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文献和实验llh刘丽华 请教高手我最近做western blot，结果总是不理想，目的条带总是很淡，上样量已经是60ug了，封闭用的是5%脱脂奶粉，我还应该怎么改进哦？下面是我的结果，采用的是ECL化学发光，凝胶成像系统拍照，下面一条是我的目的条带。 麻烦各位帮帮忙吧！ Mostino 转膜应充分，并提高第一抗体的使用量！ 成其瑞 用好点的抗体 volano
anlise 刚做的western，跑分离胶时发现mark的条带被拖长了，原来的线性条带变成了长方形。 考虑哪些方面的原因呢？ selleckchemcials 1. 可能是电流太强了， 可以考虑把电压调低一点~ 2. 分离胶浓度有点低，可以考虑把换成高浓度的胶~ 做实验的时候，为了得到漂亮的图，一定不要介意多花时间~我有的时候为了让条带好看，170KD的蛋白都用12%的胶，跑上3小时呢~
zhuhuachao 请问各位战友， western-blot法测得的结果是你所要检测蛋白的总蛋白还是只包括游离的蛋白？或者说该目标蛋白与其他蛋白结合以后，western-blot法结果上是否有所反应？ amygdala 一般来说，western blot检测到的是包括游离态和聚合态的总蛋白，目标蛋白与其他蛋白结合的情况下也能检测出来。能否检测取决于抗体的识别位点是否存在，通常情况下目标蛋白的抗体识别位点不会受其形成复合物影响
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