5´RACE试剂盒厂家现货

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")5´RACE试剂盒厂家现货，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：5´RACE试剂盒厂家现货
产地：国产|进口
规格：10次
品牌：百奥莱博
英文名：5´-RACE Kit
研究真核基因的最基础的工作之一就是确定其转录终止位点，目前最通用的方法是5´-RACE法，RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)是Frohman发明的、通过PCR快速克隆cDNA末端的技术，它在不建立cDNA文库的前提下，利用已知cDNA序列设计引物，通过往两端延伸和扩增获得其5´-端序列。本试剂盒就是根据5´-RACE原理而开发。RACE的原理如下图：


产品特点：
1. 即开即用，客户不需要单独准备各种材料。
2.反应条件经过精心优化，包括使用无RNase H活性的MMLV和优化的引物。

试剂盒组成：

 

成分	规格
MMLV逆转录酶-RI混合液(RNase H-，200U/μL)	10μl
MMLV Buffer-dNTP混合液	60μl
微量核酸沉淀剂	400μl
TdT(末端转移酶)	10μl
2×TdT Buffer(含dATP)	100μl
PCR MagicMix 3.0	1.5ml
5´-RACE引物A-引物B混合液	100μl
5´-RACE引物C	100μl
RNase-Free水	1ml

储存条件：低温运输、-20℃保存、有效期一年。

使用方法：

1.变性模板RNA：将1μg mRNA或5μg总RNA加入到一个RNase-free的PCR管中，补RNase-Free水到9μL，65℃保温5分钟后短暂离心，立即放冰上待用。如果RNA浓度偏低，体积超过9μl,可以使用本公司的核酸浓缩剂(需另购,产品编号为BTN110801)浓缩到所需的体积。
2. 设置RT反应(用户可以根据需要设阴性对照)：在上步的含变性后的RNA模板的PCR管中，按顺序加入：

成分	用量
自备的基因专一性引物A(10μM)	4μl
MMLV Buffer-dNTP混合液	6μl
MMLV逆转录酶-RI混合液	1μl
合计	20μl

3. 37℃保温60分钟，42℃保温30分钟，50℃保温10分钟，最后75℃保温10分钟使逆转录酶变性。
4. 短暂离心5秒后待用。
5.在PCR管中加入40μl微量核酸沉淀剂(本产品含不溶的核酸助沉剂，用前需要充分摇匀再取用)，震荡混匀。
6.室温12000rpm离心15分钟，小心吸弃上清。
7. 加入1mL自备75%乙醇，室温12000rpm离心5分钟，小心吸弃上清。
8. 短暂离心数秒，小心吸弃残留液体后，稍微晾干后加入10μL RNase-free水，充分吹打溶解，得到cDNA溶液。注意：为保证加尾效率，溶解cDNA的RNase-free水最好不要超过10μl。
9. 加尾反应：在10μL cDNA溶液中加10μL 2×TdT Buffer(含dATP)和1μL TdT酶，轻柔吹打混匀。
10. 37℃保温15分钟进行加尾反应，然后75℃保温3分钟灭活末端转移酶。
11. 加入0.5mL RNase-free水稀释加尾反应体系。此稀释液将作为PCR的模板。
12. 第一轮PCR：用不同量的稀释后的加尾反应液设置PCR反应(样品组最好设用量梯度，单位：μL)。

成分	梯度1	梯度2	梯度3	梯度4
PCR MagicMix 3.0	25	25	25	25
自备基因专一性引物B(10μM)	2.5	2.5	2.5	2.5
5´RACE引物 A-引物B混合液	2.5	2.5	2.5	2.5
稀释后的加尾反应液	1	5	10	15
RNase-free 水	19	15	10	5
合计	50	50	50	50

13. 按下列条件进行 PCR(注：应根据实际情况选择适当的退火温度)。
 第1次循环：94℃ 5分，48-52℃ 2分，72℃ 4分
 第2-30次循环：94℃ 40秒，52-60℃ 1分，72℃ 3分
 最后延伸：72℃ 15分
14. 取10-20μL PCR产物进行琼脂糖电泳电泳检查PCR结果，如果一条清晰的条带，则可以不做后续的第二轮PCR，而直接进行 DNA 测序或TA克隆。
15. 第二轮PCR：如果第一轮PCR没有一条清晰的条，则带从4管PCR产物中各取1μL分别加入到20μL RNase-free水中进行稀释，然后各取1μL分别作为4管第二轮PCR的模板：

成分	用量
第一轮 PCR产物的稀释液	1μl
PCR MagicMix 3.0	25μl
5´RACE引物 C	2.5μl
自备基因专一性引物 C(10μm)	2.5μl
RNase-free 水	补水至50μl
合计	50μl

16. 按下列条件进行 PCR：第 1-30次循环(94℃ 40秒，52-60℃ 1 分，72℃ 3分)，最后延伸：72℃ 15分
17. 取10-20μL第二轮 PCR产物进行琼脂糖电泳，一般都会有一个样品有清晰的条带出现，则可以直接进行DNA测序或TA克隆。

关于5´RACE试剂盒厂家现货的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：

·填入法DNA末端标记试剂盒(生物素标记dUTP)
编号：BTN120653B
英文名称：Fill-in DNA End Labeling Kit
规格：5次
本试剂盒是基于Klenow DNA聚合酶填平DNA片段能力的填入法标记试剂盒，该反应的示意图如下：


产品特点：
1.快速，15分钟即可完成标记反应。
2.可用于标记5´突出的双链DNA。
3.可用同位素底物和非同位素底物(生物素和地高*(代"辛")标记的核苷酸等)。
4. 标记的探针可用于电泳迁移率实验(EMSA)、原位杂交(ISH)、Northern Blot(不推荐用于低丰度RNA检测)、小RNA Northern、Southern Blot(不推荐用于单拷贝基因检测)、菌落杂交、斑点印迹杂交分析等。

试剂盒组成：

组份	BTN120653A	BTN120653B	BTN120653C
填入法标记缓冲液，5×	50μl	50μl	50μl
Klenow DN聚合酶(1U/μL)	5μl	5μl	5μl
dNTP(2mM)	25μl	-	-
含Biotin-dUTP的dNTP	-	25μl	-
含DIG-dUTP的dNTP	-	-	25μl
超纯水	1ml	1ml	1ml
说明书	一份	一份	一份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。


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·SuperTOPO-Amp通用克隆试剂盒
编号：BTN160685-25A
英文名称：SuperTOPO Cloning Kit
规格：25次

·福林酚试剂
编号：BTN100939
英文名称：Folin Phenol Reagent
规格：100mL
福林酚试剂又叫Folin-Ciocalteau酚试剂，其本身并不含酚，而是磷钼酸和磷钨酸混合物，它是由美国科学家Folin和Ciocalteau在1929年发明，主要用于检测含酚成分。后被Lowry用于蛋白定量，现主要作为Lowry蛋白定量法的成分使用。
注：福林酚试剂跟福林试剂不同，后者是1,2-*醌-4-磺酸*。

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

·一站式Blue Native PAGE电泳套装
编号：BTN120642
英文名称：One-Stop Blue Native PAGE Pack
规格：30次
福林酚试剂又叫Folin-Ciocalteau酚试剂，其本身并不含酚，而是磷钼酸和磷钨酸混合物，它是由美国科学家Folin和Ciocalteau在1929年发明，主要用于检测含酚成分。后被Lowry用于蛋白定量，现主要作为Lowry蛋白定量法的成分使用。
注：福林酚试剂跟福林试剂不同，后者是1,2-*醌-4-磺酸*。

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

·IPTG干粉
编号：BTN100884
英文名称：IPTG Powder
规格：2.5g
IPTG学名为异丙基-β-D-硫代半乳糖苷；分子式为C9H8O5S，分子量为238.31，CAS号为367-93-1。本产品为白色或类白色结晶。溶于水和乙醇。

储存条件：低温运输、-20℃保存、有效期两年。

·β-半乳糖苷酶活性检测试剂盒
编号：BTN130599
英文名称：β-galactosidase Assay Kit
规格：24样
本产品是分光光度法测定β-GAL活力的，测定原理为β-GAL分解对-硝基*(代"*")-β-D-吡喃半乳糖苷生成对-硝基*(代"*")酚，后者在400nm有最大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算β-GAL活性。

β-半乳糖苷酶广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，能够催化β半乳糖苷化合物中的β半乳糖苷键水解，此外还具有转半乳糖苷的作用。β-GAL不仅可为植物的快速生长释放储存的能量，还能在正常的多糖代谢、细胞壁组分代谢以及衰老时细胞壁降解过程中催化多糖、糖蛋白以及半乳糖脂末端半乳糖残基的水解，释放自由的半乳糖。

试剂盒组成：

成分	规格
酶提取液	50ml
溶液A	粉剂1瓶
溶液B	15ml
溶液C	50ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，4℃保存，其中试剂A需-20℃保存，有效期半年。

使用方法：
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

一、酶液提取
1．细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量(104个)：酶提取液体积(mL)为500～1000：1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL酶提取液)，超声波破碎细菌或细胞(冰浴，功率20％或200 W，超声3秒，间隔10秒，重复30次)；15000g 4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。
2．组织：按照组织质量(g)：酶提取液体积(mL)为1：5～10的比例(建议称取约0.1 g组织，加入1mL酶提取液)，进行冰浴匀浆。15000g 4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。

二、 测定操作步骤
1．分光光度计预热30分钟以上，调节波长至400nm，蒸馏水调零。
2．取出试剂A，临用前向试剂瓶中加入5mL蒸馏水，充分溶解备用，制备成溶液A工作液(用不完的溶液A仍需-20℃保存)。
3．样本测定(在EP管中依次加入下列试剂)：

试剂名称	对照管(μl)	测定管(μl)
样本	50	50
蒸馏水	200	0
溶液A工作液	0	200
溶液B	250	250
迅速混匀，放入37℃准确水浴30分钟
溶液C	1000	1000
充分混匀，400nm处测定吸光值A，计算ΔA=A测定-A对照。每个测定管需设一个对照管。

三、酶活性计算公式
标准条件下测定的回归方程为y=0.00543x -0.0027；x为标准品浓度(nmol/mL)，y为吸光值。
注：V反总：反应总体积，0.5mL；V样：反应中样本体积，0.05mL；V样总：加入酶提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500万；T：反应时间，30分钟。
1．按照样本蛋白浓度计算：
 酶活性定义：每mg 组织蛋白每分钟产生1nmol对-硝基*(代"*")酚定义为一个酶活力单位。
 β-GAL活力(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0027)÷0.00543×V反总]÷(V样×Cpr)÷T=61.39×(ΔA+0.0027)÷Cpr
 如果需要另外测定，建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒。
2．按照样本鲜重计算：
 酶活性定义：每g组织每分钟产生1nmol对-硝基*(代"*")酚定义为一个酶活力单位。
 β-GAL活力(nmol/min/g鲜重)＝[(ΔA+0.0027)÷0.00543×V反总]÷(W×V样÷V样总)÷T=61.39×(ΔA+0.0027)÷W
3．按细菌或细胞密度计算：
 酶活性定义：每1万个细菌或细胞每分钟产生1nmol 对-硝基*(代"*")酚定义为一个酶活力单位。
 β-GAL活力(nmol/min/104cell)=[(ΔA+0.0027)÷0.00543×V反总]÷(500×V样÷V样总)÷T=0.123×(ΔA +0.0027)


5´RACE试剂盒厂家现货关键词：5´RACE试剂盒,BTN101105,5´-RACE Kit


·柱式真菌DNA提取试剂盒
编号：BTN70901
英文名称：Fungus DNA Column extraction kit
规格：50次
本试剂盒是真菌DNA提取试剂盒的柱式升级产品，能够破裂各种真菌坚硬的外壳，同时使用硅胶膜DNA 纯化技术，得到的DNA适用于各种后续实验。

试剂盒特点：
1. DNA 纯净，OD260/280一般都在1.9左右、DNA片段大小在30-50 Kb左右，可直接用于PCR、酶切、杂交等。
2. 操作简单，整个过程约15分钟，比大多数同类产品短。
3. 安全无毒，本试剂盒对人体无毒，无腐蚀性和刺激性气味。
4.液体培养物处理量在0.1-3mL之间，真菌菌丝、孢子、子实体的处理量在0.1-0.5g之间。
5. 价廉物美，与国外同类产品相比质量相当，但价格便宜。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	50ml
溶液B	50ml
溶液C	50ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
DNA洗脱液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输及保存，有效期一年。

使用方法：
1. 称取0.1-0.5g 湿的真菌菌丝、孢子、子实体或0.1-3mL液体培养物离心得到的沉淀，转移到塑料研钵中，液氮研磨成粉后转移到一个干净的1.5mL塑料离心管中。
 注意：最好避免使用含二氧化硅的玻璃研钵，因为DNA 会吸附在表面，影响得率。如果菌丝或子实体等已经十分干燥，则使用量最好比上面推荐的使用量低5-10倍；如果需要预先从环境中对真菌进行纯化(如从血液病原真菌中提取DNA，则需要先去除红细胞等成份，具体方法请参考相关文献和相关产品的使用说明书，如红细胞裂解液)。
2.在离心管中加入1mL 65℃预热的溶液A并用移液枪头充分吹打混匀(如果溶液A有沉淀，需先在65℃加热溶解后摇匀再使用)。
3. 65℃保温5-30分钟，其间最好吹打混匀2-3次。
4. 12000～15000g室温离心3分钟。
5. 将不超过0.75mL的上清转移到新离心管中。有时候上清液中还会有少量细小悬浮物，但对后续操作没有影响，不必进行特殊处理。
6.在上清液中加入等体积的溶液B，上下颠倒30秒充分混匀，溶液将呈白色混浊状。
7. 将其置于冰浴中放置5-10分钟。
8. 12000～15000g室温离心3分钟，转移上清到新的1.5mL塑料离心管中。
9. 加入0.2mL的*仿(自备)，震荡器上充分振荡30秒混匀。
10. 12000～15000g室温离心3分钟，两相交界面将有白色膜状物，小心转移上清到新1.5-5mL塑料离心管中。注意：由于下一步要加1.5倍体积的溶液C，所以新的离心管的体积要足够大。
11. 加入1.5倍体积的溶液C，上下颠倒30秒混匀，然后分多次的将混合液转移到离心吸附柱中。
12. 每次转移0.7-0.8mL 混合液后，室温放置5-10分钟。
13. 12000～15000g室温1分钟，弃穿透液。
14. 对需要多次上柱的样品，可以在此将剩余的样品加到离心吸附柱式中，重复第12-14 步的操作。
15. 将0.7mL 通用洗柱液加入离心柱，室温离心1分钟，弃穿透液。
16.在离心吸附柱中加入0.3mL的通用洗柱液，12000～15000g离心半分钟(此步为第二次洗涤)。
17. 空甩1分钟去除残留液体。
18. 将离心柱放置在一新的1.5mL塑料离心管中，加入30-100μL通用洗脱液。
19.室温放置5分钟后离心1分钟，管底即为真菌DNA溶液，可立即使用，也可长期保存在－20℃。
20.可以重复上步一次，以洗脱更多的DNA。

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