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- BYT1711-2301
- 2026年01月27日
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见说明书
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蛋白定量
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- 供应商：
上海三抒生物科技有限公司
- 规格：
1000次
Bradford 蛋白浓度测定试剂盒
货号：PC0010
规格：2500T
保存：开封使用后请密封保存，本试剂盒自订购之日起九个月内有效。
产品内容：
组成包装（2500 微孔) 保存
5×G250 染色液100ml 2-8℃
PBS 稀释液30ml 2-8℃
蛋白标准(5mg/ml BSA) 1ml -20℃
产品简介：
考马斯亮兰G-250 染料，在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的最大吸收峰的位置（Imax），由465nm 变
为595nm，在一定的浓度范围内，测定的吸光度值A595 与蛋白质浓度成正比。Bradford 法测定蛋白浓度不受
绝大部分样品中的化学物质的影响，样品中巯基乙醇的浓度可高达1M，二硫苏糖醇的浓度可高达5mM，但受
略高浓度的去垢剂影响，需确保SDS 的浓度低于0.1%，Triton X-100 低于0.1%，Tween 20, 60, 80 低于0.06%。
含去垢剂的样品推荐使用索莱宝生产的BCA 蛋白浓度测定试剂盒。
操作说明：
一．微孔酶标仪法
1. 完全溶解蛋白标准品，取10ul，稀释至250ul ，使终浓度为0.2mg/ml。待测蛋白样品在什么溶液中，
标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见，也可以用0.9%NaCl 或PBS 稀释标准品。
2. 5×G250 染色液使用前请颠倒3-5 次混匀，取1ml 5×G250 染色液，加入4ml 双蒸水，混匀成1×G250
染色液，此1×G250 染色液可在4℃保存一周。
3. 将标准品按0,2,4,6,8,12,16,20 微升分别加到96 孔板中，加PBS 稀释液补足到20 微升。
4. 将样品作适当稀释（最好多做几个梯度，如作2 倍、4 倍、8 倍稀释），加20 微升到96 孔板的样品孔
中。由于移液器在取小量时的误差，标准线前面的点可能不很准确，所以尽可能的让样品点落在标准线1/2 后。
5. 各孔加入200 微升稀释后的1×G250 染色液，室温放置3-5 分钟。
6. 用酶标仪测定A595，或560-610nm 之间的其它波长的吸光度。
7. 根据标准曲线计算出样品中的蛋白浓度。
二．分光光度计法
如无酶标仪，染色反应可在离心管中进行，反应液混匀后加入比色皿中，使用分光光度计测定吸光值。
步骤如下：
1. 取八支（或者更多）干净的10ml 离心管，标记上号。
2. 取100ulBSA 加入PBS 2.4ml 稀释至终浓度为0.2mg/ml。
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文献和实验原理：这一方法基于考马斯亮蓝G-250有红蓝两种不同的形式。在一定浓度的乙醇及酸性条件下，可配成淡红色的溶液，当与蛋白质结合后，产生蓝色化合物，反应迅速而稳定。反应化合物在465－595nm处有最大的光吸收值，化合物颜色的深浅与蛋白浓度的高低成正比关系，因此可检测595nm的光吸收值的大小计算蛋白的含量。 溶液： ①Bradford储存液 100ml95％乙醇 200ml88％磷酸 350mgServaG蓝 室温下长期保持稳定。 ②Bradford
(一)实验原理双缩脲法(Biuret法)和Folin�酚试剂法(Lowry法)的明显缺点和许多限制，促使科学家们去寻找更好的蛋白质溶液测定的方法。1976年由Bradford建立的考马斯亮兰法(Bradford法)，是根据蛋白质与染料相结合的原理设计的。这种蛋白质测定法具有超过其他几种方法的突出优点，因而正在得到广泛的应用。这一方法是目前灵敏度最高的蛋白质测定法。考马斯亮兰G-250染料，在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的最大吸收峰的位置(lmax)，由465nm变为595nm，溶液的颜色
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