- ￥680
- SSbio
- HG-VYH0843
- 国产
- 2025年11月10日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保质期：
3年
- 保存条件：
-20
- 规格：
管
载体名称：pET28a-EGFP
载体别名：pET-28a-EGFP；pET28a-GFP；pET-28a-GFP
启动子：T7 promoter
复制子：pBR322 ori
终止子：T7 terminator
载体用途：荧光蛋白报告载体（原核）；大肠杆菌荧光质粒；大肠杆菌绿色荧光质粒
质粒大小：6053 bp
质粒标签：N-6×His, N-Thrombin, N-EGFP, C-6×His
荧光标记：绿色荧光（EGFP）
原核抗性：Kan+
克隆菌株：DH5a
培养温度：37℃
表达宿主：BL21(DE3)等大肠杆菌
诱导方式：IPTG或乳糖及其类似物
5'测序引物：T7（5'-TAATACGACTCACTATAGGG-3'）
3'测序引物：T7-ter（5'-TGCTAGTTATTGCTCAGCGG-3'）
载体介绍
pET28a-EGFP质粒是一种原核表达载体，C端含有一个6×His标签，N端含有6×His标签、thrombin酶切位点、EGFP标签。该质粒含有多个常用的酶切位点，便于外源基因克隆。表达由宿主细胞提供的T7 RNA聚合酶诱导，目的基因被克隆到质粒载体上，受噬菌体强转录及翻译信号控制。
pET系统是有史以来在大肠杆菌中表达重组蛋白的功能最强大的系统，也是现今原核表达方面使用最广泛的系统。该系列质粒能很容易的通过降低诱导物的浓度来削弱蛋白表达。在非诱导条件下，可以使目的基因处于完全沉默状态而不转录。
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文献和实验本人整理了论坛上关于战友所求助的各种质粒载体的图谱，后面所跟着的网站都是含有前面名称载体的详细图谱，希望对大家能有帮助！ 质粒pGEM-4Z载体图谱 http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/5198013_0.html pGEX-4T-2载体图谱：http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/4211077_0.html pGEX-4T-1载体图谱：http://www.dxy.cn/bbs
-MEM、DMEM培养基和M-MLV逆转录酶；小牛血清；G418；DIG High PrimeDNA Labeling and Detection Starter Kit I1。 质粒 pGL3-promoter；含EBVR的质粒p220.2。 重组质粒载体pcDNA3-EGFP-EBVR的构建 采用StuI和XbaI消化p220.2，获得长4.7 kb的EBVR，包括EBV核抗原1(EBNA1)和OriP，克隆至pGL3-promotor的SV40启动子下游Hind Ill
1 、将转染后的细胞按照一定的比例接种到 6 孔板中（一般选用 1 ： 10 和 1 ： 100 两个梯度），分别采用 1200 m g/ml ， 1000 m g/ml 和 800 m g/ml 的 G418 进行筛选； 以转染携带 EGFP 质粒载体的细胞作为阳性对照，以未转染质粒载体的细胞作为阴性对照； 2 、每 3 ～ 4 天换液一次； 3 、筛选 20 ～ 30 天，即可得到稳定表达细胞株； 4 、传代后，以一定的 G418 浓度
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