EBTr (NBL-4)牛胚气管细胞|EBTr (NBL-4

细胞名称：	EBTr (NBL-4)牛胚气管细胞
组织来源：	牛胚气管细胞
培养基：	89%培养基+10%FBS+1%双抗

华拓生物科技有限公司（www.otwobiotech.com）技术咨询

EBTr (NBL-4)细胞产品介绍：
发货方式：
复苏后发货：我们复苏细胞后发货，货期一周左右，免运费。（气温较好建议复苏后发货）
冻存发货(干冰运输）：需额外增加干冰运费，选择干冰运输的我们发两管细胞，为了保证客户接种可靠性多发一管。（气温低于0℃须冻存发货）
细胞发货采取专业的运输包装，并选择最快捷的运输方式（顺丰速运或其他空运快递）
本公司细胞引种来源：ATCC、DSMZ、ECACC、武大细胞库、上海生化细胞所、中国科学院典型培养物保藏委员会等


细胞处理方法：
一、贴壁细胞
1、 接收到细胞，肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞 100X,200X 各一张）。
2、用 75%的酒精消毒外包装,在超净工作台内打开外包装。
3、严格遵循无菌操作规范，打开细胞培养瓶。
4、37度平衡1-2小时。
5、用移液管吸取培养基，到50ml离心管中，剩下细胞密度达到80%至90%可以传代，如没有达到添加6ml新鲜培养基继续培养。
6、如果肉眼检查上清有细胞，对50ml上清进行离心收集细胞，如果细胞连片状态，弃掉上清对收集的细胞进行胰酶消化（1ml胰酶37度），接种培养。

二、悬浮细胞
1、接收到细胞，肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞 100X,200X 各一张）。
2、用 75%的酒精消毒外包装,在超净工作台内打开外包装。
3、严格遵循无菌操作规范，打开细胞培养瓶。
4、细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出（严禁直接倾倒）。
5、1000rpm，5min 离心，用吸管小心吸出上清，加入培养基，重悬细胞。
6、将重悬好的细胞转入六孔板或者细胞培养瓶种，加入新鲜培养基，置于 37℃，5%CO2 培养（大部分细胞）。

EBTr (NBL-4)细胞培养操作：华拓细胞培养操作指南
细胞常见问题分析：细胞培养常见问题分析

细胞在发货前进行质检：
1、细胞存种的活性检测
2、细菌、真菌、霉菌污染物镜检
3、衣原体、支原体检测（荧光法、培养法等）

产品质量保证及售后：
1、 细胞为三代以内，活体。运输过程中细胞出现污染和状态不好，我们完全免费重新发货。
2、 实验过程中若确定是客户问题，客户仅需支付物流和耗材费用，我们可重新发货。其他根据情况灵活处理。
3、 产品使用过程中，华拓生物可提供技术上的指导。

EBTr (NBL-4)细胞培养常见注意事项：
1、收货时，如不能在收到细胞后及时操作处理细胞，T25及离心管发货的细胞可以消毒后在培养箱过夜，干冰发货的可以在确认干冰未完全升华时将细胞直接放回液氮或者-80度冰箱，若干冰完全升华，需即刻复苏细胞；T25瓶及离心管发货的细胞收货后在37度培养箱平衡两小时以上，再开始处理细胞，平衡是为了让细胞尽快适应培养箱环境。
2、贴壁细胞在消化时，因为每个客户用的胰酶活力及消化步骤、试剂都是不一样，不能完全规定消化时间，以科研人员经验为准。 对于消化这步，如果对该细胞经验不多，无法准确掌控胰酶作用时间，建议可以按照下述操作：胰酶首先复温到室温后加入细胞，然后每隔30秒，即吹打下细胞，如果能够吹打散细胞，加入完全培养基终止消化，把细胞打散后，离心去除胰酶加新的培养基重悬细胞接种 ，如果30秒吹打不下，再等30秒重复操作。注意消化时间，不要过度，细胞变圆可以吹下来即可终止。
3、传代比例建议1:2-1:3，长得比较快的细胞可以1：3，比较慢的按1:2传代；传代后，建议不要使用传代前培养所使用的培养基，会有大量细胞碎片甚至导致细胞死亡的风险；细胞状态不好或者生长比较慢时，可以通过增加血清浓度调整细胞状态及生长速度；细胞碎片较多、背景较脏时，贴壁细胞用PBS漂洗两次、悬浮细胞打散后低速离心（900rpm，3min）能有效改善；建议不要随意更换培养基，因实验需要，可以逐步驯化，也可以联系咨询我们。
4、EBTr (NBL-4)细胞冻存时，部分长得比较慢的细胞，冻存的细胞密度要稍微大点，以防止复苏后生长困难；冻存液中含的DMSO请使用细胞级DMSO，同时浓度不要太高，部分细胞在10%DMSO条件下冻存会死亡，所以DMSO浓度5%-8%是比较推荐的浓度；冻存时建议设置冻存检测，即取0.2-0.3mL的冻存液重悬的细胞于一个冻存管中，与正常体积冻存的细胞共同冻存，至液氮后复苏检查冻存结果，冻检合格前，留一部分细胞继续培养，以防万一；细胞冻存及复苏遵循慢冻快融的原则，即冻存时温度不能急剧下降，应控制温度缓慢下降，复苏时应快速融化，融化后尽快加入培养基中。