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北京现货核蛋白提取试剂盒厂家直
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核/浆蛋白抽提试剂4
长期
Nuclear Protein Extraction Kit
682
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产销*(代"售")北京现货核蛋白提取试剂盒厂家直销,我公司是生物试剂、化学试剂专业供应商,立足北京,服务全国的高校、研究所、医院、企业科研部门,欢迎各位老师来电垂询订购。
名称:核蛋白提取试剂盒品牌:百奥莱博编号:QN1079规格:50T|100T产地:国产|进口本核蛋白提取试剂盒提供了一种简单、方便的从培养细胞或新鲜组织中抽提核蛋白的方法。整个过程只需约60分钟就可以将核蛋白和浆蛋白从细胞中分离出来。得到的蛋白可以用于Western blot等实验。本试剂盒通过浆蛋白抽提试剂使细胞膨胀破裂,释放出胞浆蛋白,再通过离心得到细胞核。然后通过核蛋白抽提试剂抽提得到细胞核蛋白。本试剂盒可以抽提50/100个样品(每个样品约2×106个Hela细胞或40mg组织)。体外培养细胞的操作方法(裂解蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行):1.根据用量取适当的浆蛋白抽提试剂和核蛋白抽提试剂加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。PMSF需现用现加,若目标蛋白含有丰富的半胱*酸,可以在两种蛋白抽提液中加入DTT至终浓度0.5mM。2.对于贴壁细胞,去除培养液,用PBS洗一遍,用细胞刮刀收集细胞,或用EDTA消化后吹打下细胞(最好不用胰酶硝化,以免胰酶消化目的蛋白)。500g离心2~3分钟收集细胞,吸尽上清留下沉淀备用。3.对于悬浮细胞:用PBS洗一遍,500 g离心2~3分钟收集细胞,吸尽上清,留下细胞沉淀备用。4.每20μl细胞沉淀加入200μl浆蛋白抽提试剂(2×106个细胞沉淀的体积约20μl或40mg)。5.用移液器吹打或高速涡旋15秒(可适当延长),必须使细胞沉淀完全分散开成单细胞悬液。细胞沉淀分散不完全会导致蛋白产量降低。6.冰浴10分钟。7.最高转速剧烈涡旋10秒,4℃,12000~16000g离心10分钟。8.上清即为抽提得到的细胞浆蛋白,立即吸取上清至预冷的样品管中备用,进行后续的PAGE、Western等实验,但蛋白浓度较低,可根据需要进行相应浓缩。9.沉淀即为细胞核,要完全吸尽残余的上清(避免细胞浆蛋白的污染),加入50-100μl核蛋白抽提试剂。10.用移液器吹打或高速涡旋15秒(可适当延长)至沉淀完全分散,冰浴10分钟。11.最高转速剧烈涡旋10秒,4℃,12000~16000g离心10分钟。12.立即吸取上清至预冷的样品管中,此即为抽提得到的细胞核蛋白。可进行后续实验或-70℃冻存。 对于组织样品:把组织称重后,尽可能切成非常细小的碎片,按每50mg组织加入200μl~500μl PBS,用匀浆器冰上匀浆制成细胞悬液,500g离心2~3分钟收集细胞,吸尽上清,收集沉淀。加入200μl浆蛋白抽提试剂后接上述步骤5。注意事项:1.裂解得到的蛋白样品,由于含有较高浓度的去垢剂干扰,不能用Bradford法测定蛋白浓度,可以选用本公司生产的BCA蛋白定量试剂盒(货号QN1075)测定蛋白浓度。2.对于组织样品,本试剂盒适用于新鲜组织,对冻存组织抽提效果较差。3.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。储存条件:核/浆蛋白抽提试剂4℃保存,PMSF于-20℃保存。关键词:QN1079,核蛋白提取试剂盒,Nuclear Protein Extraction Kit我公司的北京现货核蛋白提取试剂盒厂家直销,性价比高,货期短,送货上门,欢迎您来电咨询购买,另外,我公司还生产供应销*(代"售")下列产品:
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