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蛋白定量
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上海三抒生物科技有限公司
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800次
Bradford蛋白浓度测定试剂盒(去垢剂兼容型)
Bradford蛋白浓度测定试剂盒(去垢剂兼容型)(Detergent Compatible Bradford Protein Assay Kit)是根据最常用的两种蛋白浓度检测方法之一Bradford法研制而成,实现了蛋白浓度测定的快速、稳定和高灵敏度,能兼容一系列常见去垢剂,并且检测数据有很好的线性关系。本试剂盒的性能不仅优于常规的Bradford法,和BCA法比也更加快速便捷。
本试剂盒和常规的Bradford蛋白浓度测定试剂盒相比可以兼容一系列常见的去垢剂,和BCA法相比,能兼容高浓度的还原剂,并且检测速度极快,在检测含去垢剂样品蛋白浓度时,比BCA法更加便捷。生命科学研究中的很多蛋白样品都是含有去垢剂的,因此常规Bradford法的使用受到了很大的限制,通常只能使用可以兼容去垢剂但检测比较耗时的BCA法。如果使用本试剂盒,不仅能兼容去垢剂,而且由于能立即显色,检测速度会比BCA法快很多。当蛋白样品中同时含有一定浓度的去垢剂和还原剂时,常规的Bradford法和BCA法就都不能使用了,而本试剂盒仍然是可以检测的。
Bradford法的原理是考马斯亮兰(Coommassie Brilliant Blue)G-250与蛋白质的碱性和芳香族氨基酸特别是精氨酸
(Arginine)在酸性介质中结合后,溶液转变为蓝色,溶液最大吸收峰从465nm迁移到595nm,颜色的变化与蛋白质浓度成正比。因此,可通过检测595nm处的吸光度对溶液中蛋白质浓度进行测定。
本试剂盒检测速度极快,10-20个样品只需不足10分钟即可完成,和BCA法相比大大缩短了检测时间。
本试剂盒检测灵敏度高,最小蛋白检测量达到0.5μg。
本试剂盒测定蛋白浓度时不受较高浓度去垢剂的影响,可以很好地兼容1% Triton X-100、1% Tween 20、1% SDS、1%
NP-40和1% Brij35等去垢剂,同时兼容三抒生产的多种裂解液,包括 Western及IP细胞裂解液(P0013)、RIPA裂解液(强)
(P0013B)、RIPA裂解液(中)(P0013C)、RIPA裂解液(弱)(P0013D)、NP-40裂解液(P0013F)、SDS裂解液(P0013G)、Western及
IP细胞裂解液(无抑制剂) (P0013J)、RIPA裂解液(强,无抑制剂) (P0013K) (参考图1)。
本试剂盒标准曲线的线性关系好。常规的Bradford法的标准曲线是非线性的。三抒的本试剂盒进行了精心优化,不仅能兼容上述的去垢剂,还能确保10μl体积的样品或标准品在0.1-1.5mg/ml浓度范围内有良好的线性关系(参考图1)。
图1. 本试剂盒蛋白标准曲线及其兼容性的实测效果图。A. 本试剂盒对于常见去垢剂的兼容性。B. 本试剂盒对于三抒的多种裂解液的兼容性。蛋白标准品配制在图中所示的溶液中进行测试。图中数据仅供参考,实际的检测效果可能会略有不同。
与测定蛋白浓度的其它方法如BCA法和Lowry相比,本试剂盒测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响,尤其是还原试剂和去垢剂的影响。样品中β-巯基乙醇(β-Mercaptoethanol)的浓度可高达1M,二硫苏糖醇(DTT)的浓度可高达5mM。同时本试剂盒还能兼容上述各种常见的去垢剂。BCA法能耐受各种常见的去垢剂,但不能耐受高浓度的还原剂。
每个试剂盒可以检测800个样品。
保存条件:
4℃保存,一年有效。蛋白标准可以-20℃长期保存。
注意事项:
蛋白标准请在全部溶解后先混匀,再稀释成一系列不同浓度的蛋白标准。
将G250染色液(去垢剂兼容型)回复到室温再使用,有利于提高检测的灵敏度。
需可检测560-610nm之间波长的酶标仪一台,最佳检测波长为595nm。并需96孔板。。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
上海三抒生物科技有限公司是一家从事于生物化学行业 的企业,公司致力于为实验室分析领域提供一站式服务,为用户提供专业、快捷、可靠的全方位服务。
公司拥有一支高素质管理团队和一批经验丰富的技术检测研发团队,硕士以上学历约占70%,目前已与国内各大科研院校、高效、医院、化工食品领域等实验室以及企业建立了长期良好的合作关系。
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文献和实验原理:这一方法基于考马斯亮蓝G-250有红蓝两种不同的形式。在一定浓度的乙醇及酸性条件下,可配成淡红色的溶液,当与蛋白质结合后,产生蓝色化合物,反应迅速而稳定。反应化合物在465-595nm处有最大的光吸收值,化合物颜色的深浅与蛋白浓度的高低成正比关系,因此可检测595nm的光吸收值的大小计算蛋白的含量。 溶液: ①Bradford储存液 100ml95%乙醇 200ml88%磷酸 350mgServaG蓝 室温下长期保持稳定。 ②Bradford
(一)实验原理 双缩脲法(Biuret法)和Folin�酚试剂法(Lowry法)的明显缺点和许多限制,促使科学家们去寻找更好的蛋白质溶液测定的方法。 1976年由Bradford建立的考马斯亮兰法(Bradford法),是根据蛋白质与染料相结合的原理设计的。这种蛋白质测定法具有超过其他几种方法的突出优点,因而正在得到广泛的应用。这一方法是目前灵敏度最高的蛋白质测定法。 考马斯亮兰G-250染料,在酸性溶液中与蛋白质结合,使染料的最大吸收峰的位置(lmax),由465nm变为
(一)实验原理双缩脲法(Biuret法)和Folin�酚试剂法(Lowry法)的明显缺点和许多限制,促使科学家们去寻找更好的蛋白质溶液测定的方法。1976年由Bradford建立的考马斯亮兰法(Bradford法),是根据蛋白质与染料相结合的原理设计的。这种蛋白质测定法具有超过其他几种方法的突出优点,因而正在得到广泛的应用。这一方法是目前灵敏度最高的蛋白质测定法。考马斯亮兰G-250染料,在酸性溶液中与蛋白质结合,使染料的最大吸收峰的位置(lmax),由465nm变为595nm,溶液的颜色







