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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 注册证号:
详见说明书
- 保存条件:
在-20℃或-80℃可长期保存
- 保质期:
详见说明书
- 英文名:
一步法无内毒素质粒 DNAout50 次售后服务
- 库存:
20
- 供应商:
上海一研
1.从少量样品(1-10mg组织或102-104细胞)中提取RNA时可加入少许糖原以促进RNA沉淀。例如加800ml TRIzol匀浆样品,沉淀RNA前加5-10μg RNase-free糖原。糖原会与RNA一同沉淀出来,糖原浓度不高于4mg/ml是不影响第一链的合成,也不影响PCR反应。
2.匀浆后加氯仿之前样品可以在-60至-70℃保存至少一个月。RNA沉淀可以保存于75% 酒精中2-8℃一星期以上或-5至-20℃一年以上。
3.分层和RNA沉淀时也可使用台式离心机,2600×g离心30-60分钟。
一步法无内毒素质粒 DNAout50 次售后服务特点
1.离心柱法;
2.快速:30min内即可完成全部操作;
3.得率高:无需裂解红细胞,直接从全血中提取DNA,可从0.2 mL健康人类全血中提取得到不低于3μg DNA;
4.操作简便:无需水浴,全部提取操作可在室温下进行;
5.高质量:所提取的DNA纯度高、得率高,可直接用于PCR、酶切、杂交等下游实验。
详细介绍:
一步法无内毒素质粒 DNAout50 次售后服务客户提供
●新鲜材料或正确保存条件下材料(组织、细胞、细菌等)
●4℃保存一周,-20℃保存一个月,-80℃保存一年血液样品(EDTA,肝素,柠檬酸钠抗凝)
●详细的背景资料:来源、特点、类型等
我们提供
基因组RNA/DNA提取、实验报告
质量保证
高纯度RNA/DNA、完整货期
3-5个工作日
一步法无内毒素质粒 DNAout50 次售后服务注意事项:
1.从少量样品(1-10mg组织或102-104细胞)中提取RNA时可加入少许糖原以促进RNA沉淀。例如加800ml TRIzol匀浆样品,沉淀RNA前加5-10μg RNase-free糖原。糖原会与RNA一同沉淀出来,糖原浓度不高于4mg/ml是不影响第一链的合成,也不影响PCR反应。
2.匀浆后加氯仿之前样品可以在-60至-70℃保存至少一个月。RNA沉淀可以保存于75% 酒精中2-8℃一星期以上或-5至-20℃一年以上。
3.分层和RNA沉淀时也可使用台式离心机,2600×g离心30-60分钟。
一步法无内毒素质粒 DNAout50 次售后服务实验步骤
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5):氯仿:异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的氯仿:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)抽提两次,氯仿:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
胰蛋白酶(猪胰) 进口、国产 英文名称: Trypsin(porcine pancreas) 含量: BR,100-250u/mg
脂酶 进口、国产 英文名称: Lipase(pocine pancreas) 含量: 生物技术级,0.5u/mg
脂肪水解酶 进口、国产 英文名称: Lipase(Candida) 含量: BR,类型F-300,130u/mg
氯化酵素 进口、国产 英文名称: CAT 含量: BR,类型III,25u/mg
脆壁质酶 进口、国产 英文名称: Lysozyme(Chinken egg) 含量: USP级,1:30000
溶葡萄球菌酶 进口、国产 英文名称: Lysostaphin 含量: 高纯,1:15000
溶菌酶氯化物 进口、国产 英文名称: Lysozyme chloride 含量: 高纯,1:10000
1,4-β-D-葡聚糖葡糖苷水解酶 进口、国产 英文名称: Cellulase(Trichoderma Vride G) 含量: USP级,1:3000
进口、国产 英文名称: Cellulase Onozuke R-10 含量: BR,1:4000
半纤维素酶 进口、国产 英文名称: Hemicellulase 含量: BR,1:250;250USP u/mg(1000BAEEu/mg)
β-葡糖苷酸酶 进口、国产 英文名称: β-Glucuronidase 含量: USP级,1:2500;2500USPu/mg(BAEE1万u/mg)
β-糖苷酶 进口、国产 英文名称: 苦杏仁苷酶β-Glucosidase from almonds 含量: BR;1:250
α-D-葡萄糖苷酶 进口、国产 英文名称: Maltase 含量: 组织培养级,1:300
枯草杆菌蛋白酶 进口、国产 英文名称: Proteinase(Bacillus subtilis) 含量: BR,3万u/g
L-乳酸脱氢酶 进口、国产 英文名称: Lactic dehydrogenase(rabbit muscle) 含量: BR,5000u/g
骨胶原酶 进口、国产 英文名称: Collagenase 含量: BR,2000-5000u/mg
玻璃酸酶 进口、国产 英文名称: Hyaluronidase 含量: 高纯,20000U/mgLALBA/alpha Lactalbumin 乳清蛋白α抗体 0.1mlRabbit Anti-pig IgG/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350标记的兔抗猪IgG 0.1ml
RPA70 单链结合蛋白70抗体 0.2mlDonkey Anti-Goat IgG/RBITC 罗丹明标记的驴抗羊IgG 0.1ml
BACE1/ASP2 β分泌酶抗体 0.1ml
BNP/proBNP 脑纳素前体抗体 0.1ml
Caspase-3(Active) 活化半胱胺酸蛋白酶蛋白-3抗体 0.1ml
一步法无内毒素质粒 DNAout50 次售后服务Phospho-c-Kit(Ser741) 磷酸化原癌基因c-kit抗体 0.1ml
Integrin alpha 2b/CD41 血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa抗体 0.1ml
CDK2 周期素依赖性激酶2抗体 0.1ml
phospho-c-Jun (Ser73) 磷酸化原癌基因c-Jun抗体 0.1ml
PAR3 非典型蛋白激酶C特定相互作用蛋白抗体 0.1ml
Cullin 2 Cullin2抗体 0.2ml
DRD5/Dopamine receptor 5 多巴胺受体D5抗体 0.1ml
ADAM20 去整合素样金属蛋白酶20抗体 0.2ml
eIF3H 真核翻译起始因子3H抗体 0.1ml
ESM1 内皮细胞特异性分子1抗体 0.1ml
KLHL7 kelch样蛋白7抗体 0.2ml
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文献和实验只适合酶切测序等。而我用无内毒素大提试剂盒时,就没出现这种情况,溶度有1000多微克每毫升。所以,建议:1.要转染最好就用无内毒素大提试剂盒2.已小提,想纯化滤菌用于转染建议参考“将质粒溶液进行浓缩,每50微升质粒溶液加2微升5mol/L NaC1混匀,冷的无水乙醇沉淀质粒,10 000r/min离心5min,弃去上清,用70% 的乙醇洗1次,无菌条件下真空干燥,以灭菌生理盐水溶解质粒至质量浓度为1 微g/微L,一20度保存。质粒转染前,行酶切及测序鉴定。”
温度越来越低[2 ] ,从而达到最佳扩增条件的方法。我们在构建人 CD137 - hIgG1Fc - pCDNA3 融合蛋白真核表达载体以及在检测HBV DNA 多聚酶基因突变的过程中运用降落PCR 进行了扩增目的基因的尝试。1 材料和方法1.1 质粒含有人CD137 全长cDNA 序列的pCDNA3 质粒(CD137 - pCDNA3) ,由Herbert Schwarz 教授惠赠; 含hIgG1 FccDNA的PGEM - T质粒由第二军医大学曹雪涛教授惠赠; HBV DNA ,从6 位慢性HBV 感染者血清
程度等等。 现在大部分质粒提取都用试剂盒, 根据实验需要我们可以选择不同级别的产品: 1. 从纯度上看:常规操作(如酶切、PCR、测序、文库筛选、连接和转化),普通纯度的质粒即可;对于转染实验,则需要无内毒素质粒提取试剂盒。 2. 从提取量上看:1-20μg,小量提取试剂盒;20-40μg,中量提取试剂盒;大于40μg,大量提取试剂盒。 3. 宿主菌类别上:主要分为普通细菌质粒提取试剂盒,真菌质粒提取试剂盒,酵母菌质粒提取试剂盒。 举例:SunShinecleanTM无内毒素质粒小量抽提试剂盒采用新型
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