BTN90404型植物RNA柱式提取试剂盒2.0促销

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名称：BTN90404型植物RNA柱式提取试剂盒2.0促销
英文名：Plant RNA Column extraction kit 2.0
规格：50次
产地：国产|进口
编号：BTN90404
本试剂盒是柱式植物RNA提取试剂盒(BTN71203)与柱式DNA清除剂(BTN90318)整合后得到的升级产品，它解决了提取的植物总RNA中出现基因组DNA污染这一难题，提取的RNA通过PCR验证不含基因组DNA污染。

试剂盒特点：
1. 操作简单快速，处理一个样品只需要约十几分钟。
2. RNA纯度更高，平均 OD260/280一般都在2.0左右，能够有效去除大多数植物中的多糖污染。
3. 所提取RNA不含基因组DNA污染(电泳及PCR均检测不到)。
4. 得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern杂交、cDNA合成等实验。
5. 性价比高于进口的柱式植物RNA提取产品。
6. 本试剂盒方法提取不到总RNA中的miRNA。

试剂盒组成：

 

成分	规格
溶液A	50ml
溶液B	15ml
溶液C	50ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	100ml
膜反应液	2.5ml
RNase-free DNase(1U/μL)	0.5ml
RNA洗脱液	10ml

储存条件：常温运输，4℃保存(DNase 需要-20℃保存)，有效期一年。

使用方法：
1. 估算组织细胞的用量。每次微量提取一般需要100-200mg植物叶片、或50-100mg植物种子、或200-500mg植物果实。
2. 先将新鲜植物组织剪切成小块(保存在RNAhold中的植物组织需用纸吸去RNAhold液体后再剪切成小块)，放入10-15mL塑料离心管中，加入1mL 65℃预热的溶液A(用前需要摇晃混匀)，然后用匀浆器匀浆5-20秒。匀浆时会产生泡沫，但不影响提取效果。也可以使用液氮研磨法破碎植物组织，研磨完后加入1mL溶液A，但效果比较差，因为研钵本质是二氧化硅，在溶液A存在时会吸附RNA。
3. 将匀浆物或研磨物转移至干净的1.5mL塑料离心管中(可以不必转移非液体的细胞碎片)。有的植物组织(比如果实)含有大量水份，匀浆液会多于1mL，转移时也只取1mL。
4.在离心管中加入0.3mL的溶液B和0.2mL自备*仿，在振荡器上振荡30秒混匀，此时溶液呈均匀的乳浊状。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
5.室温12000rpm离心3～5分钟，两相间将有约5毫米厚的细胞破碎物。
6. 将上清液(约0.6mL)转移到另一干净的1.5mL塑料离心管中，下层有机相和中间层含有DNA、蛋白质和其他杂质，避免触及或吸取。最好留下100μL上清液不取。
7. 加入跟上清液等体积的溶液C，充分颠倒混匀。如果有沉淀产生(对某些植物，属于正常现象)，千万不要去掉沉淀，一定要把所有的混合物上柱。
8. 将一半的混合液(含沉淀物，如果有的话)转移到离心吸附柱中，12000rpm室温离心半分钟，弃穿透液。
9. 将剩下的一半的混合液(含沉淀物，如果有的话)转移到同一离心吸附柱中，12000rpm室温离心半分钟，弃穿透液。
10. 加0.7mL通用洗柱液，12000rpm室温离心半分钟，弃穿透液。再加0.3mL通用洗柱液，12000rpm室温离心半分钟，弃穿透液。一般样品如此洗涤两次即可，但对于在第7步加入溶液C后有沉淀产生的样品，则需要洗三次，每次加入的通用洗涤液的量分别为0.4、0.3和0.3mL，其他操作不变。
11. 12000rpm室温离心10秒以便去除残留液体。此步很重要，否则残留的通用洗柱液会抑制后续反应中DNase的活性。
12. 将10μL(10 U)的RNase-free DNase加入到50μL 37℃预热的DNA膜反应液中，吹打混匀配制成DNase工作液。
13. 将DNase工作液在37℃预热1分钟，然后全部加入到离心吸附柱中，室温放置5分钟。注意：5分钟一般足够降解大多数情况下的DNA污染。如果DNA没有彻底降解(可能由于样品中残留的杂质抑制了DNase的活性)，此步的保温时间可以适当延长到10分钟或15分钟。
14. 直接在离心吸附柱中加0.7mL通用洗柱液，盖上盖后颠倒数次混匀。
15. 12000rpm室温离心半分钟，弃穿透液。
16. 再加0.3mL通用洗柱液到离心吸附柱中，12000rpm室温离心半分钟，弃穿透液。
17. 12000rpm室温离心半分钟。此步十分重要，否则残留的乙醇(通用洗柱液中的成分)会影响RNA的使用。
18. 将离心吸附柱转移到RNase-free收集管中，加入30-50μL RNA洗脱液，室温放置1-2分钟。
19. 12000rpm室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品。本产品提供的离心吸附柱吸附力较强，一次洗脱不能全部将膜上RNA洗下，如有必要，可以再加入30-50μL RNA洗脱液一次。
20. 所得RNA溶液可以立即使用或存放于-80℃待用。如果要进行甲醛变性电泳检测。如果使用非变性胶电泳，则必须使用RNAload上样液。千万不能使用DNA上样液(因为它一般没经过去RNase处理)。


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·血液细胞核DNA和线粒体DNA共提试剂盒
编号：BTN120810
英文名称：Blood nuclear DNA and mitochondrial DNA extraction kit
规格：25次
本试剂盒是在本公司血液DNA提取试剂盒产品基础上开发的、专门用于从新鲜或冷冻的哺乳动物抗凝全血中同时提取细胞核DNA和线粒体DNA的试剂。

产品特点：
1.一份样品可以同时得到细胞核DNA和线粒体DNA，节约宝贵的实验材料。
2. DNA产率高。细胞核DNA产率一般为30-50μg/mL 新鲜血液，线粒体DNA产率约为1μg/mL 新鲜血液。陈旧血液DNA产率差别较大。
3. DNA 纯净，OD260/OD280在1.8-2.0 之间，可直接用于PCR、酶切、杂交等实验。
4.适用于哺乳动物血液，不适用于其他动物血液。
5. 所用试剂安全无毒，健康环保。

试剂盒组成：

成分	规格
红细胞裂解液D型	250mL
溶液A	25ml
溶液B	2ml
溶液C	5ml
DNA 洗脱液2.0	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存，保存期限一年。

使用方法：

一：白细胞核和线粒体的分离
1. 将3mL 用EDTA 抗凝管收集的新鲜血液转移到一个干净的15mL塑料离心管中。注意：最好使用新鲜血液。对于陈旧血液，由于冻凝过程中冰晶已经对细胞核膜和线粒体膜产生损伤，所以DNA 得率会大大减少，具体减少多少根据冻凝时间长短不同而不同。
2. 向血液中加入等体积(3mL)的D型红细胞裂解液；轻柔颠倒数次混匀，室温静置10分钟以裂解红细胞和白细胞的细胞膜，直至溶液变成清澈的红色。注意：D型红细胞裂解液一旦打开后，非常容易污染细菌，未用完的部分最好-20℃保存，下次使用前，要溶解后充分摇匀。
3.室温下1000 g离心10分钟沉淀白细胞核。
4.转移上清(含线粒体)到新的15mL塑料离心管中，注意不要触及白细胞核沉淀。
5.在白细胞核沉淀中加入3mL D型红细胞裂解液。轻柔颠倒数次混匀后，室温下1000 g离心10分钟以沉淀白细胞核。
6.转移上清(含线粒体)到第4 步所得的、已经含有上清的15mL塑料离心管中。
将白细胞核沉淀放置冰上，和即将准备好的线粒体一起用于DNA提取，也可以放置在-20℃待用。
7. 将汇集的含线粒体的上清于4℃下15000g离心30分钟。
8.小心移弃上清，小心将线粒体沉淀重悬在1mL D型红细胞裂解液中，然后转移到1.5mL塑料离心管中，15000g离心5分钟，移弃上清得到线粒体沉淀。
9. 用1mL D型红细胞裂解液洗涤线粒体2次(每次先重悬线粒体，再15000g离心5分钟得沉淀)。
10. 所得线粒体可以直接用于DNA提取，也可放置在-20℃待用。

二：DNA的提取(下面步骤为白细胞核DNA提取和线粒体DNA提取通用)
11.在白细胞沉淀或线粒体沉淀中加入0.5mL溶液A，用移液枪吹打数次混匀后再加入75μL溶液B，混匀后于55℃温育10分钟。注意：溶液将成浑浊状。
12. 再加入0.2mL溶液C充分颠倒混匀。
13.在4℃下13000g离心20分钟后，将上清(含DNA)转入一新的1.5mL塑料离心管中。
14. 加入两倍体积的自备无水乙醇充分震荡混匀后，室温13000 g离心5分钟，去尽上清。
15. 加入1mL 75%乙醇，充分混匀后室温13000g离心5分钟，去尽上清。
16. 重复上步一次。
17. 短暂离心，去尽残留溶液(此步十分重要，不要省略)。
18. 短暂晾干半分钟，加入适量DNA 洗脱液2.0 溶解DNA(对细胞核DNA，可加入500μL DNA 洗脱液2.0，对线粒体DNA，可加入50μL DNA 洗脱液2.0)。
19. 65℃保温15分钟以便彻底溶解DNA沉淀。溶解后的DNA可以立即用于后续的OD 检测、酶切、PCR或其他实验，也可以放置在-20℃长期保存。


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