3´RACE试剂盒北京厂家现货

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百奥莱博专业生产销*(代"售")3´RACE试剂盒北京厂家现货，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：3´RACE试剂盒
规格：10次
产地：国产|进口
英文名：3´-RACE Kit
编号：BTN101104
品牌：百奥莱博
研究真核基因的最基础的工作之一就是确定其转录终止位点，目前最通用的方法是3´-RACE法，RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)是Frohman发明的、通过PCR快速克隆cDNA末端的技术，它在不建立cDNA文库的前提下，利用已知cDNA序列设计引物，通过往两端延伸和扩增获得其3´-端序列。本试剂盒就是根据3´-RACE原理而开发。RACE的原理如下图：


产品特点：
1. 即开即用，客户不需要单独准备各种材料。
2.反应条件经过精心优化，包括使用无RNase H活性的MMLV和优化的引物。

试剂盒组成：

 

成分	规格
MMLV逆转录酶-RI混合物(RNase H-，200U/μL)	10μl
MMLV Buffer(含dNTP)	50μl
PCR MagicMix 2.0(含酶和染料)	1.5ml
3´-RACE引物A(10μM)	10μl
3´-RACE引物B(10μM)	100μl
3´-RACE引物C(10μM)	100μl
RNase-Free水	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输、-20℃保存、有效期一年。

使用方法：

一、利用含Oligo(dT)的3´-RACE引物A进行逆转录
 注意：MMLV酶使用前必须短暂离心，因为它含50%甘油，及其粘稠，否则将取不到所需体积。
1.在一个PCR管中，加入以下组分：

成分	用量
Poly(A)RNA(或总RNA)	0.2-2μg(5μg)
3´-RACE引物A(10μM)	1μL
MMLV Buffer(含dNTP溶液)	5μL
RNase-Free水	补至19μL
合计	19μL

 注意：如果可能，最好使用Poly(A)RNA作为模板。
  65℃保温5分钟，展开RNA的二级结构，立即冰浴待用。
2. 再在上述PCR管中加入1μl MMLV逆转录酶-RI混合物(200U/μL)。
3. 37℃保温60分钟，42℃保温30分钟进行逆转录反应；然后50℃保温10分钟终止反应。
4. 加入0.5mL RNase-free水稀释上步得到的cDNA，冰浴待用。长期放置需要放-20℃保存。

二、利用基因专一性引物A和3´RACE引物B进行第一轮PCR
5. 用不同量的RT反应液(稀释后的cDNA)设置PCR(样品组最好设置用量梯度，单位：μL)。

成分	梯度1	梯度2	梯度3	梯度4
稀释后的cDNA	1	5	10	15
基因专一性引物A(10μM)	2.5	2.5	2.5	2.5
3´RACE引物B(10μM)	2.5	2.5	2.5	2.5
98℃ 5分变性RNA-cDNA杂交链，短暂离心后再加入下列成分
PCR MagicMix 2.0	25	25	25	25
RNase-free水	19	15	10	5
合计	50	50	50	50

6. 按下列条件进行PCR(注：应根据实际情况选择适当的退火温度)。
 第1次循环：52-60℃ 2分，72℃ 40分(此步的目地是合成第二链的cDNA，复性温度需要根据自备基因专一性引物A的Tm值进行优化，一般可以从55℃开始)。
 第2-30次循环：94℃ 1分钟，52-60℃ 1分，72℃ 3分(此步为PCR扩增，复性温度需要根据自备基因专一性引物A的Tm值进行优化，一般可以从55℃开始)。
 最后延伸：72℃ 15分
7. 取5μl的PCR反应液进行琼脂糖凝胶电泳以确认PCR扩增产物。若得到目的扩增产物需要用于后续实验，请于-20℃保存；若没有得到目的扩增产物，可按下列步骤进行巢式PCR反应。

三、利用基因专一性引物B和3´RACE引物C进行巢式PCR反应
8. 将上轮PCR产物(4管)均用水稀释稀释20倍，然后每管均用巢式PCR进行扩增。巢式PCR反应设置如下：

成分	用量
PCR MagicMix 2.0	25μl
上步得到的PCR反应液(稀释20倍后)	1μl
基因专一性引物B(10μm)	2.5μl
3´RACE引物C(10μm)	2.5μl
超纯水	补至50μL

9. PCR反应。按下列条件进行PCR：
第1-30次循环：94℃ 1分钟，52-60℃ 1分，72℃ 3分(复性温度需要根据自备基因专一性引物B的Tm值进行优化，一般可以从55℃开始)最后延伸：72℃ 15分
10.电泳检测。然后根据实验结果进行DNA测序或TA克隆。

注意事项：
1. 如果两轮PCR得到的非特异产物多，可以在RT反应是继续降低3´-RACE引物A的用量。
2.自备的基因专一性引物的GC含量最好跟3´-RACE引物B和引物C的一致，后者长度均为18nt，均含11个G(或C)，7个A(或T)。
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除3´RACE试剂盒北京厂家现货外，我公司正在打折促销以下产品：

 

编号	名称
BTN3090	表面RNase清除剂
BTN131080	重组蛋白G
BTN131139	Deaza dGTP溶液(5mM)
BTN130889	昆虫细胞裂解液
BTN140209	考马斯亮蓝R-250染色液
BTN71101	一步法大提质粒DNA提取试剂盒
BTN130533	木瓜蛋白酶抑制剂溶液(0.5mg/mL)
BTN131234	地塞米松
BTN70903	一步法质粒DNA提取试剂盒2.0
BTN130985	免DNA提取PCR试剂盒(细胞组织裂解物直接PCR试剂盒)
BTN60202	琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒(柱式吸附)
BTN121110	超快DNA-RNA两用转膜试剂盒
BTN130823	多点突变试剂盒
BTN81105	琼脂糖
BTN3690A	红色DNA上样液，6×
BTN100824	TB培养基
BTN60902	Tris盐*(代"酸")溶液(1M,pH7.0)(不含RNase)
BTN111207A	动物线粒体纯化试剂盒A(粗提)
BTN90602H	DNA marker(φX174 DNA/HaeIII)
BTN130506	PCR级海藻糖溶液
BTN120506	T4聚核苷酸激酶
BTN131094	生物素化的牛血清白蛋白
BTN100931	ROX内参染料(25μM)
BTN131190	糖原溶液(10mg/mL)(分子生物学级)
BTN160684-25K	SuperTOPO-Kan平末端克隆试剂盒
BTN130942	百万碱基级真菌DNA提取试剂盒
BTN130949	革兰氏阳性菌DNA提取试剂盒(百万碱基级)
BTN130659	三磷酸腺苷双磷酸酶
BTN80902	柱式血液RNA大量提取试剂盒
BTN130971	柱式病毒RNA-DNA共提试剂盒
BTN101207	1M Tris-HCl(pH8.5)(DNA级)
BTN90602I	DNA marker(φX174 DNA/Hinc II)
BTN131283	多聚甲醛-*氧化*固定液
BTN131210	耐热型MMLV逆转录酶(无RNase H活性)
BTN160685-25K	SuperTOPO-Kan通用克隆试剂盒
BTN130429	Phusion DNA聚合酶
BTN70102A	蛋白marker(3.3～20.1kD)