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siLentFect 专门为RNA 干扰(RNAi) 实验设计,可将小分子干扰RNA 高 效转入培养的哺乳动物细胞。siLentFect 卓越的siRNA 吸附能力和高效的 转化效率可以在使用低转染试剂剂量和低siRNA 浓度的条件下实现目的 基因的“沉默”。其他优点包括:
- siRNA 转化效率高,细胞毒性低
- 完美的靶基因特异的“沉默”
- 简单灵活的操作步骤
siRNA 转化效率高,细胞毒性低
siLentFect 脂质试剂能够有效地将siRNA 转到很多细胞系中,包括难于转染的初代细胞和非标准细胞系如 MCF�7 等。siLentFect 对siRNA 高的吸附能力确保每次实验使用较少的脂质试剂和较少的siRNA 用量,降低了 “off�target 目标偏移”效应的可能性,减少了花费,实现了由细胞胁迫和细胞死亡造成的实验结果偏差的最小化。
用siLentFect 和抗荧光素siRNA 敲除抗荧光素酶
使用Gene Pulser Xcell™ 电转系统得到稳定的CHO�luc 细胞并接种于24 孔 板,用0.3µl siLentFect 和抗荧光素酶siRNA 转化细胞。左图:24 小时内荧 光素酶表达量的统计分析;右图:敲除效率(与对照比较的百分比)。
使用Gene Pulser Xcell™ 电转系统得到稳定的CHO�luc 细胞并接种于24 孔 板,用0.3µl siLentFect 和抗荧光素酶siRNA 转化细胞。左图:24 小时内荧 光素酶表达量的统计分析;右图:敲除效率(与对照比较的百分比)。
siLentFect 敲除beta� 半乳糖苷酶。 使用Gene Pulser Xcell 电转系统得到稳定的CHOlacZ 细胞并接种于24 孔板,分别用10nM 抗beta�半乳糖苷酶siRNA(
) 或非特异性对 照siRNA(
) 和siLentFect 一起转染细胞。左图:24 小时内beta� 半乳糖苷酶表达量的 统计分析;右图:敲除效率(与对照比较的百分比)。
) 或非特异性对 照siRNA(
) 和siLentFect 一起转染细胞。左图:24 小时内beta� 半乳糖苷酶表达量的 统计分析;右图:敲除效率(与对照比较的百分比)。
MCF�7 细胞中荧光siRNA 的转入
上图:Hoechst 染色
下图:Dharmacon siGLO siRNA
上图:Hoechst 染色
下图:Dharmacon siGLO siRNA
完美的靶基因特异的“沉默”
使用siLentFect 脂质试剂,可以使高/低丰度目的基因的表达下调90�99%。siLentFect 转染反应中使用少至 5nM 的siRNA 都可以获得基因特异性的敲除效果。
高/低丰度目的基因的表达下调。 人初代成纤维细胞,使用2 µL siLentFect 脂质试剂和10nM 抗目的基因siRNA 的实验结果。左图:多胺 生物合成途径中鸟氨酸脱羧酶(ODC) 基因;右图:GAPDH 基因。转染后72 小时,用小型Aurum 总RNA 提取试剂盒提取RNA,用 iCycler iQ 实时定量PCR 仪检测。以使用非特异性siRNA 转染的细胞为对照。根据其CT 值监测两者的mRNA 表达的量,都有>90% 的 下调。
简单灵活的操作步骤
siLentFect 脂质试剂的操作步骤适用于高通量操作。将siLentFect 和siRNA 直接加入培养基或者将siLentFectsiRNA 混合物加入胰蛋白酶消化的细胞悬浮液中都可以获得成功的转染效果。
siRNA 和质粒DNA 的共转染
siLentFect 脂质试剂可以同时转化siRNA 和dsDNA 质粒来优化RNAi 实验。
dsDNA 质粒和siRNA 同时转化。
MCF�7 细胞用siLentFect 脂质试剂同时转染pCMV�luc 质粒 和抗荧光素酶siRNA (
) ,或非特异性对照siRNA (
) ,细 胞转染24 小时后荧光素酶表达量的统计分析
MCF�7 细胞用siLentFect 脂质试剂同时转染pCMV�luc 质粒 和抗荧光素酶siRNA (
) ,或非特异性对照siRNA (
) ,细 胞转染24 小时后荧光素酶表达量的统计分析
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SiLentFectinRNAi专用脂质试剂
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