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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 注册证号:
详见说明书
- 保存条件:
在-20℃或-80℃可长期保存
- 保质期:
详见说明书
- 英文名:
Leptomycin B( 出核转运抑制剂 )10μg说明书
- 库存:
33
- 供应商:
上海一研
Leptomycin B( 出核转运抑制剂 )10μg说明书注意事项:
1.从少量样品(1-10mg组织或102-104细胞)中提取RNA时可加入少许糖原以促进RNA沉淀。例如加800ml TRIzol匀浆样品,沉淀RNA前加5-10μg RNase-free糖原。糖原会与RNA一同沉淀出来,糖原浓度不高于4mg/ml是不影响第一链的合成,也不影响PCR反应。
2.匀浆后加氯仿之前样品可以在-60至-70℃保存至少一个月。RNA沉淀可以保存于75% 酒精中2-8℃一星期以上或-5至-20℃一年以上。
3.分层和RNA沉淀时也可使用台式离心机,2600×g离心30-60分钟。
Leptomycin B( 出核转运抑制剂 )10μg说明书实验步骤
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5):氯仿:异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的氯仿:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)抽提两次,氯仿:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
Leptomycin B( 出核转运抑制剂 )10μg说明书实验步骤:
1.从少量样品(1-10mg组织或102-104细胞)中提取RNA时可加入少许糖原以促进RNA沉淀。例如加800ml TRIzol匀浆样品,沉淀RNA前加5-10μg RNase-free糖原。糖原会与RNA一同沉淀出来,糖原浓度不高于4mg/ml是不影响第一链的合成,也不影响PCR反应。
2.匀浆后加氯仿之前样品可以在-60至-70℃保存至少一个月。RNA沉淀可以保存于75% 酒精中2-8℃一星期以上或-5至-20℃一年以上。
3.分层和RNA沉淀时也可使用台式离心机,2600×g离心30-60分钟。
Leptomycin B( 出核转运抑制剂 )10μg说明书特点
1.离心柱法;
2.快速:30min内即可完成全部操作;
3.得率高:无需裂解红细胞,直接从全血中提取DNA,可从0.2 mL健康人类全血中提取得到不低于3μg DNA;
4.操作简便:无需水浴,全部提取操作可在室温下进行;
5.高质量:所提取的DNA纯度高、得率高,可直接用于PCR、酶切、杂交等下游实验。
Leptomycin B( 出核转运抑制剂 )10μg说明书客户提供
●新鲜材料或正确保存条件下材料(组织、细胞、细菌等)
●4℃保存一周,-20℃保存一个月,-80℃保存一年血液样品(EDTA,肝素,柠檬酸钠抗凝)
●详细的背景资料:来源、特点、类型等
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基因组RNA/DNA提取、实验报告
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高纯度RNA/DNA、完整货期
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文献和实验1,是主要的出核介导物。这种蛋白与出核蛋白上的NES序列结合并将其转运至核孔的出核部分。 Leptomycin B是从链霉菌中分离出来的一种不饱和支链脂肪酸,其末端带有内酯环。除了具有抗生素、抗真菌、抗肿瘤活性外,同时它还是一种有效的CRM1介导的出核的抑制剂。Leptomycin B和CRM1的一个保守的半胱氨酸巯基形成共价化合物,阻止CRM1和出核的目标蛋白的NES序列相互作用。这种共价作用使Leptomycin B成为这一过程不可逆的抑 制剂。已知有很多蛋白的运输,包括
,试验结果判定必须以酶标仪读数为准. 8. 所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 9. 本试剂不同批号组分不得混用。 10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。 计算 : 以标准物的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标, 在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以 稀释 倍数 ;或用标准物的浓度与OD 值计算出标 准曲线
保存。 7. 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准. 8. 所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 9. 本试剂不同批号组分不得混用。 10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。 计算 : 以标准物的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标, 在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以 稀释 倍数 ;或用标准物的浓度与OD 值计算出
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