活性下降及试剂污染，无需增设试剂配置区，省时省力省空间。（该产品反应液中已含荧光染料，可直接使用荧光定量PCR仪进行定性检测）
◆ 产品组成（96测试）
| 试剂 | 含量 | 作用 | |
| 孔1 | 反应液-uidA | 23μl/孔 12孔/排 8排 （本产品使用12联PCR管分装，每排含12种反应液各23ul） |
内参 |
| 孔2 | 反应液-ipaH | 鉴定EIEC | |
| 孔3 | 反应液-pic | 鉴定EAEC | |
| 孔4 | 反应液-aggR | 鉴定EAEC | |
| 孔5 | 反应液-astA | 鉴定EAEC | |
| 孔6 | 反应液-stx1 | 鉴定EPEC与EHEC | |
| 孔7 | 反应液-stx2 | 鉴定EPEC与EHEC | |
| 孔8 | 反应液-bfpB | 鉴定EPEC与EHEC | |
| 孔9 | 反应液-escVa | 鉴定EPEC与EHEC | |
| 孔10 | 反应液-lt | 鉴定ETEC | |
| 孔11 | 反应液-stp | 鉴定ETEC | |
| 孔12 | 反应液-sth | 鉴定ETEC | |
| NG-Ecoli | 100μL × 1支 | 阴性对照 | |
| NG-DW | 100μL × 1支 | 空白对照 | |
| PG-Ecoli | 100μL × 1支 | 阳性对照 | |
| Loading Buffer | 600μL×1支 | 电泳上样缓冲液 | |
ABI ，BioRad，TaKaRa等PCR扩增仪，电泳仪，凝胶成像仪等电泳配套设备。（使用荧光定量PCR仪进行定性判读时则无需电泳设备）
◆ 自备耗材和仪器
①灭菌1.5mL或2.0mL离心管；②冰盒；③移液器（1-10μL，10-100μL，100-1000μL）及配套灭菌吸头；④离心机；⑤涡旋混匀器；⑥金属浴。
◆ 样品处理
参照《GB4789.6—2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 致泻大肠埃希氏菌检验》中的操作步骤进行前增菌。建议使用试剂配套细菌基因组DNA提取系列产品。
◆ 实验操作
1．添加模板（样本制备区，放置于冰盒中进行）
取所待检样品数+3的12联反应管，将试剂完全解冻，分离心30s。离心后揭开封口膜，使用穿刺加样法穿过固封层向每管反应液中分别加入2μL模板（或直接使用无菌吸头挑取少许待检菌落至反应管中）。
加样示例：（有2个待测样品）
取5排12联反应管，按顺序第一排全部加NG-DW，第二排全部加NG-Ecoli，第三排全部加样品1，第四排全部加样品2，第五排全部加PG-Ecoli。
盖好配套的PCR管盖后，涡旋混匀30s，离心1min，立即进行PCR扩增反应。
2. 扩增反应（扩增及产物分析区）
按下列条件设置扩增反应：（如需使用荧光法进行检测请选择FAM通道）
| PCR循环 | 荧光收集位点 | ||
| 95℃ | 10分钟 | 1个循环 | — |
| 95℃ | 30秒 | 30个循环 | — |
| 63℃ | 30秒 | — | |
| 72℃ | 90秒 | ※ | |
| 72℃ | 5分钟 | 1个循环 | — |
称量4. 0g琼脂糖粉，加入至200 mL的1×TAE电泳缓冲液中，充分混匀。使用微波炉反复加热至沸腾，直到琼脂糖粉完全融化形成清亮透明的溶液。待琼脂糖溶液冷却至60℃左右时，加入溴化乙锭( EB )至终浓度为0.5μg/mL，充分混匀后，轻轻倒入已放置好梳子的模具中，凝胶长度要大于10cm，厚度宜为3mm~5mm。检查梳齿下或梳齿间有无气泡，用一次性吸头小心排掉琼脂糖凝胶中的气泡。当琼脂糖凝胶完全凝结硬化后,轻轻拔出梳子，小心将胶块和胶床放入电泳槽中，样品孔放置在阴极端。向电泳槽中加入1×TAE电泳缓冲液，液面高于胶面1mm~2mm。将 5μL PCR产物与1μL 6×上样缓冲液混匀后，用微量移液器吸取混合液垂直伸入液面下胶孔，小心上样于孔中；阳性对照的 PCR 反应产物加入到最后一个泳道;第一个泳道中加入 2 μ L 分子量 Marker 。接通电泳仪电源，根据公式：电压=电泳槽正负极间的距离（cm）×5V/cm计算并设定电泳仪电压数值；启动电压开关，电泳开始以正负极铂金丝出现气泡为准。电泳30min~45min后，切断电源。取出凝胶放入凝胶成像仪中观察结果，拍照并记录数据。
- 可使用Gold view、Gal-Rad等等效的核酸荧光染料替代EB。
- 推荐使用DNA Marker：DL2000或100bp ladder，等可指示100bp~1500bp条带的Marker。
- 结果分析
- 阴阳性判读：
示例电泳图
- 有效性判读：
- 结果判读：
| 致泻大肠埃希氏菌类别 | 目标条带的种类组合 | |
| EIEC | ipaH（＋） | uidA （＋／－） |
| EAEC | aggR，astA，pic中一条或一条以上阳性 | |
| EPEC | bfpB（＋／－），eae（＋），stx1（－）stx2，（－） | |
| STEC/EHEC | stx1，stx2中一条或一条以上阳性，eae（＋／－），bfpB（－） | |
| ETEC | lt，stp，sth中一条或以上阳性 | |
- 97%以上大肠埃希氏菌为uidA阳性，可参考阴性对照中该基因检测结果判断扩增效果；
- 当结果判定为EPEC阳性时，若bfpB靶标为阳性则说明样品含有典型EPEC；若bfpB靶标为阴性则说明样品为非典型EPEC；
- 当结果判定为STEC/EHEC阳性时，若eae靶标为阳性则说明样品含有典型EHEC；若eae靶标为阴性则说明样品为非典型EHEC。
1．本试剂检测灵敏度高。为了防止污染，实验要分区操作。
1）第一区：样本制备区。
2）第二区：扩增及产物分析区。
★ 分区之间最好进行物理性隔离，避免人为因素造成的污染。
2. 实验过程中穿戴工作服和乳胶手套，使用移液器，试验产生的所有废弃物及时处理。
3．严格按照操作步骤操作，试剂配制和加样等步骤请严格按照说明书要求在冰上操作。
4．反应液中的成分对光敏感，应避光保存。试剂使用前要完全解冻，但应避免反复冻融，推荐使用前离心30秒。
5．不同批号试剂请勿混合使用，在有效期内使用。
风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
- 作者
- 内容
- 询问日期
文献和实验。 过氧化氢酶试验：滴加3% 过氧化氢试液，若菌落表面有气泡产生，为过氧化氢酶试验阳性，否则为阴性。本菌为阴性反应。 3、需购买试剂： 菌株 培养基及试剂 金黄色葡萄球菌 HB8278革兰氏染色液试剂盒、HB4117 兔血浆、HB0109-7营养琼脂培养基 大肠埃希氏菌 HBIG13 HBI大肠杆菌生化鉴定条、HB8280
因子（TPO）在巨核细胞生成过程中的作用以及血小板生成因子在特发性血小板减少性紫瘢（ITP）、再生障碍性贫血（AA）和特发性血小板多症（ET）等疾病过程中的病理生理意义，日本Hirayama等[9]用TaqMan EZ RT-PCR试剂盒在ABI7700反应系统测定了正常人和ITP、AA、ET病人的骨髓基质细胞TPO mRNA水平，又用ELISA方法测定了骨髓和末梢血的TPO浓度。结果显示ITP和AA病人TPO mRNA水平明显升高，而ET病人的TPO mRNA水平则正常，经类固醇治疗后ITP病人TPO
的多数菌株无动力，生化反应和抗原结构均近似痢疾杆菌，应予注意。EIEC可引起豚鼠角结合膜炎，临床上可藉此协助鉴定EIEC。 （4）肠出血性大肠杆菌（Enterohemorrhagic E.coli,EHEC）:引起散发性或暴发性出血性结肠炎，可产生志贺氏毒素样细胞毒素。EHCO的主要菌型是O157：H7，还可有O26、OⅢ等。 表9-2 引起急性腹泻的大肠杆菌 肠产毒性大肠杆菌
技术资料暂无技术资料 索取技术资料
