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siLentFect 专门为RNA 干扰(RNAi) 实验设计，可将小分子干扰RNA 高 效转入培养的哺乳动物细胞。siLentFect 卓越的siRNA 吸附能力和高效的 转化效率可以在使用低转染试剂剂量和低siRNA 浓度的条件下实现目的 基因的“沉默”。其他优点包括：
- siRNA 转化效率高，细胞毒性低
- 完美的靶基因特异的“沉默”
- 简单灵活的操作步骤
siLentFect 脂质试剂能够有效地将siRNA 转到很多细胞系中，包括难于转染的初代细胞和非标准细胞系如 MCF�7 等。siLentFect 对siRNA 高的吸附能力确保每次实验使用较少的脂质试剂和较少的siRNA 用量，降低了 “off�target 目标偏移”效应的可能性，减少了花费，实现了由细胞胁迫和细胞死亡造成的实验结果偏差的最小化。
使用Gene Pulser Xcell™ 电转系统得到稳定的CHO�luc 细胞并接种于24 孔 板，用0.3µl siLentFect 和抗荧光素酶siRNA 转化细胞。左图：24 小时内荧 光素酶表达量的统计分析；右图：敲除效率(与对照比较的百分比)。
) 或非特异性对 照siRNA(
) 和siLentFect 一起转染细胞。左图：24 小时内beta� 半乳糖苷酶表达量的 统计分析；右图：敲除效率（与对照比较的百分比）。
上图：Hoechst 染色
下图：Dharmacon siGLO siRNA
使用siLentFect 脂质试剂，可以使高/低丰度目的基因的表达下调90�99%。siLentFect 转染反应中使用少至 5nM 的siRNA 都可以获得基因特异性的敲除效果。
siLentFect 脂质试剂的操作步骤适用于高通量操作。将siLentFect 和siRNA 直接加入培养基或者将siLentFectsiRNA 混合物加入胰蛋白酶消化的细胞悬浮液中都可以获得成功的转染效果。
siLentFect 脂质试剂可以同时转化siRNA 和dsDNA 质粒来优化RNAi 实验。
MCF�7 细胞用siLentFect 脂质试剂同时转染pCMV�luc 质粒 和抗荧光素酶siRNA (
) ，或非特异性对照siRNA ( ) ，细 胞转染24 小时后荧光素酶表达量的统计分析
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文献和实验保存。 13、如何鉴定提取的外泌体？ 通常会用到：透射电镜检测（形态）、NTA 粒径检测（大小）、Western Blot 检测等方法对提取的外泌体进行鉴定。在进行 Western Blot 检测时，常用的外泌体标志蛋白有CD63、CD9、CD81、TSG101 等。 14、提取的外泌体进行 Western Blot 前是否需要加入 RIPA 试剂裂解？ 需要。一般按照 1:1 的比例加入强 RIPA 试剂，或推荐使用外泌体蛋白专用裂解液。 15、进行外泌体 Western Blot 鉴定时有无内参
1、如何增加外泌体试剂盒的提取效率？ 答：首先，样品准备阶段确保样品的质量和数量充足；在提取阶段，加入 ECS 试剂后可以通过增加静置时间来提高提取效率，但同时也可能影响到纯度，因此静置时间也需要适当控制，初次实验可以考虑静置过夜。 2、离心后无法看到沉淀如何处理？ 答：样品中的外泌体是微量的存在，离心后无法看到沉淀属于正常现象。建议离心后用 PBS重悬沉淀时不仅洗脱肉眼可见的沉淀部位，还要吹洗离心管外侧靠近底部的狭长区域，具体位置根据离心机倾斜角度决定。建议在下次样品准备阶段确保样品的质量
真香！用 qPCR 做外泌体研究，南京医科大学拿下 41 分 SCI
。 2）RNA 提取 外泌体 RNA 可以用专用的外泌体 RNA 提取试剂盒提取，也可以用 Trizol 法提取，建议 Trizol 与外泌体的体积比不小于 4:1（也可以用 Trizol 直接裂解外泌体沉淀）。 具体操作：取 200 μl 外泌体于 1.5 ml EP 管中，加入 800 μl Trizol 试剂，充分混合，裂解 10 min，12000 rpm 离心 10 min 取上清。 3）反转录 采用 Umibio 4× 预混型快速逆转录试剂盒：适用于长片段 RNA（如 mRNA、LncRNA
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