北京10×STE Buffer(无菌)报价

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名称：北京10×STE Buffer(无菌)报价
编号：SY0009
规格：500ml
产地：国产|进口
STE Buffer，即Sodium Chloride-Tris-EDTA Buffer，又称TEN buffer，是分子生物学常用的一种缓冲试剂，可用于DNA提取、DNA电泳等，也可用于蛋白纯化相关实验。本品为10×STE浓缩液，使用前只需稀释10倍即可。另外，本品已经除菌处理，可直接用于相关实验。

产品组分：1×STE缓冲液含有100 mM NaCl; 10mM Tris-HCl pH8.0; 1mM EDTA pH 8.0

储存条件：常温，有效期一年。

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·耐热逆转录酶II
编号：SY0294
英文名称：Reverse Transcriptase II
规格：2000U
Reverse Transcriptase（第二代耐热逆转录酶）是Reverse Transcriptase（第一代耐热逆转录）的升级产品，是在M-MLV (RNase H-) Reverse Transcriptase基础上通过体外分子进化技术获得的全新耐热逆转录酶。与上一代相比，进一步大幅提高了热稳定性，50℃下半衰期超过240min，并长时间耐受55℃高温且保持稳定，非常适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。此外，增加了多个突变位点，进一步增强了模板亲和力和行进性，大幅提升全长cDNA的合成能力，可获得长达20 kb的cDNA。另外，对于常见的逆转录抑制物具有更高的耐受度，非常适合于植物组织RNA的逆转录反应。

活性定义：以Poly(rA) Oligo(dT)为模板/引物，在37℃，10min内，掺入1 nmol的dTTP为酸不性溶物质所需要酶量定义为1个活性单位（U）。

质量控制
核酸外切酶残留检测：200 U本品和0.6 μg λ-Hind Ⅲ在37 ºC下孵育1h，DNA的电泳谱带不发生变化。
核酸内切酶残留检测：200 U本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在37 ºC下孵育1h，DNA的电泳谱带不发生变化。
RNase残留检测：200 U本品和1 μg小鼠肝脏总RNA在37 ºC下孵育1h，RNA电泳谱带不发生变化。
功能检测1：逆转录体系中加入200 U本品，以100 pg Hela cell total RNA为模板，Oligo(dT)23为引物，50 ºC反应30min。取10% cDNA产物进行PCR扩增β-actin基因。琼脂糖凝胶电泳，EB染色，可见有单一的550 bp条带。
功能检测2：逆转录体系中加入200 U本品，以500 ng Hela cell total RNA为模板，Oligo(dT)23为引物，55 ºC反应45min。取10% cDNA产物进行PCR扩增Polε基因。琼脂糖凝胶电泳，EB染色，可见有单一的4.8 kb (GC-rich)条带。
功能检测3：逆转录体系中加入200 U本品，以1 pg-1 μg Hela cell total RNA为模板，Oligo(dT)23VN和Random Hexamers为引物，测试qRT-PCR 性能。以6个数量级的模板量的对数值对Ct值做标准曲线，R2>0.990，斜率在-3.20到-3.60之间。

准备工作
1. 防止RNase污染：请保持实验区域洁净；操作时需穿戴干净的手套、口罩；实验所用的离心管、枪头等耗材均需保证RNase free。
2. 引物选择：
2.1 后续实验为PCR
a, 如果模板为真核生物来源，一般情况下首选Oligo dT18，与真核生物mRNA的3’Poly A尾配对，可获得最高产量的全长cDNA。
b, 基因特异性引物 (GSP)的特异性最高。但有些情况下，用于PCR反应的GSP无法有效引导第一链cDNA合成。这时，可改用Oligo dT18或Random hexamers重新进行逆转录。
c, Random hexamers特异性最低，所有RNA，包括mRNA, rRNA, tRNA均可以作为Random hexamers的模板。当目标区域具有复杂二级结构或GC含量较高，或者模板为原核生物来源，使用Oligo dT18或基因特异性引物 (GSP)无法有效引导cDNA合成时，可使用Random hexamers为引物。
2.2 后续实验为qPCR
a, 将Oligo dT18与Random hexamers混合使用，可使mRNA的各个区域均能以相同效率引发cDNA合成，有助于提高定量结果的重复性。


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·小牛肠碱性磷酸酶
编号：SY0388
英文名称：Alkaline Phosphatase (30 U/μl), Calf Intestine (CIAP)
规格：1000U
本品为小牛肠来源的碱性磷酸酶，可以降解几乎所有磷酸单酯，但是该酶不能水解磷酸二酯或磷酸三酯。Alkaline Phosphatase，中文名碱性磷酸酶，可将DNA、RNA的5’端磷酸基团去除，常用于阻止载体的自连作用：在分子克隆实验中，DNA连接酶催化DNA连接时需要有磷酸基团的存在，载体在经酶切后会在切点端保留一个磷酸基团。而载体经碱性磷酸酶去磷酸化后因5’ 端无磷酸基团，因而不可以和自身3’ 端连接。因此连接反应中载体本身会优先发生的连接反应被阻止，提高了目的片段插入率。另外，碱性磷酸酶还可制备用于5’端标记的DNA模板，以及用于该酶蛋白的脱磷酸作用等。

来源：携带小牛肠碱性磷酸酶表达质粒的酵母
质量控制（Quality Control）：无核酸外切酶、核酸内切酶、核糖核酸酶污染
热灭活（Thermal Inactivation）：在螯合剂存在下，65℃加热30min，99%活性不可逆丧失；使用*酚，可使酶完全失活。
储存液条件（Storage conditions）：10 mM Tris-HCl (pH8.0), 1 mM MgCl2, 50mM KCl, 0.1 mM ZnCl2, 50% glycerol.
活性定义：在pH9.8, 37℃条件下，以对硝基*(代"*")酚磷酸盐(p-nitrophenylphosphate)为底物，1分钟生成1µmol硝基酚(p-nitrophenol)所用的碱性磷酸酶量定义为1个活力单位。
最佳pH（Optimal pH）：该酶在底物浓度高的情况下其最佳反应pH为10，在底物浓度低时，最佳pH为8，此时该酶活性较高浓度底物时稍低。
优化体系（Optimal Buffer）：AP Buffer (500 mM Tris-HCl, pH9.0; 10 mM MgCl2)
储存条件：-20℃

使用方法:
1 DNA去磷酸化
① 在1.5ml离心管中加入下列试剂：
无菌ddH2O————Up to 50µl
DNA 片段*————1-20pmol
Alkaline Phosphatase————1-2µl
10×AP buffer————5µl
【*】：单链DNA或含5’端突出末端的DNA推荐低温下孵育，平末端DNA或含3’突出末端的DNA建议在较高温度下孵育。
② 混匀上述试剂，于37℃或50℃孵育30min。或者37℃孵育15min后，再于50℃孵育15min。

2 酚*仿法抽提DNA
① *酚/*仿/异戊醇（25:24:1）抽提2次。
【注】：推荐在酚提取前将其在含5 mM EDTA, 0.5% SDS ,50 μg/ml Proteinase K的溶液中56℃孵育30min以彻底灭活碱性磷酸酶。在酚提取前于75℃孵育10min，灭活效果更佳。
② *仿/异戊醇（24:1）抽提。

3 乙醇沉淀DNA
① 加入2.5µl 3M NaCl(终浓度150mM).
② 加入125µl（2.5倍体积）预冷乙醇，混匀后于-20℃放置30-60min，沉淀DNA。

4 溶解DNA
离心，彻底去除乙醇后，将DNA溶于适量去离子水（＜20µl）。


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·罗丹明Red-X标记山羊抗小鼠IgG(H+L)
编号：SY0687
英文名称：Rhodamine Red-X AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG (H+L)
规格：100μl
本品是由Rhodamine Red-X标记的山羊抗小鼠IgG（H+L），使用抗原偶联的琼脂糖微珠从山羊抗血清内亲和色谱纯化所得。免疫电泳和/或ELISA法检测显示本品特异性结合完整的小鼠IgG分子，也会与其他小鼠免疫球蛋白的轻链结合。可能会与其他物种免疫球蛋白发生交叉反应，但不会识别非免疫球蛋白类的血清蛋白。

Rhodamine Red-X 的Amax（最大激发波长）为570nm，Emax（最大发射波长）为590nm。本品适合做单标实验。要做多标（multiple-labeling）实验，建议使用经过与相近物种血清蛋白或者免疫球蛋白预先经过亲和吸附处理的二抗。

浓度：0.75 mg/ml
缓冲液：0.005M 磷酸*，0.125M *化*, pH 7.6
荧光素：Rhodamine Red-X, Amax=570, Emax=590
稳定剂：7.5mg/ml BSA（无IgG，蛋白酶），50% 甘油
防腐剂：0.025% 叠氮化*
推荐稀释比例：1:25～100（适用于大多数实验）
储存条件：-20℃，避免反复冻融，有效期一年。

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