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- 2026年05月29日
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抗体制备：重组蛋白抗原
目前抗体制备常采用多肽抗原及重组蛋白质抗原，这两种方法各有优缺点，需结合实验需求进行选择。
重组蛋白质抗原上往往带有多个不同的抗原决定簇，其中有些是顺序决定簇，有些为结构决定簇。利用变性的抗原免疫动物获得多克隆抗体是针对各个抗原决定簇的抗体的混合物，在一般应用中能够用于检测天然结构或变性的目标蛋白。利用变性蛋白做为免疫原的一个附带的好处是变性蛋白往往有更强的免疫原性，能够刺激动物产生强的免疫应答。
用做抗原目的的蛋白质一般选择使用大肠杆菌表达体系，因为该体系时间与金钱成本最低。为了提高目标蛋白质表达的可能性与纯化的方便性，人们有时只表达目标蛋白的一个小的片段如特定的结构域。大肠杆菌系统是欣百诺最早建立的成熟表达体系，有一系列设计完美的表达载体与非常成熟的表达培养条件，能够在较短时间内获得基因表达产物，且所需的成本相对较低。
如果制备抗体的目的单纯用于wb检测，采用合成的小肽作为抗原是经济快速的，但是存在由于肽段选择不合适造成的免疫原性弱或者无反应原性的风险，由于抗体制备需要较长的周期，因此利用多肽抗原制备抗体时，常常选取两三段不同的肽段以保证实验的成功率。
一般用多肽制备的抗体只能识别顺序决定簇，用于检测非变性状态的抗原时效果很差，特别是制备中和抗体时，需要最大可能的保持抗原的天然结构。重组抗原在免疫原性、表位多样性上远优于多肽
·抗体制备（重组蛋白抗原）—— 步骤 1. 重组蛋白抗原表达及纯化制备
免疫用的多肽抗原 纯度要求大于80%，更高的纯度虽然理论上可以获得特异性更好的抗体，实际操作过程中动物总是要产生大量非特异性抗体，从而掩盖了抗原纯度所带来的收益。
抗原序列的决定：
客户提供目标蛋白序列或cDNA序列，我们将进行抗原性分析预测，并结合您的实际需要，选取最佳的区域作为抗原序列。
此步骤服务说明请查考 重组蛋白表达与纯化技术服务（E. coli表达系统）。
·抗体制备（重组蛋白抗原）—— 步骤 2. 免疫动物/采血
目前我们仅提供兔子的多抗制备，采用的动物为SPF级新西兰大白兔。每两周免疫一次，共免疫5次。
ELISA检测，确保免疫后血清效价大于1:4000。
客户需要提供的材料：
若客户提供交联好的蛋白，请与客服人员沟通其具体要求。
提供客户：60-100ml免疫后血清，1ml免疫前血清对照，效价检测结果
时间：10周左右
后继抗体纯化步骤，请参照抗血清Protein A/G亲和抗原特异性亲和纯化服务说明。
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文献和实验于《科学报告》发表的一篇抗体测试的文章表明，针对同一靶点的很多抗体并不符合验证标准[1]。而上述杂带干扰、胶片空白等 WB 失败案例中，基本都是因为抗体选择引起的。因此抗体质量和匹配度在 WB 实验中就显得尤为重要。高特异性、品质稳定的抗体在 WB 实验中起到重要作用。随着抗体制备技术的发展，重组单克隆抗体因其高亲和性、高特异性和可重现性的特点，代表了抗体制备技术的发展趋势。 使用 SARS-CoV-1/2 NP 抗体对感染 SARS-Cov-2 的 Vero E6 细胞进行IF分析 图片
型和表型统一于一体，将选择能力与扩增能力结合起来，具有强大的筛选能力，能够在体外模拟体内的抗体生成过程，可以不经杂交瘤途径，甚至不经过免疫就可以制备和生产单克隆抗体。与传统抗体技术的比较，噬菌体展示技术已被广泛用于世界范围内抗体的研究和开发，其发明者 George P. Smith 和 Sir Gregory P. Winter 于 2018 年凭此获得诺贝尔化学奖。 噬菌体展示技术的出现为全人重组抗体提供了一条简便、快捷的基因工程抗体制备路线，是全人重组抗体制备发展史上重要的转折点。阿达
，插入正确率>95%，序列正确率>85%。 克隆PCR验证结果3.兔免疫库的淘选和筛选：文库经过 4 轮淘选富集和 96 个单克隆筛选，阳性克隆比例超过 40%，阳性克隆测序获得了 6 条不同的阳性兔单抗序列。4.抗体重组表达及检测验证：6 条阳性兔单抗采用普健生物哺乳系统重组表达，ELISA 检测结果显示重组抗体能与蛋白抗原良好结合。
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