植物总蛋白质微量提取试剂盒(SDS-PAGE专用)品牌

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

植物总蛋白质微量提取试剂盒(SDS-PAGE专用)品牌是高品质的蛋白质研究产品，由北京百奥莱博供应，用于生化科学研究，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多植物总蛋白质微量提取试剂盒(SDS-PAGE专用)等蛋白质研究产品请联系我司咨询订购。

名称：植物总蛋白质微量提取试剂盒(SDS-PAGE专用)品牌
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
编号：BTN81218
规格：30次
本产品用于快速提取微量植物蛋白，用于SDS-PAGE凝胶电泳和Western印迹分析。

产品特点：
1.可以处理各种植物材料，包括新鲜或冻干的材料。
2. 操作简单。
3. 能有效去除植物样品中常见的污染。

试剂盒组成：

 

成分	规格
溶液A	30ml
溶液B	240ml
溶液C	1.5ml
说明书	1份

储存条件：常温运输及保存，有效期一年。

使用方法：
1．称取植物样品。如果是冰冻干燥的样品，称取50mg。如果是新鲜组织样品，称取100mg。在液氮条件下，用研钵充分研磨成为粉末。
2．将研磨得到的粉末转移到1.5mL的塑料离心管中。
3．加入1mL溶液A，在震荡仪上充分震荡5分钟。
4．室温12000g离心5分钟，组织残渣碎片将形成沉淀。
5．将上清液转移至一新的1.5mL塑料离心管中，在沸水中处理3分钟。
6．冷却至室温后，转移到一个10-15mL塑料离心管中，加入8倍体积的-20℃预冷的溶液B。
7．颠倒混匀后，置于-20℃冰箱中至少60分钟以充分沉淀其中的蛋白质。
8．12000g离心15分钟，去上清液，保留蛋白沉淀。
9．室温晾干之后，加入50μL溶液C并在震荡仪上充分震荡以让蛋白沉淀充分溶解
10．将蛋白溶液在沸水中处理3分钟。
11．室温12000g离心5分钟，上清可以直接用于蛋白浓度测定和SDS-PAGE。


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·噻孢霉素溶液
编号：BTN120684
英文名称：Cefotaxime Solution
规格：1mL
本产品为浓度100mg/mL的噻孢霉素水溶液。参考浓度50mg/mL。噻孢霉素(头孢噻肟*)分子式为：C16H16N5NaO7S2，分子量：477.45，CAS号：64485-93-4。效价：916-964μg/mg，溶于水。噻孢霉素为β-半乳糖苷酶抑制型抗菌素，能抑制肽聚糖的交联，从而抑制细菌细胞壁合成，常用于植物组织培养中抑制农杆菌。

储存条件：低温运输，-20℃避光保存，有效期6个月。

·酵母电转感受态细胞制备液
编号：BTN81201
英文名称：Yeast Electro Competent Cell Preparation Kit
规格：20次
本酵母电感受态细胞制备试剂是一种通过化学处理酿酒酵母和裂殖酵母电感受态细胞，使之不但马上能用于电转化，还能长期放置后用于电转化。

产品特点：
1. 操作简单，单溶液制备，除酵母培养的时间外，整个操作只需要10余分钟。
2. 制备得到的感受态细胞可以-80℃保存一年，方便多次使用，免去每次转化都要新鲜制备感受态细胞。
3. 主要用于酿酒酵母S.cerevisia和S.pombe，但能否用于其他酵母(如C.albicans、Pichia pastoris等)不详。
4. 最高转化效率可达到0.2-1×106个转化子/ug质粒DNA。
5. 得到的感受态细胞可以用各种线性或环状酵母穿梭质粒DNA进行转化，例如YIp，YRp，YCp，YEp和YAC等。
6.可以用于酵母双杂交、定点突变、基因破坏、等位突变基因修复等实验。
7. 本试剂盒足够处理200mL酵母菌液，制备40管酵母感受态细胞。

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

自备试剂：
灭菌水，SD液体培养基(不含*基酸的0.67% Bacto Yeast Nitrogen Base，2%葡萄糖)，SD固体培养基(在SD液体培养基中再加2%琼脂)，YPD液体培养基(1% Bacto Yeast Extract，2% Bacto Peptone，2%葡萄糖)，YPD固体培养基(在YPD液体培养基中再加2%琼脂)

使用方法：

一：电感受态细胞的制备
 说明：按本方法制备1 管酵母电感受态细胞就需要OD600达到1.0的新鲜酵母培养液5mL，用户需根据制备的酵母感受态细胞数量决定培养细胞的体积。下面操作只是以10mL酵母为例说明。
1.培养S.pombe细胞：挑取新鲜单菌落(4℃放置不超过3周的也可以)，接种到10mL SD液体培养基中。30℃摇晃培养，摇床速度250rpm/分钟，直到OD600达到1.0左右(相当于1×107细胞/mL)。
2.培养S.cerevisiae细胞：挑取新鲜单菌落(4℃放置不超过3周的也可以)，接种到装在10mL YPD液体培养基中。30℃摇晃培养，摇床速度250rpm/分钟，直到OD600达到1.0左右(相当于1×107细胞/mL)。
3. 冰上放置15分钟。
4.室温1600rpm离心5 min，弃上清。
5. 用冰浴的灭菌水洗涤3次。
6. 用0.2mL冰浴的本产品重悬细胞。
7. 按每管0.1mL分装到1.5-2mL的冷冻管中，直接放入-80℃冰箱待用。
 注意：不能放在液氮中，否则将丧失电转化能力。

二：电转化酵母感受态细胞
1. 将装有0.1mL感受态细胞的冷冻管从冰箱取出的、放置在30℃水浴中快速化冻(快速化冻的效果好于缓慢化冻)。
2. 用1mL冰浴的本产品洗涤一次。
3. 加入50μL冰浴的本产品重悬细胞。
4. 加入1-30 ng质粒DNA 并轻柔混匀。
5.转移到预冷的、距离为0.2cm的电击杯中。
6. 按电击仪的手册设置电击参数并进行电击处理，参考条件为：10kV/cm(对0.2 cm的电击杯，则为2kV)，5ms(25F，200)(各厂家仪器的使用略有不同，请严格按电击仪厂家提供的手册进行操作)。
7.电击后将细胞转移到1mL预冷的本产品中，轻柔混匀。
8. 取0.2mL转化细胞涂盘(S.pombe细胞需涂盘在SD 固体培养基上，S.cerevisiae细胞需涂盘在YPD固体培养基上)，30℃培养4-6天。


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·柱式真菌RNA大量提取试剂盒
编号：BTN80904
英文名称：Fungal RNA Column large-scale extraction kit
规格：5次
本试剂盒是在本公司柱式真菌RNA提取试剂盒(BTN80804)的大提升级产品，跟柱式真菌RNA提取试剂盒相比，它具有下列特点：
1.样品处理量大，最多可以处理50mL液体培养物或2g菌丝体。
2. 操作简单快捷，整个过程只需要约30分钟。
3. RNA 纯度高，OD260/280一般都在2.0左右，可直接用于RT-PCR、Norther杂交、microarray hybridization、cDNA 合成等。
4. RNA产量高，一般在20-70μg/mL 酵母培养物(约2.0 ×107个细胞)。
5. 非酶细胞破裂法，适用于各种形态的真菌和各个种属的真菌，包括Candida albican、Saccharomyces cerevisiae、Schizosaccharomyces pombe和Pichia pastoris等。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	50ml
溶液B	50ml
溶液C	100ml
溶液D	30ml
大提离心吸附柱	5套
通用洗柱液	100ml
RNA洗脱液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1. 将50mL液体真菌培养物在塑料离心管中5000-7,000rpm 4℃离心1分钟，并弃尽液体培养基(可以分多次离心)。如果是菌丝体，则直接称取2 克放入50mL塑料离心管中。
2. 加入10mL溶液A并充分吹打混匀。注意：溶液A存放时容易产生沉淀，如果有沉淀，用前请置于65℃融化并充分摇晃均匀。
3. 加入10mL溶液B，剧烈振荡30秒。
4. 65℃保温5分钟。
5. 5000-7,000rpm 4℃离心3～5分钟，转移上清到一自备的、干净的50mL塑料离心管中。
6.在上清液中加入2mL自备的*仿，充分振荡30秒混匀。
7. 4℃ 5000-7,000rpm离心3～5分钟，转移上清液到一自备的、干净的50mL塑料离心管中。
8. 加入相当于上清液(体积越10mL左右)3倍体积的溶液C和1倍体积的溶液D，充分混匀。
9. 将混合液分多次转移到离心吸附柱中，每次转移后需要室温放置2-3分钟以让RNA跟吸附膜充分结合，然后5000-7,000rpm室温离心30-60秒，弃收集管中的穿透液，然后再加入后一批混合液，重复操作，直到混合液全部挂柱。
10. 第一次洗涤：将10mL 通用洗柱液加到离心吸附柱中，室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
11. 第二次洗涤：一次洗涤一般足够去除杂质，但如果样品OD260/280 比值不高，可以再用10mL 通用洗柱液重复上步洗涤一次。
12.室温离心空柱子(带收集管)半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会影响RNA的使用。
13. 将离心吸附柱转移到一自备的RNase-free 50mL塑料离心管中，加入1mL RNA 洗脱液。
14.室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
15. RNA 完整性的电泳检测：
 注意：普通DNA上样液不含变性剂，更没经过去RNase处理，所以最好不要用于RNA电泳。
16. RNA产量和纯度产率测定：
 将5-10μL RNA 溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出RNA的产量(浓度×体积)和产率(RNA产量/细菌用量)。注意不要将RNA 稀释在DEPC 水中检测OD260和OD280，否则光吸收比在TE中测得的低10%-15%；也不要稀释过度，使OD读数在仪器的有效范围之外，这样得到的OD 比值没有意义。

疑难解答：
Q：上样孔里的红色荧光物一定是污染的基因组DNA 吗？
A：不是。用TAE或TBE电泳液和非变性胶电泳RNA时容易产生此现象，百奥莱博初步研究发现大部分红色荧光物是变性不充分的单链RNA 通过碱基互补或通过硼*(代"酸")络合(如果使用TBE作电泳液的话)形成的复合物，加RNase处理后，这些红色荧光物一般会消失。为避免此现象，建议最好使用甲醛变性胶电泳。如果需要使用非变性胶，也必须在上样前使RNA变性。使用百奥莱博优化的上样/变性/染色三用溶液RNAload可以使RNA在非变性胶上电泳时也有较好分辨率。使用非变性胶时，可以使用TAE或超快电泳液SuperBuffer-2，最好不要使用TBE缓冲液，因为TBE中的硼*(代"酸")能与RNA的多羟基形成复合物，RNA 很难形成锐利的条带。
Q：如何确认和去处除污染的基因组DNA？
A：如果怀疑有DNA污染，可以用RNase处理RNA样品，然后再电泳。如果上样孔里的红色荧光物不消失，则表示是基因组DNA污染。进一步确认可以使用PCR扩增法。去除污染的DNA可以使用5分钟柱式DNA 清除剂、非酶的DNA 去除剂DNA Scavenger或RNase-free DNase，由于RNase-free DNase一般都有残留的RNase污染，所以必须严格按照厂家提供的使用说明书进行操作。

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