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- 百奥莱博
- 北京
- JN0016-EQV
- 2025年07月11日
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- 详细信息
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- 技术资料
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冷藏
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长期
- 英文名：
Pfu DNA Polymerase
- 库存：
448
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产供应北京Pfu DNA聚合酶报价，我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。
北京百奥莱博科技有限公司专业生产供应北京Pfu DNA聚合酶报价，产品信息：
类别：核酸扩增(PCR)
英文名：Pfu DNA Polymerase
| 产品名 | 产品编号 | 包装规格 |
| Pfu DNA聚合酶 | JN0016 | 250U|250U×5 |
规格：250U|250U×5
编号：JN0016
英文名：Pfu DNA Polymerase
产地：国产|进口
本酶为Pyrococcus furiosus中分离的pfu DNA pol基因在大肠杆菌中进行表达后经多步纯化分离而得。Pfu DNA聚合酶具有3´→5´外 切酶(校正)活性，当聚合反应发生碱基错配时，聚合酶的校正活性可将错配的碱基切除。Pfu DNA聚合酶为使用范围最广的高保真DNA聚合酶，其错误率仅为1.3x10-6，推荐Pfu DNA聚合酶用于需高保真的PCR反应。
产品组成：
| 组份 | JN0016-250U |
| Pfu DNA 聚合酶（5U/μl） | 50μl |
| dNTP混合液(各10mM) | 200μl |
| 10×Pfu DNA Buffer with Mg2+ | 2ml |
产品用途：用于要求保真度比较高的PCR反应，包括克隆PCR、DNA片段拼接、引入 突变、全基因合成，DNA片段的补平等（参见实验方案）。
使用建议：
Pfu DNA聚合酶产生的PCR产物为平滑末端，无3´端"A"突出，其PCR产 物的克隆有几种方案。
1、PCR前引物进行5´端加磷修饰或将PCR产物磷酸化处理后再直接克隆 于平滑末端的载体中（参见实验方案）。
2、将产物3´末端加A后再与T载体连接（参见实验方案）。
3、引物中引入15bp与载体同源序列，利用BalbRec PCR产物一步定向无缝克隆试剂盒（Cat# JN0001）直接连接到目的载体。
由于Pfu DNA聚合酶的校对活性可引起引物从3´端被部分降解。因此在设计引物时应适当增加引物的长度，理想的引物长度为20-30碱基。另外为了减少由3´→5´外切酶活性引起的引物降解，尽量在冰上配制反应体系，并最后加入Pfu酶。
应用实例：
图例一）50μl扩增体系中，以5ngλDNA为模板，对500bp～6.0kb片段的扩增结果。
泳道1：0.5kb；泳道2：1.0kb； 泳道3：2.0kb；泳道4：3.0kb； 泳道5：4.0kb；泳道6：6.0kb 泳道M：1kb DNA Marker；
图例二） 50μl扩增体系中，分别以50ng～0.05ng人基因组DNA为模板，可对特定基因片段（380bp）进行很好的扩增。
泳道1：50ng；泳道2：5ng；泳道3：0.5ng；泳道4：0.05ng；泳道M：DNA 2000 Ladder
常用反应体系（50μl）
| 10×Pfu Buffer | 5μl |
| 上游引物 | 0.2-1.0μM(终浓度) |
| 下游引物 | 0.2-1.0μM(终浓度) |
| dNTP(各10mM) | 1.0μl |
| 模板 | 1-50ng（质粒） |
| 10ng-1μg(基因组) | |
| Pfu | 0.25μl（1.25U） |
| ddH2O | 至50μl |
| *Mg2+终浓度为1.5mM | |
常用PCR循环：
当扩增片段<3K：
| 温度 | 时间 | 循环数 |
| 94℃ | 1分钟30秒 | |
| 94℃ | 30秒 | 30次循环 |
| 57℃ | 30秒 | |
| 72℃ | 根据产物长度调整，60秒/kb | |
| 72℃ | 5分钟 | |
| 4℃ | 保温 |
当扩增片段≥3K（推荐引物长度≥30bp）：
| 温度 | 时间 | 循环数 |
| 94℃ | 20秒 | |
| 94℃ | 5秒 | 30次循环 |
| 68℃ | 根据产物长度调整，60秒/kb | |
| 72℃ | 5分钟 | |
| 4℃ | 保温 |
质量保证：经多次柱纯化，SDS-PAGE检测纯度大于95%；PCR 方法检测无大肠杆菌DNA残留，无核酸内、外切酶污染。
活性定义：在74℃条件下，30分钟内催化10nmol dNTP的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量为一个单位。
北京Pfu DNA聚合酶报价专业优质供应商：北京百奥莱博科技有限公司
关键词：Pfu DNA Polymerase,Pfu DNA聚合酶,JN0016
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