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上海华东理工大学、北京医科大学、西南科技大学、江西理工大学、贵州师范大学、北京林业等 。
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文献和实验。6)滴加正常山羊血清封闭液,室温20分钟。甩去多余液体。7)滴加 Ⅰ 抗,室温1小时或者4℃过夜或者37℃1小时(4℃过夜后在37℃复温45分钟)。8)PBS洗三次每次2分钟。9)滴加生物素化二抗,20℃~37℃ 20 分钟。10)PBC 洗 3 次每次 2 分钟。11)滴加试剂SABC,20℃~37℃ 20 分钟。12)PBS 洗 4 次每次 5 分钟。13)DAB 显色:DAB 显色试剂盒或者自配显色剂显色(镜下掌握显色程度)。14)蒸馏水洗。苏木素复染 2 分钟、盐酸酒精分化。15)脱水、透明
梯度(两个孔)取其平均值减去空白后制作标准曲线得到曲线公式。测得的样品的 OD 值(三个孔)取其平均值按标准曲线的公式运算得到蛋白浓度,按 50 μg/上样孔的标准来计算上样量,算法为:上样量= 50/蛋白浓度。注:所有得到的 OD 值必须减去背景(标曲中空白孔的 OD 值)后再计算。 样品处理: 蛋白样品:5×SDS 上样缓冲液按照 4:1 比例混合沸水浴 10 min 左右。浓度过高的样品可用 PBS 稀释后再煮样。样品煮好后 -20 ℃ 保存待用(可保存半年),样品长期保存须置于 -70
3A7)XP® Rabbit mAb#9145 检测 p-Stat3 的表达,使用不同的产品进行显色。与竞争者的 DAB 产生的信号相比,SignalStain® DABSubstrateKit 的显色强度更佳。CST 对实验细节进行了步步优化,抗体说明书也是为实验成功保驾护航的必备指南:注:使用 PLK1(208 G4)Rabbit mAb #4513 检测人结肠肿瘤中 PLK1 的表达,在经过辅助试剂的步步优化后发现,使用一抗稀释液#8112 稀释抗体,聚合物型二抗#8114 进行检测,DAB 显色试剂
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