北京现货BTN101105型5´RACE试剂盒优惠

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")北京现货BTN101105型5´RACE试剂盒优惠，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：5´RACE试剂盒
英文名：5´-RACE Kit
产地：国产|进口
规格：10次
品牌：百奥莱博
编号：BTN101105
研究真核基因的最基础的工作之一就是确定其转录终止位点，目前最通用的方法是5´-RACE法，RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)是Frohman发明的、通过PCR快速克隆cDNA末端的技术，它在不建立cDNA文库的前提下，利用已知cDNA序列设计引物，通过往两端延伸和扩增获得其5´-端序列。本试剂盒就是根据5´-RACE原理而开发。RACE的原理如下图：


产品特点：
1. 即开即用，客户不需要单独准备各种材料。
2.反应条件经过精心优化，包括使用无RNase H活性的MMLV和优化的引物。

试剂盒组成：

 

成分	规格
MMLV逆转录酶-RI混合液(RNase H-，200U/μL)	10μl
MMLV Buffer-dNTP混合液	60μl
微量核酸沉淀剂	400μl
TdT(末端转移酶)	10μl
2×TdT Buffer(含dATP)	100μl
PCR MagicMix 3.0	1.5ml
5´-RACE引物A-引物B混合液	100μl
5´-RACE引物C	100μl
RNase-Free水	1ml

储存条件：低温运输、-20℃保存、有效期一年。

使用方法：

1.变性模板RNA：将1μg mRNA或5μg总RNA加入到一个RNase-free的PCR管中，补RNase-Free水到9μL，65℃保温5分钟后短暂离心，立即放冰上待用。如果RNA浓度偏低，体积超过9μl,可以使用本公司的核酸浓缩剂(需另购,产品编号为BTN110801)浓缩到所需的体积。
2. 设置RT反应(用户可以根据需要设阴性对照)：在上步的含变性后的RNA模板的PCR管中，按顺序加入：

成分	用量
自备的基因专一性引物A(10μM)	4μl
MMLV Buffer-dNTP混合液	6μl
MMLV逆转录酶-RI混合液	1μl
合计	20μl

3. 37℃保温60分钟，42℃保温30分钟，50℃保温10分钟，最后75℃保温10分钟使逆转录酶变性。
4. 短暂离心5秒后待用。
5.在PCR管中加入40μl微量核酸沉淀剂(本产品含不溶的核酸助沉剂，用前需要充分摇匀再取用)，震荡混匀。
6.室温12000rpm离心15分钟，小心吸弃上清。
7. 加入1mL自备75%乙醇，室温12000rpm离心5分钟，小心吸弃上清。
8. 短暂离心数秒，小心吸弃残留液体后，稍微晾干后加入10μL RNase-free水，充分吹打溶解，得到cDNA溶液。注意：为保证加尾效率，溶解cDNA的RNase-free水最好不要超过10μl。
9. 加尾反应：在10μL cDNA溶液中加10μL 2×TdT Buffer(含dATP)和1μL TdT酶，轻柔吹打混匀。
10. 37℃保温15分钟进行加尾反应，然后75℃保温3分钟灭活末端转移酶。
11. 加入0.5mL RNase-free水稀释加尾反应体系。此稀释液将作为PCR的模板。
12. 第一轮PCR：用不同量的稀释后的加尾反应液设置PCR反应(样品组最好设用量梯度，单位：μL)。

成分	梯度1	梯度2	梯度3	梯度4
PCR MagicMix 3.0	25	25	25	25
自备基因专一性引物B(10μM)	2.5	2.5	2.5	2.5
5´RACE引物 A-引物B混合液	2.5	2.5	2.5	2.5
稀释后的加尾反应液	1	5	10	15
RNase-free 水	19	15	10	5
合计	50	50	50	50

13. 按下列条件进行 PCR(注：应根据实际情况选择适当的退火温度)。
 第1次循环：94℃ 5分，48-52℃ 2分，72℃ 4分
 第2-30次循环：94℃ 40秒，52-60℃ 1分，72℃ 3分
 最后延伸：72℃ 15分
14. 取10-20μL PCR产物进行琼脂糖电泳电泳检查PCR结果，如果一条清晰的条带，则可以不做后续的第二轮PCR，而直接进行 DNA 测序或TA克隆。
15. 第二轮PCR：如果第一轮PCR没有一条清晰的条，则带从4管PCR产物中各取1μL分别加入到20μL RNase-free水中进行稀释，然后各取1μL分别作为4管第二轮PCR的模板：

成分	用量
第一轮 PCR产物的稀释液	1μl
PCR MagicMix 3.0	25μl
5´RACE引物 C	2.5μl
自备基因专一性引物 C(10μm)	2.5μl
RNase-free 水	补水至50μl
合计	50μl

16. 按下列条件进行 PCR：第 1-30次循环(94℃ 40秒，52-60℃ 1 分，72℃ 3分)，最后延伸：72℃ 15分
17. 取10-20μL第二轮 PCR产物进行琼脂糖电泳，一般都会有一个样品有清晰的条带出现，则可以直接进行DNA测序或TA克隆。
关键词：5´RACE试剂盒,5´-RACE Kit,BTN101105


除北京现货BTN101105型5´RACE试剂盒优惠外，我公司正在打折促销以下产品：

 

编号	名称
BTN120687	环孢霉素A
BTN120694	制霉菌素溶液
BTN90602E	DNA marker(λDNA/BstE II)
BTN120654F	Southern DNA Marker Oligo(DIG标记)
BTN101202	3M乙酸*溶液(pH5.2)
BTN100209	大片段Bst DNA聚合酶
BTN130930	百万碱基级血液DNA提取试剂盒
BTN100909	长效期SDS-PAGE配胶液
BTN100923	甲基化专一性PCR试剂盒
BTN130593	HRP标记内参抗体(GAPDH)
BTN90610	卵白蛋白标准品(2mg/mL)
BTN80935	剥离硅烷
BTN80202	PAGE胶DNA柱式回收试剂盒
BTN131086	HRP标记亲和素
BTN80403	RNAse-free水
BTN160681	乙酰胆碱酯酶染色试剂盒(亚铁*化铜法)
BTN100840	嘌呤霉素干粉
BTN120810	血液细胞核DNA和线粒体DNA共提试剂盒
BTN130954	柱式Ti质粒DNA提取试剂盒
BTN160655	Levaditi硝酸*(代"银")法螺旋体染色试剂盒
BTN131227	10nt随机引物(0.5μg/uL)
BTN81216	核酸清除剂
BTN130897	YPDG液体培养基
BTN131223	Zenker固定液
BTN90303	硅胶膜DNA离心吸附柱(大量提取)
BTN70503Z	DNA marker(300-10000bp)
BTN131280	Zetterqvist固定液
BTN111009	端粒酶重复片段扩增试剂盒(TRAP试剂盒)
BTN130857	T4 RNA连接酶2(截短型K227Q)
BTN90604C	PCR法DNA探针地高*(代"辛")标记试剂盒
BTN140389	酿酒酵母Y187感受态细胞
BTN91108	T3体外转录试剂盒
BTN3621	微量DNA助沉剂
BTN120720	柱式冻存血液DNA提取试剂盒
BTN130560	大肠杆菌Rosetta-gami (DE3)pLys化学感受态细胞