DAB法显色试剂盒(小鼠/兔IgG)折扣价

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名称：DAB法显色试剂盒(小鼠/兔IgG)折扣价
品牌：百奥莱博
英文名：Western Blotting Mouse/Rabbit IgG DAB Chromogenic Reagent Kit
产地：国产|进口
编号：QN1159
本试剂盒主要用于western blotting的DAB显色，含有抗小鼠/兔IgG酶标二抗。

SDS-PAGE电泳后，蛋白质按照分子量大小分离，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）后，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶标记的第二抗体起反应，经过底物显色以检测电泳分离的特异性的蛋白。

试剂盒组分：
封闭试剂————————————30g
10倍浓缩抗体稀释液———————50ml
酶标二抗————————————0.5ml，效价1:500～3000
20倍DAB浓缩显色液-———————5mlA+5mlB。

常规电泳转膜后:
1) 清洗转印膜：将膜剥离下后，作好标记，一般在左上角剪一缺口。室温用TBS-T 漂洗3 次每次5min,以尽量洗去转印膜上的SDS，防止影响后面的抗体结合。
2) 按5g 封闭试剂加100ml 双蒸水计，配制膜封闭液，配好的膜封闭液为乳白色悬液，将漂洗过的转印膜，封闭液内，摇床震动，室温封闭30min。用TBS-T ，PH7.6 洗液，室温漂洗3 次每次5min。
3) 将10×抗体稀释液用双蒸水稀释成1×（10ml 10×抗体稀释液加入90ml 双蒸水，混匀，可4℃保存三个月）。此稀释液可作为一抗和二抗的稀释液。
4) 用1×的抗体稀释液稀释抗体。根据用量以及一抗的推荐稀释浓度来稀释一抗。将杂交膜放入杂交袋中，加入一抗工作液，封口，4℃孵育过夜或37℃摇动孵育2h。此用过的抗体一般可回收第二天再使用一次。注：如果所加一抗不同，可在此步将膜沿电泳方向剪成条，分别作好标记，分开孵育。
5) 用TBS-T ，PH7.6 洗液，室温漂洗3 次每次5min。
6) 用稀释好的抗体稀释液稀释抗体。根据用量，按10ml 抗体稀释液加入10ul HRP 标记二抗的比例，配制二抗工作液。将杂交膜放入杂交袋中，加入二抗工作液，封口， 37℃摇动孵育1h。此用过的抗体一般可回收第二天再使用一次。
7) 用TBS-T ，PH7.6 洗液，室温漂洗3 次每次10min。
8) 配制DAB 显色：根据用量，取TBS-T 4ml，加入DAB 显色液A、DAB 显色液B 各200ul，混匀，加在膜正面，室温下显色。在目标条带显出后，而且背景未出时，放入水中终止显色。

注意事项：
1. 请根据一抗来源选择试剂盒。
2. western blotting DAB显色法操作简单，但其敏感性与ECL发光发有一定的差距，一般只适用于丰度较高的蛋白。
3. 可以根据显色结果来优化实验反应时间。如背景过深，可延长膜封闭时间，加长最终漂洗次数与时间。如果条带过弱，可延长抗体孵育时间。
4. 如果完全没有条带，请检查前期蛋白处理及实验过程， 如果确认无误，反复两次依旧无结果，请换用ECL发光法显色。
5. TBS-T（0.01M）配制方法：称取NaCl 8.5g ，Tris 1.21g ，用800ml 的双蒸水溶解，用盐*(代"酸")调PH 到7.6，再加入0.5ml Tween－20，用双蒸水加至1000ml，混匀即可。（也可按照自己的配制习惯来配制）

储存条件：-20℃避光，有效期一年。

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·磷酸葡萄糖变位酶
编号：QN0467
英文名称：Phosphoglucomutase
规格：200U
本品仅可用于科研实验

别名：蚯蚓酶;蚓激酶;磷酸葡萄糖变位酶;磷酸葡萄糖变位酶
CAS号：9001-81-4
储存条件：2～8℃
浓度：13.3 mg protein/ml(Biuret)
酶活：143 units/mg protein

·青蒿*(代"素")
编号：QN0034
英文名称：Artemisinin
规格：5g
本品能显著提高淋巴细胞转化率，增强抗体的免疫功能。

CAS：63968-64-9
分子式：C15H22O5
分子量：282.33
储存条件：4℃
性状：无色针状结晶

·胃蛋白酶抑制
编号：QN0438
英文名称：Pepstatin A
规格：5mg
本品酸性蛋白酶抑制剂，包括胃蛋白酶、血管紧张肽原酶和组织蛋白酶D以及很多其他蛋白酶，有效浓度为1μM。

别名：抑肽素
CAS号：26305-03-3
分子式：C34H63N5O9
分子量：685.89
储存条件：4℃
性状：白色粉末

·腺苷-5"-二磷酸二*盐
编号：QN0569
英文名称：Adenosine-5"-diphosphate disodiu*(代"m") salt
规格：500mg|1g
ADPNa2可用于测定丙*(代"酮")酸激酶的活性，制备多核苷酸。腺苷5"-二磷酸(ADP)是通过ATP合成酶转化成ATP，从而参与能量储存和核酸代谢的腺嘌呤核苷酸。 ADP通过与ADP受体P2，参与能源和核酸代谢。

别名：5"-二磷酸腺苷二*盐
CAS号：16178-48-6
分子式：C10H13N5Na2O10P2
分子量：471.16
性状：白色结晶性粉末
储存条件：-20℃


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·多聚-L-赖*酸(3-7万)
编号：QN1265
英文名称：Poly-L-lysine hydrobromide mol wt 30,000-70,000
规格：25mg
多聚赖*酸溶液是广泛应用的组织切片与玻片黏合剂，该多聚阳离子分子与组织切片上的阴离子相互作用会产生较强的黏合力。培养瓶表面的性质对于细胞培养至关重要，细胞表面的糖蛋白(阴性)易于吸附在亲水性的表面上，因而细胞培养表面如果有相当含量的阳性电荷更能促进细胞吸附，这正是运用多聚赖*酸优化细胞培养表面的重要所在。

应用：
适用组织学，免疫组织化学，冰冻切片，细胞涂片，原位杂交等使用的玻片的防脱片处理，以防实验操作过程中组织掉片。也可用于细胞培养，增加细胞贴壁能力。

别名：聚-L-赖*酸(**酸盐);多聚赖*酸
CAS号：25988-63-0
分子量：30,000-70,000
储存条件：2～8℃,有效期2年。

玻片处理：
1. 灭菌水稀释聚赖*酸溶液，一般的使用浓度为0.01％。
2. 将玻片浸在稀释的多聚赖*酸溶液5分钟。注意增加时间不会提高包被效果。
3. 在60℃烘箱1小时干燥，或室温18-26℃过夜干燥待用。

注意：
1. 每100mL已稀释的多聚赖*酸溶液要包被的玻片40-90张， 超过90张片子将影响其黏合力。
2. 用之前的玻片必须保持清洁。必要时用含1% HCl的70%乙醇溶液来清洗。
3. 释过的多聚赖*酸溶液要放在2～8℃，至少在3个月内是稳定的。
4. 用过的稀释液要过滤，若出现浑浊或长菌要丢弃
5. 多聚赖*酸浓度可以高一些，吸出来的可以重复利用至少20次。

培养瓶处理：
1. 包被培养板或者是培养瓶，一般多聚赖*酸浓度为0.01％，
2. 准备100ml三蒸水，经高压灭菌处理。
3. 0.01%的多聚赖*酸以50微升每平方厘米的量均匀涂于培养底物的表面，室温下静置5min，吸除多余液体。
4. 加入灭菌水，反复冲洗三次，无菌操作。
5. 处理后无菌晾干备用。
6. 回收后保持无菌的多聚赖*酸可反复利用。


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